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科研学霸天团，48小时有问必答

问细胞外泌体蛋白CD63鉴定

不加糖123

解决了吗？我的跟你一样，亲本细胞阳性对照有条带，但是外泌体样本没有

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问链霉亲和素与生物素

是TTT

结合条件有三个:配体的种类，结合的程度，依附的部位生物素修饰的多肽正常连即可

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问请教一下

loveliufudan

Tris-EDTA-Mg缓冲液通常用于DNA的保存和纯化等实验中，常用的配方为Tris-HCl 10 mM、EDTA 1 mM和MgCl2 10 mM。具体的配制方法如下：称取所需量的Tris base（Tris-HCl的原料）和EDTA，加入去离子水中，调整pH至8.0。加入所需量的MgCl2。加入去离子水至最终体积，混合均匀即可。需要注意的是，Tris-HCl的pH会随温度的变化而变化，因此在

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问四甲基乙二胺缓冲溶液TEMED-HCl缓冲溶液 PH=4.7如何配置?

土井挞克树

配置步骤：准确称取1.1621克四甲基乙二胺,先配成1000毫升10mmol/L的TEMED溶液,再以1mol/L的盐酸调节PH到4.7即可.

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问关于GBR膜屏障测试:看到有人做的把细胞接到膜上培养，染色后看细胞浸润深度，不太理解怎样接到膜上培养7天，怎样保证细胞只在表面呢？

土井挞克树

有专门的接种膜，细胞接种后只停留在表层，不会向下增长

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问大鼠抑郁症模型中，足底电击怎么实现？

sswei

将实验组大鼠暴露于带电的穿梭箱的一侧，进行60次不可逃避的电刺激，电流0.85mA，每次电击随机5-25秒，每次电击后间隔5-25秒开始下一次电击。

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问胰酶活性为4xUSP是啥意思啊？是美国药典标准的四倍？

蛋白111111

4×usp代表里面胰蛋白酶，胰脂肪酶，胰淀粉酶活性各是多少呢

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问病毒盲传1代PCR阴性，还要继续盲传吗

loveliufudan

如果病毒盲传的1代PCR结果是阴性，这通常意味着该代细胞中没有病毒存在。但是，为了排除假阴性的可能性，建议继续进行盲传并进行下一代PCR检测。如果连续3代PCR结果都是阴性，那么可以认为该细胞中不存在该病毒。但是，具体是否需要继续盲传取决于实验设计和病毒检测的灵敏度要求。

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问产蛋白酶菌株的筛选及酶活力的测定数据处理方法和参考文献是什么？

loveliufudan

产蛋白酶菌株的筛选和酶活力的测定方法和数据处理方法可能因实验条件、实验设计等因素而有所不同，常见的方法和参考文献如下：筛选方法：通常使用胶体酶原酶切片法（gelatinase zymography）或琼脂糖酶切片法（casein zymography）筛选产蛋白酶菌株。其中，胶体酶原酶切片法以明胶为底物，可检测出凝胶中明胶酶、胶原酶等蛋白酶活性；琼脂糖酶切片法以琼脂糖为底物，可检测出凝胶中卟啉蛋白

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问为什么高浓度平菇水提物喂养果蝇体内抗氧化活性要比中浓度低（中浓度喂养果蝇体内抗氧化活性最高，高浓度比中浓度低但比低浓度大）？

loveliufudan

这可能涉及到营养毒理学中的U形曲线效应，也称为J形曲线效应。在某些情况下，物质的作用效果会随着剂量的增加而先增加后减弱，形成类似于字母U的曲线。在你提到的情况下，可能是高浓度平菇水提物含有过高的活性成分，导致果蝇的抗氧化系统出现了负反馈，从而使抗氧化活性下降。而中浓度则处于抗氧化系统的最优工作范围内，因此抗氧化活性最高。需要注意的是，U形曲线效应并不适用于所有的物质和生物效应，因此具体情况需要具体

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问小鼠MCAO造模求助

油腻鸭呀

这是瑞沃德线栓的问题，我认为是他家品控问题，它家线栓的线栓头没堵住，而且他家线栓很有意思，试用装效果最好，买的时候看看有没有质检员检验。

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问质谱图在生物医学中作用

sswei

质谱图用二维方法来看。横坐标代表的是分子离子峰及碎片峰，这有助于判断物质的分子量及可能的主要结构。纵坐标代表的是分子碎片的稳定程度，这有助于判断碎片相近物质区分，比如可以通过质谱图直接判断二甲苯的三种构型，就是利用这个方法。质谱图分析1、核对质谱图首先要核对质谱图是否合理，比如基峰，一张谱图只能有一个基峰，如果检测器调整的不合适或者样品浓度过大，则会有很多基峰。另外要观察同位素峰是否存在，有的同位

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问流式设门

loveliufudan

在没有对照的情况下，可以使用单荧光染色的细胞作为门控制。选取一个单荧光染色的细胞，比如说只标记CD4，而不标记其他细胞表面标记物的细胞，将其设为负对照门，这样可以帮助区分阳性和阴性细胞。如果你需要定量分析，可以使用流式细胞计数器进行计数。但需要注意的是，使用单荧光染色细胞作为门仅适用于仅有一个荧光通道的情况，如果有多个荧光通道需要使用时，需要针对每个通道设置不同的门。

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问rcs曲线两个p值分别代表什么意思

sswei

限制性立方（Restricted cubic spline，RCS）就是分析非线性关系的最常见的方法之一。P-Nonlinear <0.05，可以说自变量与因变量之间存在非线性关联。

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问马尔文Zetasizer Nano ZS90测出粒径数值怎样分析做图

loveliufudan

以下是一些常见的数据分析和图表制作方法：1.数据分析平均粒径：该值代表样品中颗粒的平均大小。您可以通过选择软件中的“平均粒径”选项来获得该值。多峰分布：如果您的样品中存在多个颗粒大小的峰值，则可能存在多峰分布。您可以通过选择软件中的“多峰分布”选项来确定是否存在多峰分布。粒径分布：该值表示颗粒在不同大小范围内的分布情况。您可以选择软件中的“粒径分布”选项来获得该值。2.图表制作粒径分布图：该图显示

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问做克隆基因时，明明蓝白斑都有，而且做菌液PCR也有条带，为什么老是测序失败啊

loveliufudan

尽管您看到蓝白斑和PCR条带，但是测序失败可能有多种原因，例如：质量问题：测序需要高质量的DNA样本，而低质量或受到污染的DNA样本可能会导致测序失败。您可以尝试使用纯化和质检DNA样本的方法来解决此问题。序列重叠：如果您的目标基因有高度相似的序列或存在同源基因，这可能导致测序失败或难以解析。您可以尝试设计更特异性的引物或使用高通量测序技术来解决此问题。测序仪问题：测序仪的性能或参数设置可能会影响

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问lps与caco2求问

loveliufudan

黏附蛋白的表达和分泌受到多种因素的影响，可能不仅仅受到LPS的影响。因此，黏附蛋白没有下降可能是由于以下几个原因：1.实验操作不当：在进行实验时，可能存在操作不当，例如LPS的处理浓度、时间不够或者细胞密度不够等。需要确保实验操作的准确性和一致性。2.基因表达变化需要一定的时间：黏附蛋白的表达和分泌可能需要一定的时间才能发生变化。在LPS处理Caco-2细胞24小时后可能仍未观察到显著的黏附蛋白表

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问在第二向电泳中，为什么溴氛蓝条带都跑到玻璃板下缘，蛋白质却只跑一半，怎么弄？

loveliufudan

在第二向电泳中，溴氟蓝条带跑到玻璃板下缘，蛋白质却只跑一半可能有以下原因：电泳时间不足：如果电泳时间不足，可能会导致溴氟蓝染料条带和蛋白质未被完全迁移。建议增加电泳时间，以确保条带和蛋白质被完全迁移。蛋白质溶液中含有大量盐或油脂：如果蛋白质溶液中含有大量盐或油脂，可能会影响电泳的迁移效果，从而导致蛋白质只跑一半。建议在蛋白质提取过程中彻底去除盐和油脂，或者使用其他蛋白质提取方法。电场强度不合适：如

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问这篇题为RNA介导的基因沉默实验中的注解和引用文献在哪里可以看到？

土井挞克树

可以在pubmed和中国知网上搜索到这篇文献。

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问请问一下，做的是氧化石墨烯–COOH和胶原蛋白–NH2反应，用95%乙醇做溶剂，文献中没看到要调pH，这个反应不调ph影响大吗

sswei

这个反应要调PH，不调PH有影响。

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