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        丁香实验推荐阅读
        基因敲除结核杆菌助力研究细胞焦亡的信号通路

        2020 年 10 月 21 日,武汉大学章晓联、殷雷老师作为共同通讯作者在 Science Advances 在线发表研究成果 “Mycobacterial EST12 activates a RACK1–NLRP3–gasdermin D pyroptosis–IL-1β immune pathway”,该研究鉴定了一种从M. tbH37Rv 分泌的细胞焦亡诱导蛋白 EST12(Rv1579c)。导读:细胞焦亡是一种程序性细胞死亡的炎性形式,与消除病原体感染有关。该文章介绍了一种诱导巨 ...

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        CRISPR 基因编辑利器:Nature 子刊整合 30 种 gRNA 设计工具,强推这 2 种!

        2020 年 10 月,Emmanuelle Charpentier 与 Jennifer Doudna 因为在「魔剪」CRISPR 用于基因编辑的原创性工作获得了诺贝尔化学奖。此时,离她们关于「魔剪」最重磅论文的发表,才仅仅过去 8 年。虽然 CRISPR 因其方便好用著称,如此短的发展历史,意味着这项技术还有极大的提升空间。在 CRISPR-Cas9 系统中,Cas9 核酸内切酶需要与一段长度约为 100 核苷酸的 Guide RNA(gRNA)的形成复合物,并在 gRNA 与目标序列结合的引导 ...

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        种草一款无细胞蛋白质表达试剂盒

        先来看下传统重组蛋白表达系统:传统重组蛋白表达系统应对的挑战:操作流程长:5天-4周时间很多蛋白不能在细胞内成功表达不可以改造目标蛋白以大肠杆菌为代表的原核蛋白表达系统是常用的表达系统,具有表达量高和成本低的优点,但是蛋白质翻译后缺乏加工机制(比如形成二硫键和蛋白糖基化等),且很难保留生物活性。以甲醇毕赤酵母为代表的酵母蛋白表达系统,具有表达量高,可诱导,糖基化机制接近真核生物等优点,但是部分蛋白产品易降解,表 ...

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        从冻存的全血样本中快速分离出基因组 DNA

        【实验案例】动物基因组试剂盒提取全血基因组使用动物基因组提取试剂盒,从冻存的全血样本中快速分离出基因组DNA。【样品】冻存的全血样本【样品准备】将冻存的血液样品充分融化后混匀。【操作步骤】1.活化硅胶膜将吸附柱放入收集管中,加入250 ul Buffer BL,12,000 g离心1 min,活化硅胶膜。2.样品消化(1)取20 ul Proteinase K至1.5 ml离心管底部,然后加入200 ul充分混匀的全血样品,涡旋振荡10 s。(2)加入200 ul Buf ...

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        有效性超90%的新冠疫苗,“低温”是关键

        目前获得FDA紧急使用授权的mRNA核酸疫苗A,需要-70摄氏度的温度条件下保存; 这些超低温储存的疫苗在装有干冰的容器中从制造商那里运出,配送中转中心或疫苗接种点应在收到疫苗后24小时内重新包装干冰,并每5天重新包装一次,以保持所需的温度。如果疫苗放在2到8摄氏度的冰箱中保存,须在5天(120小时)内使用。

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        性激素六项这么看,简单明了!

        性激素六项检测,是内分泌激素系统检查。但这六项都包含什么?分别有什么意义?什么时候检查合适?大多数人都说不清楚,今天我们来详细介绍一下。性激素六项是女性的基础检查。检查基础性激素前至少一个月不能用性激素类药物,包括黄体酮、雌激素类,否则结果不可靠。当然,治疗后需要复查性激素的除外。检查性激素可以在月经的任何时间,每个时段的正常值不同。什么是基础性激素水平?但是诊治不孕症一定要先了解基础性激素水平,所以要选择月经周期 ...

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        老师说「原红与早幼红」就像小李子 20 年变化那么大!为啥我看不出来?

        晃晃悠悠,规培轮转到了细胞室,显微镜、骨髓片、认细胞,时隔多年,又一次落入细胞的魔掌之中,我认了——但就是,真的认不准。在细胞室我感受到了一种诸事不顺畅的感觉。1.显微镜镜下的方向和实际的方向是反的,对于我这样一个连左右都要思考那么片刻的马路杀手来说,要以一定的顺序来阅片,计数分类 200 个有核细胞,简直太难了。血涂片阅片顺序结果就是看着看着,就不记得这个片该怎么移动了,顺序乱了,脑子懵了,再来一次。除了方向的困难,还有双眼看 ...

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        他在尸检时偷走患者大脑,切成 240 块私藏 43 年:史上最疯狂的医生

        皮肤被剥离,头盖骨被锯开,十二对脑神经被逐一切断,随后是颈动静脉、椎动静脉……一颗大脑被小心翼翼地从颅腔中取出,第一次呈现在世人面前。这是一颗天才的大脑,在过去的 76 年里,无数天马行空的设想从这里产生又被证明:E = mc²、光电效应、量子力学、狭义和广义相对论……这是开创了现代物理学先河的大脑,这是被时代杂志视为「纯粹智力的化身」和「世纪人物」的天才的大脑。这是爱因斯坦的大脑。偷走爱因斯坦的大脑「它绝不能就这样被焚毁。」当托马斯・哈维 ...

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        用光改变世界,光遗传学技术原理及光敏蛋白全介绍

        光遗传学(optogenetics)是结合了光学(optics)及遗传学(genetics)的技术,借助其,我们能在活体动物甚至是自由运动的动物脑内、脊髓、外周神经内,精准地控制特定种类神经元的活动。光遗传学在时间上的精确度可达到毫秒级别,在空间上的精确度则能达到单个细胞级别。2010年,光遗传学被Nature Methods选为年度方法,同年被Science认为是近十年来的突破之一。这项技术目前在神经科学领域应用非 ...

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        过氧化氢灭菌与传统灭菌对比详解

        当前市场上的常规灭菌方法主要包括臭氧微醇灭菌,紫外线辐射灭菌,甲醛灭菌和当前出现的过氧化氢灭菌。上述杀菌方法在各种场合都有使用,但是传统的细菌方法在实际应用中存在致命的缺点。为了克服传统灭菌方法所带来的问题:灭菌效果差,对设备的腐蚀性高以及对人体的危害等,双氧水空间灭菌系列设备应运而生。过氧化氢,一种有效的消毒剂首先,过氧化氢(H2O2)是一种天然存在的化学物质,广泛存在于空气和水中。早在 18 世纪,人类就发现并开始使 ...

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        化学遗传学技术原理及其应用

        化学遗传学技术(或称药理遗传学技术)是近年来与光遗传学一起出现的重要新技术。该技术通过对一些生物大分子实行改造,使其能和先前无法识别的小分子进行相互作用,从而达到可控、可逆(可以随时加入或除去化合物,从而启动或中断特定的反应)控制生物大分子的活性,该技术已经在信号转导、药物开发、功能基因组学等方面的研究中得到了广泛的应用。他们被广泛用于以细胞特异性、无创地增强或抑制神经元的活动。虽然DREADD缺乏像光遗传学那 ...

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        钙成像、电压成像及神经递质探针原理介绍

        成像技术(Imaging)一、钙离子成像技术(Calcium imaging)钙离子成像技术(Calcium imaging)是指利用钙离子指示剂监测组织内钙离子浓度的方法。在神经系统研究中,我们常用钙离子成像技术监测神经元内钙离子的变化,提示神经元活动。有了钙成像技术,原本悄无声息的电生理活动就变成了一幅形象地、斑斓闪烁的壮观影像,研究人员可以同时大量追踪神经元活动,研究其关系,因而被全世界神经科学家们追捧。1)钙离子成 ...

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        Nature 子刊:林圣彩、宋尔卫等建立脂质生成与乳腺癌的直接联系

        背景介绍与正常细胞相比,癌细胞的代谢特征发生了巨大的变化,不仅表现出对葡萄糖和谷氨酰胺有异常高的需求,而且脂质代谢也发生较大改变,如脂肪生成升高,脂肪酸摄取增加等。其中,脂质代谢对乳腺癌细胞的影响尤其大,因为乳腺癌细胞通常被大量的脂肪细胞包围并产生一个富含脂肪酸的微环境,可作为细胞生长的外部刺激因素。磷脂酸磷酸酶 LPIN1 既可以作为代谢酶,又可以作为转录辅助因子调控脂质代谢途径,如脂肪酸氧化和脂肪生成。另外,LPI ...

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        妙用病毒载体开展环路示踪工作

        神经元之间的环路连接非常复杂,完整而准确地显示这些环路的结构和变化,对揭示许多疾病的病因和新治疗方法的开发具有非常重要的意义。传统的神经示踪方法如电镜、Golgi染色、染料、肽类标记物等可以显示神经元的形态和投射,少数示踪剂如WGA、TTC等还可以实现跨突触标记,但这些方法都具有信号间接、方向不特异、跨突触后信号衰减严重等缺点,最重要的是,这些染料无法携带基因,因此只能显色。自20世纪80年代,Kristenss ...

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        基于病毒载体的不同基因调控方式的原理和选择

        1.病毒载体可以进行哪些方面的基因操作?基因功能研究主要涉及功能获得和功能缺失,功能获得主要包括外源的过表达,内源性激活,功能缺失主要包括基因干扰和敲除等。借助病毒载体可以进行基因过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作,其中基因包括编码基因和非编码基因。2 .不同基因调控方式的原理外源过表达:基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程,其基本原理是将目的基因 ...

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        基于病毒载体的不同基因调控方式的原理和选择

        1. 病毒载体可以进行哪些方面的基因操作?基因功能研究主要涉及功能获得和功能缺失,功能获得主要包括外源的过表达,内源性激活,功能缺失主要包括基因干扰和敲除等。借助病毒载体可以进行基因过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作,其中基因包括编码基因和非编码基因。2 不同基因调控方式的原理外源过表达:基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程,其基本原理是将目的基因构建 ...

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        慢病毒载体基础知识及应用

        1.慢病毒载体概述慢病毒载体(Lentivirus)是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,是逆转录病毒的一种,基因组是RNA,其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达,具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录 ...

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        MCD饲料诱导大/小鼠NASH模型的对比研究

        非酒精脂肪性肝炎(NASH)是一种无过量饮酒,以肝脏细胞脂肪变性、气球样变、弥散性肝小叶炎症为主要临床病理特征的综合征。它是非酒精脂肪性肝病(NAFLD)发展为肝硬化和肝癌的一个重要阶段。据报道 NAFLD 在发达国家的发病率表现为成人 30%、儿童 13%,其中大约有 10% 的 NAFLD 患者发展成为 NASH,而 NASH 患者中的 10% 会发展成为肝硬化,甚至肝癌。非酒精脂肪性肝炎已经成为研究的焦点,然而 NASH 的发病机制尚未明确,研究发现其与胰岛素抵抗、氧化 ...

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        AAV 和 LV 载体在神经系统中的应用

        病毒是由核酸分子(RNA 或 DNA)和 / 或蛋白质组成的非细胞形态,这是一种无法独立生长的生命体,其复制过程必须通过感染宿主细胞,将遗传物质导入宿主细胞,并依靠宿主细胞进行复制,组装成病毒颗粒。对病毒的研究可以分为「抗病毒」和「利用病毒」两种思路,而病毒载体正是「利用病毒」的思路。二十世纪七十年代,分子生物学家 Paul Berg 利用病毒的这一特性,改造 SV40 病毒感染猴子肾脏的培养细胞,做成第一个病毒载体。后来,科学家们开始从利用自然界中存 ...

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        同天两篇 Science,揭晓 miRNA 靶向降解机制,解了悬而未决近 30 年的谜题

        背景介绍:MicroRNAs (miRNAs) 是一类由内源基因编码的长度约为 22 个核苷酸的非编码单链 RNA 分子,参与转录后基因表达调控,抑制信使 RNA (mRNAs)。Argonaute (AGO) 蛋白是 RNA 介导的转录后基因调控的关键蛋白,为 miRNA 提供锚位点,形成 RNA 诱导沉默复合体 RISC 达到降解靶基因或者抑制翻译的目的。 自 1993 年 miRNAs 被发现以来,研究人员已经积累了数百种不同 miRNA 分子及其生成、成熟在发育、生理和疾病中的作用机制。尽管人类早已明确 ...

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