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卵巢癌（Ovarian Cancer）是最具破坏性的妇科癌症，目前 5 年总生存率低至 47%【1】。卵巢癌是一种高度异质性疾病，通常根据组织病理学、分子生物学和遗传学分析的结果，将卵巢癌分为两大类：I 型卵巢癌病情进展缓慢，主要为低级别浆液性癌（LGSC），粘液癌，子宫内膜样癌，透明细胞癌等；II 型癌症则进展迅速，主要为高级别浆液性癌（HGSC）、未分化癌和癌细胞瘤。治疗卵巢癌的标准方式是手术切除和铂-紫杉醇化疗相结合，然而这类化疗方式往往对于透明细胞癌和粘液癌患者无效【2,3】；此外，初始化疗后通常会由于铂类耐药而复发，因此建立更精准的卵巢癌模型对于深入理解疾病机理和个性化治疗是必不可少的。基于类器官技术的 OC 类器官就是可以模拟来源组织关键特征的体外模型，不仅能够再现患者体内肿瘤的特异性（包括表型特性和基因突变），并能够检测患者对药物的敏感性。本篇文章基于STAR protocol【4】发表的文章，整理了病人组织来源的卵巢癌类器官的培养方案。图 1. 病人组织来源的卵巢癌类器官培养方案【5】细胞来源活检样本或手术样本培养基配方取样培养基解离培养基OCO培养基细胞冻存液近岸蛋白

人脑是动物界中最高度发达的大脑，也是我们身体中最复杂的器官。由于其独特的复杂性，很难用动物系统来模拟人脑的发育。然而，人脑类器官现在已经成功地用于模拟人脑发育和疾病发生。人脑类器官培养是一项令人兴奋的新技术，科学家们基于模拟内源性发育过程，通过将多能干细胞（PSCs）进行诱导分化及自组装后，在体外重现了人类大脑发育的进程。最近的研究表明，脑类器官可以模拟神经发生的时空动态、区域神经回路的形成以及胶质细胞整合成神经网络。这一技术可以帮助我们探索大脑发育、新陈代谢机制，并进行药物功效测试。由于人脑类器官的结构复杂，本文基于 Nature protocols 的方案，以背侧(hCS)前脑球体为例，简要介绍来源于 PSCs 的脑类器官培养流程【1】。人脑类器官的培养材料细胞：hPSCs 或 iPSCs 细胞主要培养基基础培养基（主要成分：20% KSR，1% NEAA，0.5% GlutaMAX，0.1mM 2-Mercaptoethanol，10ng/ml FGF2）；神经诱导培养基（主要成分：20% KSR，1% NEAA，0.5% GlutaMAX，0.1mM 2-Mercaptoeth

血管是胚胎最先发育的器官之一，是所有其它器官功能的基础。血管系统由两种细胞类型构成：内皮细胞 (Endothelial cells) 和壁细胞 （Mural cells），其中壁细胞是周细胞 （Pericytes, PC） 和血管平滑肌细胞 （Vascular smooth muscle cells, vSMCs） 的统称。内皮细胞组成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁 （单层鳞状上皮） 的接口；而壁细胞在保持血管壁的完整性方面起着关键作用【1】。在发育过程中，在成纤维细胞生长因子 2 (FGF-2) 、骨形态发生蛋白 4 (BMP4) 和血管内皮生长因子 A (VEGF-A) 的刺激下，内皮细胞在中胚层祖细胞中产生，并组成原始管状网络。随后，在血管生成的过程中，原有的神经丛进行重塑，新的血管发芽和分支，直到一个成熟的循环网络形成【2】。本篇文章基于 Nature protocol【3】 发表的文章，整理了人类多能干细胞 （hPSCs） 来源的血管类器官培养方案。培养过程遵循发育原理，依靠上述生长因子进行诱导分化，最终培养成为血管类器官网络。图1. hPSCs 来源的血管类器官培

心脏是哺乳动物最先形成的器官之一，这使得它极易受到内在和外在疾病因素的影响。心肌细胞的分化受转录途径的调节，产生不同的心肌细胞群，例如窦房结细胞、房室细胞、心房细胞、心室细胞和浦肯野细胞。每个群都与特定的心脏疾病相关，因此可以通过类器官对相关疾病进行建模。3D 培养心脏类器官（human cardiac organoids，hCOs）由于具有更复杂的结构和更多样的细胞类型，正在逐步成为更适用于研究心脏发育、物测试的体外模型。本篇文章基于 Nature Biotechnology【1】，Stem cells and development【2】、Development【3】、Current Protocols in Stem Cell Biology【4】发表的四篇文章，整理了人类胚胎干细胞（human ESCs）来源的心脏类器官培养方案。图1. hESCs来源的hCOs培养方案【1】细胞来源Human ESCs培养基配方MEFs 培养基ESCs 培养基中胚层培养基心肌分化培养基（I）心肌分化培养基（II）心肌分化培养基（III）hCOs 形成培养基（I）hCOs 形成培养基（II）hC

肠上皮是成年哺乳动物中自我更新最快的组织，平均自我更新时间少于 5 天。肠干细胞位于肠隐窝（intestinal crypt）底部附近，每个隐窝中的干细胞大约有 4-6 个，它们产生快速增殖的转运扩增 (TA) 细胞，肠细胞、杯状细胞和肠内分泌细胞都从 TA 细胞发育而来。TA 细胞快速分裂、转运扩增的子细胞占据了隐窝的其余部分，并流向绒毛的侧面，在那里它们分化、吸收营养，最终在绒毛尖端凋亡【1】。在体外可以由 hPSCs 来模拟胚胎肠发育的过程，通过添加高浓度的 FGF4 和 Wnt3A，促使 hPSCs 衍生的终内胚层 (DE) 向中肠和后肠内胚层分化，并促进肠管样形态发生，进而产生包含吸收性肠细胞以及主要分泌谱系(包括 Paneth 细胞、杯状细胞和肠内分泌细胞)的肠类器官。本篇文章基于 Nature protocols【2】 整理了 hPSCs 细胞来源的肠类器官培养方案。细胞来源hPSCs培养基配方第 1 天内胚层分化培养基第 2 天内胚层分化培养基第 3 天内胚层分化培养基中肠和后肠分化培养基肠生长培养基近岸蛋白产品货号基础培养基RPMI-1640RPMI-1640RPMI

「在过去的一年里，人类干细胞衍生的类器官作为细胞系模型和动物模型的桥梁，已经成为了新冠肺炎研究的有力工具【1】」。对于新冠肺炎这类呼吸性疾病的研究，最常见的体外模型是肺类器官，即：由干细胞在体外进行 3D 培养，形成包含多种组织特异的细胞类型、可以自组装并部分模拟原生器官的结构和功能的「微器官」。肺的类器官培养需要在体外模拟胚胎发育的过程。肺上皮来源于内胚层，通过一系列复杂的内胚层 - 中胚层介导的信号通路调控，经历内胚层诱导、前-后和背-腹模式化、肺发育、肺出芽、分支形态发生，最终生成树枝状传导气道网络（支气管、细支气管）和气体交换单元（肺泡）。通过调整培养基的生长因子种类和含量，也可以在 22 天左右形成具有高度增殖能力的芽尖祖细胞类器官（bud tip progenitor organoid），这个结构具有体外多系分化潜能和体内移植潜能，因此芽尖祖细胞类器官是探索上皮命运决定的理想选择。而人肺类器官（human lung organoid, hLOs）的培养需要大约 50-85 天，适用于模拟人肺发育过程中的上皮-间充质转换。这两种类器官都在再生医学、组织工程和药物安全性、有效性

Wnt 通路激活原理及 Wnt3a 蛋白

美天旎抗体小课堂（三）

美天旎抗体小课堂（二）

美天旎抗体小课堂（一）

早在 25 年以前，SARSTEDT 公司就开始生产高品质细胞培养产品，并售往全球。多年的经验以及对于用户需求的深刻了解，促使我们不断优化和扩展产品种类。

在生命科学和医学基础研究中，或多或少都需要用到抗体。抗体的应用场景不同、标记物众多，且针对同一标记物市场上往往有多个抗体可供选择，那么，我们如何从成百万上千万种抗体中，挑选出我们想要的那支呢？在我们6月份的关于抗体的调研活动中，我们发现，大家更多的是去参考文献或专利中的材料和方法部分，这无疑很大程度上保证了抗体的有效性。其次有45%和34%的受访者会用到百度和谷歌，然而这两个搜索引擎覆盖面颇广，经常会出现抗体无关的搜索结果，而专业用于查找抗体的网站，大家却知之甚少。因此，本次文章中，我们将推荐6个查找抗体的网站，帮大家解决找抗体难的问题！01 Biocompare网址：https://www.biocompare.com/Biocompare（www.biocompare.com）不仅提供专门的生物试剂搜索工具，还有文章、产品评论、网络研讨会、视频和技术聚焦等资源，有兴趣的小伙伴可以从主页上方的目录栏进入各个板块进行探索。02 CiteAb网址：https://www.citeab.com/CiteAb（www.citeab.com） 是由英国Bath大学的Andrew Chalmer

流式配色可以算的上是一门艺术：我们需要平衡抗原表达水平和荧光染料亮度，从而得到令人满意的实验结果。在荧光素的选择上，除了传统的PE、APC等荧光蛋白和FITC等合成类小分子外，串联染料的出现大大扩展了可用荧光素的选择范围。什么是串联染料？串联染料由两个共价连接的荧光分子组成。当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在10nm以内时，就会发生一种非放射性的能量转移，即荧光共振能量转移（FRET）现象，使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多（荧光猝灭），而受体发射的荧光却大大增强（敏化荧光）。激发和发射波长之间的差异称为“斯托克斯频移”，而在选择用于流式细胞实验的荧光素时，我们希望具有尽可能大的斯托克斯频移，以将发射光与激发光源可靠地区分开。因此，串联染料在这个意义上比单分子染料更有优势。但是有些串联荧光染料也是有相当的局限性的，尤其是在多色流式实验时会更大概率出现荧光溢漏的问题。例如，当使用PerCP-Cy™5.5染料时，我们可能认为只会在488 nm激发范围相关的通道中检测到信号，然而这实际上是错误的，因为该蛋白质会被635 nm激光激发（图1）。当同

流式抗体的选择和配色原则由于在流式细胞实验过程中，荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此，需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素，例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。本文介绍如何选择合适的流式抗体：1、需要满足抗体选择的最基本条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验等。靶标特异性：确定标记物名称，确定是细胞表面表达，还是细胞内表达。细胞内表达需要进行透膜。物种来源：确定待测样本的种属来源。例如，抗小鼠的抗体，不能用于人的样本的检测。实验类型：大多数只标明用于WB、IP、IHC、IF、ChIP的抗体都不适用于流式实验(FC,flow cytometry)。选择标明用于FC实验的抗体，并有引用文献和实验数据图。克隆号：有一些标记物有多个克隆号，选择文献报道中使用多，荧光标记种类多的克隆号。厂家和批号：不同厂家或同一厂家生产的不同批号的相同荧光的相同标记物的抗体，荧光染料的强度可能有少许差别，不建议一次实验混合使用。2、流式抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在流式实验过程中，直标抗体一抗上连接有荧光染料，间标抗体二抗上连接有荧光

批次间稳定一致重组抗体源于一段只编码一种重链和轻链的DNA序列，从而确保抗体的超高纯度。标准化的培养条件下，由哺乳动物细胞表达，保证了抗体质量的批次间稳定性。图1：对抗体进行质谱分析，数据表明：REAfinity抗体纯度非常高，而杂交瘤来源的抗体是一种混合物。(A)对两个杂交瘤来源的单克隆抗体样本进行质谱分析，可以看出，它们都含有一条分子量接近23,635Da的污染轻链。(B)两个REAfinity抗体样本的质谱分析结果显示，其含有极高纯度的轻链。通用型同型对照所有的REAfinity抗体都是人IgG1亚型；因此，对于超过1万种REA克隆号的所有抗体来说，只需选用一种类型的同型对照抗体即可。根据抗原表达位置不同，该通用型同型对照抗体分为膜表面型和胞内型两类，无需花费时间寻找合适的同型对照抗体。图2：使用REAfinity抗体时，只需一种通用型同型对照，降低了实验设计的复杂程度无需Fc受体阻断REAfinity抗体Fc段经基因突变改造，从而消除了抗体与Fcγ受体的非特异性结合。因此，在流式分析中，无需额外增加阻断步骤。优选序列，染色指数高挑选最佳克隆号的抗体，以该抗体序列作为改造的基础，

第一代抗体—— 血清多克隆抗体（PcAb）20世纪初期发现血清抗体和细菌毒素的作用，可用于多种疾病的治疗。多克隆抗体生产过程遇到免疫动物制备的血清抗体具有免疫原性和非均质性的特点，给抗体的研究和应用造成困难，但是由于血清多克隆抗体识别抗原的广谱性，以及识别不同表位的各种抗体或识别同种抗原表位的不同克隆的抗体可协同作用，因而能高效地识别抗原和阻断抗原对机体的危害，所以血清抗体至今仍为诊治疾病和生命科学研究重要制剂。第二代抗体——单克隆抗体（McAb）将经绵阳红细胞免疫后的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞（P3-X63/Ag8）融合，融合的细胞既获得了亲代脾细胞分泌特异性抗体的特性，又具有骨髓瘤细胞大量繁殖的能力，成为一种既能分泌特异性抗体又能长命的杂交瘤细胞。该技术为抗体的分子生物学研究提供了全新的手段。极大地促进了免疫学，遗传学，分子生物学的快速发展。但传统抗体目前也面临诸多问题，如：每使用一管新抗体都需要进行滴定测试；多种同型对照，实验设计繁琐；需要添加Fc阻断试剂；抗体不佳，阳性细胞群不明显；抗体作为细胞生物学和生物化学中最重要的试剂之一，科学界每年在这类试剂上的花费约达20亿美元。但是

抗体的结构决定了其对应的功能，同一抗体的V区和C区的氨基酸组成和顺序不同，决定了其功能上的差异。V区和C区的组成和结构，决定了抗体的生物学功能。图1：抗体的主要功能（图片来源：Abbas et al: Cellular and Molecular Immunology, 7e.)1、特异性识别功能抗体可以通过其结构上的可变区域与抗原结合，同时，具有极高的特异性。这种特异性识别功能可以使抗体识别和结合到感染的病原体，肿瘤细胞等不同种类的分子，帮助免疫系统识别并定位到这些分子，进而启动相应的免疫反应。2、中和病原体功能抗体在体外可发生各种抗原抗体反应，用于抗原或抗体的检测和功能判断，在体内可中和病毒，阻断病原体入侵、清除病原微生物，从而阻止毒素进入宿主细胞，具有此作用的抗体也称为抗毒素。抗体可与病毒表面蛋白结合，通过阻止其吸附宿主细胞而发挥中和作用。主要作用于游离在细胞外的病毒，在防止病毒在体内扩散及病毒的再感染中发挥重要作用。如针对新冠病毒，除疫苗外全球科学家也在努力研发对新冠病毒具有中和作用的抗体。3、调节免疫应答功能抗体可以通过与抗原结合而调节免疫应答。一方面，抗体的结合可以增强免疫

抗体的概念抗体（antibody, Ab），也叫免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig），是血液和组织液中的一类糖蛋白，由B细胞接受抗原刺激后增殖分化成的浆细胞产生，能与相应抗原特异性地结合，是介导体液免疫的重要效应分子。1968年和1972年世界卫生组织和国际免疫学联合会的专门委员会先后决定，将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白。后来研究证实，Ig和Ab在结构及功能上完全一致，因此可认为二者的概念等同。Ig可分为分泌型和跨模型，前者主要存在于血液和组织液中，发挥各种免疫功能；后者则是构成B细胞表面的抗原受体。我们常说的抗体其实就是分泌型的Ig。抗体的产生机制图1：抗体产生机制示意图B淋巴细胞通过B细胞受体（BCR）识别抗原，抗原提呈细胞（APC）对抗原进行摄取、加工、递呈，辅助性T细胞（Th）被APC激活后分泌多种细胞因子与B细胞上的细胞因子受体结合并相互作用向B细胞提供协同刺激信号。一旦受到刺激，B细胞开始分裂，最终转化为可分泌抗原特异性抗体的浆细胞。抗体的基本结构所有Ig的单体结构非常类似，由两条重链和两条轻链组成，重链之间及重链和轻链之间由二硫键

在细胞生物学领域，原代细胞培养作为解开生命奥秘的重要工具，要求实验者遵循一系列关键的注意事项以确保可靠的实验结果。本文将深入探讨如何在原代细胞培养过程中应用这些关键要点：原代培养要重点注意无菌操作，所用器械需提前高压灭菌；鼠胚原代培养时，获取组织较少，建议在冷光源体视显微镜下操作；原代细胞培养过程比较慢，培养时间最少需要一周的时间。若 2 天后可能会出现培养基变黄的现象，且无漂浮物，排除污染，属于正常现象。这是因为细胞在贴壁生长过程中释放了 CO2 和其他物质导致培养液 PH 发生了改变，所以变黄；正常贴壁细胞在培养几天后，会逐渐贴满整个瓶底或者皿底，呈现出相应的形状，有的呈纤维状，有的呈多边形；细胞的第一次传代，一定要密度高一些传代原代细胞传代密度低，很难长起来。建议 1:2-1:3 传代，如果细胞数量够的条件下，P2-P3 代完成实验是最好的。如果细胞数量不够，那细胞的提取和培养比较重要，尽可能地让细胞的好状态多维持几代对实验成败来说至关重要；原代细胞不建议冻存，因为冻存很容易复活不成功。如果要冻存的话，建议在 P2 或 P3 代冻存，一些比较难复苏的细胞可以适当提高冻存液中的血清