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外泌体（Exosomes）是细胞分泌到胞外的一种囊泡，大小为 30-150 nm，携带了各种核酸、蛋白质和脂类等物质，可以在不同细胞间进行传递和交流，从而影响受体细胞的生物学功能。肿瘤细胞来源的外泌体不仅能帮助肿瘤细胞自身发生侵袭和转移，也能促进肿瘤微环境其他细胞的状态发生改变。外泌体在肿瘤中起的作用若要深入研究，这就需要我们拿到更多的肿瘤来源的外泌体。目前肿瘤方向的研究多使用肿瘤细胞的培养上清来提取外泌体，但是现在我们可以直接利用肿瘤组织来提取外泌体，一方面减少了大量体外培养细胞的工作，另一方面利用肿瘤组织提取得到的外泌体，可能更接近于生理状态下的外泌体，也有利于研究外泌体的功能。重点来了！那如何从肿瘤组织中分离提取外泌体呢，效果又如何？下面和大家分享我们自己从肿瘤组织中提取外泌体的效果，供大家参考： 一、采用消化+滤筛过滤+超离法从肿瘤组织中分离外泌体：将肿瘤组织切成小块，加入胶原酶孵育，再经过滤筛过滤，随后进行一系列的差速超速离心过程，包括除杂、超离等，最终用 PBS 重悬外泌体，用重悬后的外泌体进行接下来的透射电镜（TEM）、纳米粒径跟踪分析（NTA）和 WB marker 鉴

外泌体（Exosomes）作为细胞分泌到胞外的一种囊泡，参与不同细胞间 DNA、RNA、蛋白质等分子的传递，起到了细胞间的通讯作用。近些年，很多学者都在探索外泌体在各个研究领域中扮演的角色和功能，但是由于外泌体的不易获得性，使得很多方向的外泌体研究举步维艰。在神经系统中，由于脑脊液难以得到，要想获得脑部直接来源的外泌体则难度较大，所以从脑组织中分离外泌体对于神经系统研究人员迫在眉睫。且目前外泌体的分离方法很多只适用于液体样本，不太适合直接分离组织。所以我们一直立足文献[1]并积极优化从脑组织中分离外泌体的方法。本文主要和大家分享我们从小鼠脑组织中分离外泌体的效果，供大家参考： 一、采用消化+超离法从脑组织中分离外泌体：将脑组织剪成薄片，放入离心管中加上消化液进行消化，经水浴、反复轻轻上下颠倒，再用移液枪间断缓慢吹吸至消化结束。随后加入培养基于消化液中，混匀，置于冰上。再进行一系列的差速超速离心过程，包括除杂、滤膜过滤、超离等。最后用 PBS 重悬外泌体，用重悬后的外泌体进行下面的透射电镜（TEM）、纳米粒径跟踪分子（NTA）和 marker WB 鉴定。 二、TEM 鉴定外泌体外观：将

外泌体（Exosomes）是一种细胞分泌到胞外的囊泡，其大小为 30-150 nm，呈茶托状结构，内部含有核酸（DNA 和 RNA）、蛋白质、脂质等多种分子。外泌体参与细胞间的沟通，可以将其装载的分子传递给不同细胞，改变受体细胞内部一些分子的含量，从而影响受体细胞的状态和功能。图一 图片来自于丁香园随着我们对外泌体深入的了解，外泌体在液体活检中的诊断价值逐渐显现。谈到液体活检，我们最先想到的是循环肿瘤细胞（CTC）和循环肿瘤 DNA（ctDNA），而外泌体作为一种新的液体活检方式，正在受到很多人的关注。2019年，FDA 授予 Bio-Techne 公司的诊断前列腺癌的液体活检测试 ExoDx Prostate IntelliScore（EPI）突破性医疗器械认定（breakthrough device）。这是第一个基于外泌体（exosome）的液体活检测试获得这一认定，具有重要的里程碑意义。下面我们将从外泌体的各个组分来解析外泌体在液体活检中的意义： 一、以外泌体 miRNA 为标志物：山东省肿瘤医院谢丽和宋现让课题组合作发表论文[1]，阐述了来自结肠直肠癌（CRC）患者和健康人血清

外泌体（Exosomes）作为当前科研界的热度话题，很多人觉得它很神秘，不知道它在疾病治疗或发生、发展中扮演什么样的角色，今天我们跟大家一起基于文献来探讨一下外泌体具有的功能。先回顾一下外泌体的基础知识。外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其大小为 30-150 nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。所有的细胞都能分泌外泌体，但是不同细胞分泌的外泌体不管在数量上还是在内含物中都具有很大的差异性，这也决定了每种外泌体所行使的功能不一样。图一 外泌体透射电镜图和 NTA 图 一、肿瘤细胞来源外泌体功能解析：海军军医大学王红阳课题组在《Nature Communications》上发表文章[1]，揭示了肝癌细胞分泌的外泌体可促进正常成纤维细胞向癌症相关成纤维细胞（CAFs）转化，其中起重要作用的是外泌体中的 miR-1247-3p。CAFs 能分泌促炎因子，并促进肝癌的发展和向肺部的转移。图二 肝癌细胞分泌的外泌体增加成纤维细胞迁移图三 肝癌细胞分泌的外泌体促进肺部转移大连医科

最近科研界什么比较流行？外泌体（Exosomes）是当之无愧的热点话题。不论在肿瘤领域、神经科学领域还是代谢领域，都有大量的外泌体相关文章发表，以探究外泌体的功能和机制。再梳理一下外泌体的基本知识。外泌体是一类大小为 30-150 nm、呈茶托状的由脂质双层膜包裹的细胞外囊泡，广泛存在于细胞培养上清及各种体液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、卵泡液、精液、心包液、乳汁等。外泌体内含有多种蛋白质（如 TSG101、HSP70 等）、核酸（DNA、RNA）和脂质（胆固醇、鞘磷脂等），这些内容物因释放外泌体的细胞不同而有比较大的差异。外泌体首先需要从样本中分离出来，目前比较公认的分离方法是超速离心法，再通过透射电镜（TEM）、纳米粒径跟踪分析（NTA）、Western Blot 等进行鉴定。获得外泌体后，对外泌体进行标记，观察外泌体被摄取情况，再进一步探索外泌体的功能，如组织修复、肿瘤转移、代谢重建等。下面我们仔细聊一聊外泌体标记的方法。 一、亲脂性染料标记：目前已发表的外泌体文章中，外泌体大多使用亲脂性染料进行标记，体内和体外都有较多应用。亲脂性染料主要分为两大类，第一类是 PKH67（绿

一、什么是外泌体？外泌体（Exosomes）是大小为 30-150 nm、呈茶托状的细胞外囊泡（Extracellular vesicles, EVs），广泛存在于细胞培养上清及各种体液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。几乎所有细胞都可以分泌外泌体，但是外泌体来源不同，其内部装载的 RNA、蛋白质、脂类等重要物质在数量和丰度上有很大差异。 二、外泌体的作用和功能外泌体可通过传递信息影响目标细胞的功能，激活细胞信号通路，在免疫、凝血、肿瘤等生理病理过程中发挥作用。外泌体可以作为临床诊断中的生物标志物或疾病治疗的靶点，同时也可以作为药物载体，参与神经疾病和癌症等多种疾病的病理过程。 三、关键步骤 — 外泌体分离外泌体的分离纯度对外泌体的功能研究非常重要，但是外泌体的分离一直是困扰外泌体研究人员的一个难题。虽然分离外泌体方法有很多种，包括差速超速离心法（超离法）、超滤法、密度梯度离心法、免疫磁珠法、试剂盒法等。但目前文献中常用的分离外泌体的方法主要是超离法和试剂盒法，那这两种方法研究人员该如何选择呢？为了解决大家的疑惑，我们专门做了对比实验进行阐述。 四、超速离心法与试剂盒法比

最近一段时间正是国自然标书撰写进入最后的冲刺阶段，相信很多科研工作者们都已经拟好内容，只差润色了。但是不知道这两年的国自然一线明星外泌体，大家的内容里都靠上了没？如果想靠但还没有靠上的，需要抓紧时间了啊，还剩下最后的补实验基础的时间。下面我为大家将外泌体的知识再梳理一遍： 在说外泌体之前，我们先介绍一下细胞外囊泡（Extracellular Vesicles， EVs）。细胞外囊泡是细胞以多种形式分泌到细胞外的各种囊泡：外泌体（Exosomes）直径为 30-150 nm，以内吞的形式释放到细胞外；微囊泡（Microvesicles）直径为 100-1000 nm，以出芽的形式释放到细胞外；凋亡小体（Apoptotic body）直径为 50-2000 nm，由凋亡细胞产生。由于各种胞外囊泡的大小可能有交叉，所以要想通过分离手段得到某种纯化的特定囊泡是很难实现的。图一 胞外囊泡的分泌 （图片来源于文献）外泌体携带有细胞来源相关的多种蛋白质、脂类和核酸，其中蛋白质包括跨膜蛋白、信号转导蛋白、细胞支架蛋白、酶等，现在很多文献会选择其中的几种膜蛋白和膜内蛋白作为外泌体的鉴定标志物，核酸包括

最近，娱乐界有两部宫廷剧比较火，估计大家都略有耳闻，那便是《延禧攻略》和《如懿传》。其实在我们科研界，最近也有个比较火的“明星”，它就是外泌体（Exosomes）。那么到底什么是外泌体？它又有哪些特征及作用呢？如何研究外泌体呢？接下来我们将一一为大家解答。 一、什么是外泌体？外泌体是由细胞分泌的直径为 30~150 nm 的小囊泡，内含来源于细胞相关的蛋白质与核苷酸等生物分子，在细胞交流间起重要作用。具有减少细胞凋亡、减轻炎症反应、促进血管生成、抑制纤维化、提高组织修复潜力等重要生物学功能。其具有以下特征：典型的“杯托”形态内含的核苷酸包括 DNA、mRNA、miRNA、lncRNA 等几乎存在于所有的体液、组织及细胞间隙中几乎所有的细胞都能分泌外泌体不同细胞分泌的外泌体成分不同 二、外泌体有哪些功能？外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能性的 mRNA、miRNA 等生物活性物质，在体内参与免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭、促血管新生等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊

1 Ames试验简介Ames试验，亦称细菌回复突变试验（Bacterial Reverse Mutation Test)，于1975年由美国加利福尼亚大学伯克利分校生化系B.N.Ames教授实验室建立并不断发展完善，至今已成为国际上通用的遗传毒理评价体系的必检项目，同时也是许多遗传毒理学新兴技术发展过程中对照验证结果的试验之一，广泛应用于化合物的致突变性和潜在致癌性的初筛检验。当前，Ames试验在食品、药品、化学品、化妆品、农药 ...

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背景：本人即将研究生毕业，发了几篇 SCI 文章和参与发表几十篇论文，荣获过国家级奖励，主持编辑了实验室操作指南，参与主持过研究生学术活动交流，我是定向研究生（边读研边工作），而且导师是纯搞科学研究的老师，在这三年学习中，我基本学到了科学研究的真谛。因此，特借丁香园论坛与大家进行分享感受、交流经验。 一、科学研究的两个关键因素1、科研思维：我老板一直跟研究生说“一定要做 scientist，而不能做 technician”，然而这一点往往在研究生教育阶段最容易被忽视。一般都是老板提出新 idea，然后分工，每个研究生可能仅做其中某个环节或者是按照到导师的思路逐步去做，再加上研究生本身在实验操作上可能一开始就要花大量的时间去适用新环境和永远做不完的事情，可想而知，最终仅仅培养出一位“优秀技术员”，这在硕士研究生阶段尤为突出。但是，科研思维就像人体中的包含大脑的躯干，更加像是大海航行中的指南针，离开了他，最终科学研究将会停滞不前。2、实验技术：有很好的 idea，没有很好的实验条件和技能强的技术人员，科研思维也会变成“空想”。也许我们均没有国外实验室那样高顶尖的实验仪器，有的实验室还可能没

科技文献的标题大多很长，不适合做文件名，那应该如何命名才能一目了然让自己知道是哪篇文献呢？ 一、基本原则：你要有意识地形成一个比较高效的工作流程（workflow）也就是说，从在网上看到一篇 paper，到你日后某天要找到一篇 paper 的 PDF，整个的流程要固定，不能一会儿这样一会儿那样；也要高效，不能把太多时间就花在整这个上面。也许这是理工科思维，先花专门的时间去定义，之后就不再考虑按定义来做。即兴的做法是难以长期保证高效。你的 workflow 越是连个机器人都能完成，就越高效。越是要你用模糊智慧去想去回味去条件判断分支，就越低效。每个人会有每个人的 workflow，没有一个软件或者做法是能适应所有有的 workflow 的，这也是为什么有的人喜欢 Zotera，有的人喜欢 Papers，有的人喜欢 EndNote。这是我以下摆任何理由的前提，即：摆得出很多理由，但不代表这就是普遍正确的做法。现在我介绍一下我的做法。我的文件夹里最多有两千多篇 paper 的 PDF。我是使用 Windows 系统和 EndNote。 二、我先简单评价一下我用过的其他文献管理软件：我使用过

近年来 PLoS ONE 这艘超级航母的成功打造，开放存取(Open Access)更多的进入了人们的眼球，免费阅读下载全文文献的时代已经来临，当然这种方式对于读者来说，是相当幸福的，但对于发表在 OA 期刊上的原文作者来说，确实付出了一些代价，如 PLoS ONE 对于中国大陆的作者收取版面费标准为 1350 美元每篇，这在所有国际期刊中，是一个比较高的数额了。除了 PLoS ON E外，还有众多 OA 期刊，下面为大家推荐一些常用 OA 期刊检索系统： 1. DOAJ OA 期刊检索平台：DOAJ (Directory of Open Access Journal)，由瑞典的隆德大学图书馆 Lund University Libraries 设立于 2003 年 5 月，从最初的 350 种期刊开始，截至 2011年 6 月，已收录开放存取期刊 6596 种， 文章超过 57 万篇。该目录收录的均为学术性. 研究性期刊，具有免费. 全文. 高质量的特点。其质量源于所收录的期刊实行同行评审，或者有编辑作质量控制，故而对学术研究有很高的参考价值。 2. High Wire Press

SCI 文章投稿最重要的莫过于图片的处理。一般杂志对图片要求：图片最低分辨率300DPI，部分杂志要求不低于 600DPI，点线图及柱状图部分杂志要求达 800DPI 甚至 1200DPI。杂志要求的分辨率是指原始图片的分辨率，经过 Photoshop 处理后修改图片的分辨率以达到杂志的要求通常是不可取的。以下介绍组图过程中的一些个人经验。 一、图片处理：图片大致包括以下 2 种：1、拍照的图片（一般是彩图，分辨率不低于 300DPI）：包括显微镜下拍照、扫描仪及摄像机等所拍照片，这一部分照片就是你的第一手资料，所以拍过后可能会无法再重复，因此一定要在最刚开始时就拍成高清的（设置成高分辨率），也就是保证了原始图片的高分辨率，接下来处理图片就会比较方便，免得因为图片质量不行而重复实验。另外，必要的话，把每张图片拍成 TIF 和 JPG 两种格式（以防部分杂志特殊要求）。2、由数据生成的图（一般是黑白和点线图，分辨率不低于 600DPI）：主要包括各种点线图、柱状图、饼图和各种统计图等。在此推荐一款专业作图软件 sigmaplot，该软件能满足由数据生成的任何图，且原始图片最高分辨率达到

作为一个科研工作者，在国际学术期刊上发表科研论文是与同行交流、取得国际影响的必经之路。有些国内的科学家，实验做得很漂亮，但常常苦恼于论文的写作力不从心，成为国际交流的一大障碍。本文从博主的亲身体验出发，给博士生、博士后、以及年轻的 PI 提供一个借鉴。文章最后做简短总结。我大学时的同班同学都知道，那时我的英语不算好（英语四级考试仅为“良”），写作尤其糟糕。初到美国之时，对英文环境适应得很差，读一篇 JBC 的文章要五、六个小时，还常常不理解其中一些关键词句的意思,心里压力极大。很幸运，我在约翰霍普金斯大学（Johns Hopkins University）攻读博士学位时，1991 年 4 月遇到了学兄和启蒙老师John Desjarlais。听了我的苦恼后，John 告诉我，“Spend 45 minutes every day reading Washington Post, and you will be cruising with your written English in two years”(每天花45分钟读《华盛顿邮报》,两年后你的写作能力会得心应手)。这条建议正合我意

SCI 写作，新手除了不会写，就是不愿意动笔写，导致 SCI 一直胎死腹中...除去不会写的部分，新手该怎么拒绝拖延，清清爽爽地在 1 周内完成一篇（不管是否粗糙）的初稿呢？ 一、定目标凡事预则立，不预则废，既然心里有目标：1 周内（甚至 4 天）完成。怎么也得定目标，列计划，知道自己每天该完成哪些「指标」才行。首先，写作顺序：「Results」-「Introduction」-「Abstract」-「Methods」-「Discussion」（只要写完这些，其他小细节后面再说），对应难度不同，时间安排也不同。比如，4 天写作的可以大致这样安排：Results 是一篇 SCI 的主要内容，用时 1 天；Introduction 需要引用参考文献，简单 3 段落书写，加点参考文献，用时 1 天；Abstract 比较简单，半天足够，可以再补充 Figure Legend；Methods 也比较简单，就是有点繁琐，半天也足够；Discussion 是最难的，用时 1-2 天。当然，每个人擅长的 Part 不同，根据自己需求来安排就行，而且别安排太紧，比如一秒都得不到休息那种，只会徒增压力。本

影响因子大于 5 分的 SCI 杂志在大多数领域可算得上是一本经典期刊，同理，发表一篇 IF > 5 分的 SCI 文章往往也不是一件容易的事儿。今天，给大家安利一款性价比高、研究领域广且影响因子大于 5 分的 SCI 期刊：《Oxidative Medicine and Cellular Longevity》。氧化应激，是指体内氧化与抗氧化作用失衡的一种状态，其在体内异常激活可参与心血管疾病、免疫疾病甚至癌症的发生与发展，因此专注于氧化应激异常现象与相关疾病研究的老师和同学们敬请看过来！期刊官方网站：https://www.hindawi.com/journals/omcl/期刊投稿链接：http://mts.hindawi.com/login/图片来源：LetPub 网站该杂志的出版和发行国家为埃及，目前由 Hindawi Publishing Corporation 出版社管理。自杂志创刊至今，其影响因子逐年升高，根据梅斯医学最新公布的 2019 年 IF = 5.076，也是 Hindawi 旗下影响因子唯一大于 5 分的杂志！ 1. 期刊介绍《Oxidative M

作为朝八晚十辛勤工作的研究僧，想必不是在实验室搬砖，就是在撰写论文的路上，而 SCI 论文作为拿国奖、工作留学、晋升职称的关键凭证指标，其分量不言而喻。如果说投稿是文章被接收的一小步，那么，送审后的回复审稿人意见就是最为关键的一大步。好的回复能让论文接收 Online 指日可待，人生平步青云，今天师兄和你聊聊回复审稿人的那些事。 1. 推荐审稿人首先，我们要明白审稿人从何而来？目前国际同行评审采用方法是作者向期刊投稿，然后期刊会找 3 到 5 位甚至更多的同行专家对稿件进行审核评价，这些同行专家就是审稿人。有投稿经验的伙伴应该了解在初次向期刊投稿时，绝大多数期刊会让作者自己推荐几位审稿人，当然期刊编辑可能不会选择作者推荐的审稿人，因为期刊一般会有自己的审阅专家团，特别是一些顶刊，甚至会有「御用」审稿人，可是即便如此，在某些研究领域依然无法保证所有的投稿论文都能恰如其分的找到适合的审稿人，因此，作者推荐审稿人是必须的。首先，要端正态度，千万不要以为随便推荐几个审稿人，想着反正编辑也不认识，于是随便写几个审稿人甚至编造杜撰审稿邮箱，这是学术大忌，论文都要投稿了，这最后一步推荐审稿人当然也要

又是一年毕业季。转眼已是5月底，经过前段时间的日夜奋斗，很多童鞋的毕业论文已经通过了外审，悬着的心放了大半。接下来的事情就是全力准备毕业答辩了。一个集实力与颜值为一体的屁屁提，不对，PPT，毫无疑问能够为你的答辩增色不少。因此，作为一个小小的前辈，笔者就来简要分享一下做出高水平答辩 PPT 的一些要点和技巧，相信对各位小伙伴们一定有所帮助。 不套用模板，借鉴即可有很多的小伙伴会套用网上下载的模板来做答辩 PPT，淘宝上一搜就会有很多模板，比如「学术答辩 PPT 模板 100 套」。尽管使用模板确实可以给我们带来很多方便，但是笔者建议大家在做 PPT 的时候，可以借鉴模板中的排版设计，但不要直接套用。模板虽然看起来十分华丽，有些还会添加酷炫的动画效果，但其实并不适合在较为严肃的毕业答辩场合使用。这些装饰会显得花里胡哨、华而不实，反而会让答辩老师觉得你不够专业，「不是学术该有的模样」。所以小伙伴们一定要记住，制作学术答辩 PPT 的重中之重是清晰直观的展现研究内容。并且就像 SCI 论文作图的要求一样，PPT 中的字体字号、图片排版和文献引用等方面均需符合学术规范。在这些基础上，再通过美化

如何利用 「MeSH 主题词」+「自由词」检索，查全文献？ 万事都要举例才能说清，接下来科研君就用一个检索实例来为大家演示 PubMed 数据库检索的实操吧！假设我们要检索的词语是「经颅磁刺激」，英文翻译是「Transcranial magnetic stimulation」，这时候检索小白是怎么做的呢？一般来说 ta 只会打开 PubMed 数据库，在检索框里输入该关键词，然后点击「搜索」，出来的结果 19,918 篇，那科研老司机是怎么做的呢？请继续看！图片来源：PubMed 检索结果页 第一步：建立 MeSH 主题词！进入 PubMed 官网后，先往下拉，找到 「MeSH Database」，点进去后输入关键词「"Transcranial magnetic stimulation"」，再点击「Search」后就能得到我们需要的主题词、副主题词以及自由词。图片来源：PubMed 检索结果页图片来源：PubMed 检索结果页 第二步：将 MeSH 主题词，添加到 PubMed 高级检索页面点击右上角如图所示的输入框，选择「Add to search builder」，然后再点击「Se