全部

NK细胞是人体免疫的第一道防线，具有非限制性杀伤的特点，如何发挥NK细胞的免疫作用从而治疗肿瘤等疾病是一个重要的课题。因为NK细胞仅占外周血的5-10%，细胞数量的稀少往往是制约研究的一个重要原因。本产品用于从单个核细胞（MNC）在体外高效扩增成NK细胞，具有扩增效率高，目的细胞百分比高的特点，起始单个核细胞经过14天培养，总细胞数可以扩增约50倍左右，NK细胞数可以扩增500倍以上，且纯度可达70%-85%（由于 ...

【实验操作步骤】1 使用移液管（枪）吸取15ml淋巴细胞分离液注到50ml分离管下室（15ml分离管吸取4ml）；注意：请用移液管直接将淋巴细胞分离液通过隔板小孔注到分离管下室，勿将分离液置于分离管上室，否则分离液难以流至下室，影响后续分离操作。2在50ml分离管中加入2-30ml稀释血液样品（15ml分离管倒入0.5-8ml）；注意：1）请勿将稀释血液样品注入到隔板下室；2）请将稀释血液从隔板上方缓缓加入，所加入的位置勿 ...

正常人外周血中的干/祖细胞的含量占有核细胞数的1%左右，经有效动员后，骨髓中的造血干细胞会释放到外周血中，使外周血中的干/祖细胞比例明显增高。动员外周血是指用有效的动员剂对供者进行动员后采集的外周血。重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）是外周血动员最常用的动员剂，它可选择性的作用于粒系造血祖细胞，促进其增殖、分化，并可增加外周血中性粒细胞的数目和功能。动员外周血单个核细胞是采集经动员后的健康供者的外周血，采 ...

骨髓单个核细胞（Bone Marrow Mononuclear Cells，BMMNCs）是一群混合细胞，其中绝大多数是早幼粒细胞、早幼红细胞、成熟B细胞、T细胞和单核细胞等，还含有少量的干细胞，包括间充质干细胞、造血干细胞和内皮祖细胞等，它们密度相近，因此可通过密度梯度离心法从骨髓液中分离出来。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞 ...

脐带血是指胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液。脐带血单个核细胞（Cord Blood Mononuclear Cell，CBMC) 分离自正常人胎盘脐带组织，是脐带血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞等，是机体防御系统的一个重要组成部分。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离 ...

脾脏（spleen）位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，是体内最大的淋巴器官，也是血流通路中的过滤器官。脾脏内定居着大量的淋巴细胞和其它免疫细胞，是机体发生特异性免疫应答的场所。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同，在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。2 方法1）无菌条件下取出脾脏，在培养皿中加入适量的分离液，将脾 ...

外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），是指外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞（Lymphocyte）、单核细胞（Monocyte）、树突状细胞（DC）和其他少量细胞。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其它细胞不同，红细胞和多核白细胞的比重超过1.080，单个核细胞的比重为1.070左右，血小板为1.030左右。因此，可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各 ...

01 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容，它不仅决定了创新药物制剂研发的成败，而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而，药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用，研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广，加上代谢转化的器官和酶系的多样性，使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低，代谢产物 ...

1 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容，它不仅决定了创新药物制剂研发的成败，而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而，药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用，研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广，加上代谢转化的器官和酶系的多样性，使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低，代谢产物的 ...

01 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容，它不仅决定了创新药物制剂研发的成败，而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而，药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用，研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广，加上代谢转化的器官和酶系的多样性，使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低，代谢产物 ...

对于科研人员来说，在日常学习和工作中，除了需要阅读权威的专业书籍和著作，很多时候还需要阅读大量的学术文献。尤其是对于那些刚刚接触全新研究领域的科研人员来说，阅读学术文献则是打开这一领域知识宝库、取得研究成果的一块「敲门砖」。然而，当接触从来没有涉足过的研究领域内文献时，很多人往往显得不知所措，也不知道如何去高效地阅读文献。比如，不知道哪些是权威学术期刊、文章里的图表数据看不懂、专业英语单词不会认，以及对最新进展和 ...

养过RAW 264.7细胞系的小伙伴，都容易为一个问题感到苦恼：它太容易分化了！到底怎样才能养好它呢？RAW264.7细胞培养注意事项有哪些，今天我们就给大家分享一些心得。RAW264.7细胞培养之基础篇RAW264.7细胞培养的第一步，是要对它的基础培养条件了如指掌，比如生长特性、细胞形态、所需的培养基，甚至培养环境、传代比例等等，做到知己知彼，才能百战百胜。 ▲产品详情细胞系:RAW 264.7培养基:CM-0190▲RAW26 ...

逆转录反应，作为分子生物学研究的基本技术之一，已经广泛应用到多个研究领域，可以说是科研人员进行 RNA 功能研究的看家本事。众所周知，逆转录的应用领域有以下 6 种：逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）定量RT-PCR（RT-qPCR）cDNA 克隆和文库构建cDNA 末端快速扩增（RACE）基因表达芯片RNA 测序（RNA-Seq）今天，小编就整理了一些贴士，帮助大家在面对 6 种不同的应用时，如何正确选择逆转录酶。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）在 RT-PCR 中，逆转录酶将 RNA 转化为 cDNA，然后通过 PCR 反应扩增 cDNA，为下游实验提供研究模板，因而逆转录酶是实验成功的关键步骤之一（如下图）。选定的逆转录酶应对所有样本均具有最高效率，即便是难转录 RNA 样本，如降解、抑制剂残留或具有高度二级结构的 RNA 样本。图. 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）。RT =逆转录，RTase =逆转录酶常用的 RT-PCR 方法分为一步法和两步法，每种方法都各有优缺点，简要概述如下：表. 对比一步法和两步法 RT-PCR 定量 RT-PCR（RT-qPCR）定量 R

为了研究 RNA 的功能，通常需要通过反转录过程将 RNA 转化为更稳定的互补 DNA（cDNA）。之后 cDNA 可通过分子克隆、PCR 和测序等技术做进一步的研究。因此，反转录过程是许多 RNA 实验研究流程的关键步骤。为了获得更为准确的研究结果，本期总结了反转录过程中需要考虑的一些因素，以期能够抛砖引玉，给你的实验研究带来些许帮助。 本期内容RNA 模板制备基因组 DNA 的去除反转录酶选择引物选择主要反应组分反应温度和反应时间第一链和第二链 cDNA 合成注：本期内容较多，阅读完此文需要大概 8 分钟。 一、RNA 模板制备RNA 是反转录的模板。总 RNA 通常用于 RT-(q)PCR 等下游应用的 cDNA 合成，而特定类型的 RNA（如信使 RNA（mRNA）、miRNA 等小 RNA）可通过富集而用于某些实验应用，如 cDNA 文库构建和 miRNA 图谱分析。 保持 RNA 的完整性至关重要，在提取、处理、储存和实验过程中均需要采取特殊的保护措施。防止RNA降解的最佳方法包括佩戴手套、使用具有气溶胶屏障的移液器移液、使用无核酸酶的实验室器具和试剂以及对实验区域进行去污

一台 WB 成像系统可以同时拍摄化学发光和荧光信号，这个功能有什么用途呢？一篇 2014 年发表在 Cell Stem Cell 的文章为了研究硫巯基化如何影响信号通路，就需要在进行 Western Blot 时同时捕捉2种信号。蛋白质硫巯基化（S-sulfhydration, SHY）是一种依赖H2S的蛋白质翻译后修饰。H2S 作用于蛋白质的半胱氨酸残基，把巯基（-SH）转变为硫巯基（-SSH），改变蛋白空间结构，调控了蛋白的活性和功能。这篇文章主要研究硫化氢（H2S）调节 Ca2+ 通道硫巯基化，来维持间充质干细胞的功能和骨稳态。骨髓间充质干细胞产生H2S协助调节自我更新和成骨分化。H2S 缺乏会导致 Ca2+TRP 通道上多个半光氨酸残基的硫巯基化程度降低，产生钙内流异常。异常的钙内流会下调 PKC/Erk- 介导的 Wnt/β-catenin 信号，从而影响到成骨分化。结果提示通过无毒供体恢复 H2S 水平，可以治疗 H2S 缺乏导致的骨质疏松症等疾病。有趣的事情来了。在验证 H2S 通过 Ca2+ 通道的巯基化调节钙内流时，研究人员将 BMMSCs 分成了 2 组，一组使用

哺乳动物表达系统是适用于生成具有天然结构和活性的哺乳动物蛋白的首选表达平台，可以实现最高水平的翻译后加工，使蛋白质获得最佳功能活性，适合在最类似生理学的环境中研究特定蛋白质的功能。它常用于抗体和治疗性蛋白质以及人类功能细胞分析的蛋白质表达。和稳定表达相比，哺乳动物瞬时表达系统可实现灵活且快速的蛋白质生产，可以在 1-2 周内生成大量蛋白质，适用于人或其他哺乳动物蛋白的表达，和大肠杆菌、酵母或昆虫细胞等宿主表达系统相比，可实现更天然的折叠和翻译后修饰——包括糖基化（图 1）。图 1、哺乳动物蛋白表达系统的比较。低风险的蛋白表达系统助力科学研究对于蛋白表达来说，为特定应用选择合适的表达系统是成功的关键。在选择表达系统时，蛋白质溶解度、功能、纯化速度和产量通常是最重要的考虑因素。此外，每种系统均有其各自的优势和局限性，在选择表达系统时必须考虑，其中最常用的表达系统是 293 和 CHO 表达系统，根据表达的蛋白和研发阶段，选择最适合的表达系统至关重要。 文章来源：赛默飞世尔科技

某个实验间隙…萌新：开题报告已提交，转眼 1 个月过去了，实验还是一头雾水，为啥我的 co-IP 拉不下来蛋白？奋斗中的师兄：我当初正好相反，拉下来的蛋白被抗体条带覆盖住了，换个抗体忒不好找，无奈换了个蛋白，还好挺顺利。大师兄：蛋白吧，不但种类多，理化性质差异较大，关键它们又喜欢组队在细胞里干活，IP、co-IP 又是常用的手段，掌握好这个工具还是很重要的，总不能随随便便就换个蛋白。那要怎么快速掌握这项实验，轻松搞定各种疑难杂症呢？我们依据三十多年的 IP/co-IP 实验经验，总结了一线技术支持常被问到的问题，希望这篇纯干货能帮助大家顺利升级打怪，早日驾驭 IP、co-IP。IP、co-IP、pull-down 简介IP（Immunoprecipitation），免疫沉淀：是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等基质上的特异性抗体对抗原进行小型亲和纯化的一种方法Co-IP（co-Immunoprecipitation），免疫共沉淀： co-IP 是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法，其基本实验流程和IP类似，通过使用诱饵蛋白（IP 中的抗原，bait protein）特异性抗体间接捕获与其

RNA 干扰（RNAi）是一种转录后基因沉默的机制。同时也是一项成熟的实验技术，它的出现彻底改变了研究人员研究哺乳动物基因表达的方式，并持续为如今的基因功能研究提供有价值的实验结果。RNAi 技术大大提高了在哺乳动物细胞和动物模型中进行基因功能缺失分析的便利性、速度和特异性，因此长期以来一直是深受研究人员信赖的一种选择。小干扰 RNA（siRNA）是 RNAi 技术中最为常用的一种手段，其在基础研究中已经发挥了巨大的作用。回到最基础的实验中，尽管已经非常成熟，想要顺利开展 siRNA 实验并拿到可靠的实验结果却不是那么容易的，除了选择高质量的稳定的siRNA 产品之外，还有很多实验设计和操作方面的注意事项。今天我们为大家总结了成功开展 siRNA 实验的十大秘诀。1.每个基因设计并测试两到四条 siRNA 序列为了找到一个潜在的靶点，分析感兴趣基因的全长寻找氨基酸序列。记录氨基酸和3′ 19核苷酸作为潜在的 siRNA 靶点。潜在的靶点随后通过对 GenBank 数据库的 BLAST 分析进行评估，去掉任何与其他基因有显著同源性的靶序列。如果可能的话，应该针对含有更少二级结构的靶 mR

生成全长转录组使用 Ambion 转录试剂盒合成的大多数 DNA 模板都可以生成全长转录组，无需任何优化。然而，一些模板可能产生过早终止的产物，如较小的离散带或拖尾/降解产物。对于印迹杂交，通常不需要全长 RNA 探针。然而，对于许多其他分析，至关重要的是转录进行到模板的末端，全部生成同一种大下的转录组（例如 NPA，体外翻译研究和结构分析）。转录反应失败或不良的两个最常见因素是标记核苷酸中的抑制剂和质量较差的 DNA 模板。应执行一系列简单的实验来确定转录反应失败的原因；随附的流程图概述了这一过程。以下列出了其他一些策略，用于增加有问题的转录反应中的全长产物比例。增加限制性核苷酸的浓度用最低浓度的标记核苷酸进行转录反应，可能由于核苷酸浓度不足而产生过早终止的转录组。增加限制性核苷酸的浓度通常会提高全长转录组的产量。降低反应的孵育温度通常，转录反应在室温或 37°C 下进行。将温度降低至约 16°C 或甚至 4°C 有时可以改善转录反应。人们认为，较低的反应温度会减慢聚合酶的进展，从而防止其被二级结构或一个特定核苷酸串置换。（想象一下玩具火车全速绕弯前行与缓慢绕同一条路线前行。）使用不

PCR 酶数量如此之多，选择正确的酶可能是一项挑战。用于扩增 DNA 的各种酶的保真性、扩增速度和特异性各不相同。以下三个问题可以帮助您解答选择 PCR 酶时需要重点关注的因素。Q 1：您需要确保序列准确性吗？有时您只需要检测 PCR 产物或估算其大小，例如在对小鼠进行基因分型或筛选重组克隆时。对于这种类型的常规 PCR 分析，您应该使用标准的热稳定 DNA 聚合酶（如 Taq DNA 聚合酶）来确认目的 DNA 存在与否。但是，如果要执行克隆实验或下一代测序（NGS），那么准确性至关重要。为了确保准确进行 DNA 拷贝，请确保选择高保真 DNA 聚合酶。高保真 PCR 酶具有 3'-5’ 核酸外切酶校对活性。当结合错误匹配的碱基对时，DNA 聚合酶停顿，导致合成暂延。合成暂延 允许去除错误匹配的核苷酸并使用正确的核苷酸取代。保持序列准确的 DNA 聚合酶的绝佳选择是 Invitrogen SuperFi 或 Thermo Scientific Phusion 高保真DNA聚合酶。这两种酶具有高保真度，准确度是 Taq DNA 聚合酶的 300 倍或 52 倍，并且具有很高的产率。Q