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购买何种档次仪器取决于实验室的实际工作需要，如样品处理批量要求，消解的难易程度等因素。此类产品性能和价格水平都相差极大。在国际市场上，目前开放式和密闭式分额大致相同，而国内市场主要以密闭式为主。从生产工艺上讲，目前市售的微波化学设备大致可划分为两类：即专业型和家用微波炉改装型。 1.看其仪器的图片，专业厂家多采用一体化机型，因为分体式仪器置于充满化学试剂的平台上极易被腐蚀，也不方便操作。 2.看其 ...

提取外周血淋巴细胞时注意事项 如果取外周血淋巴细胞 (PBMC) 进行ELISPOT检测，最好采用新鲜血液。在保证无菌操作的前提下，首先应保证取血时抗凝剂应及时充分的与血液混匀，避免血凝块的出现。抗凝血最好及时提取PBMC，避免放置时间过长，室温下避免过夜。应选用分离效果好的淋巴细胞分离液，避免PBMC中混有过多其他细胞成分或杂质。 外周血出现溶血后，在使用淋巴细胞分离液分离PBMC时，溶血产生的 ...

所谓微波消解就是通常指在密闭容器里利用微波快速加热进行各种样品的酸溶解（也有敞开容器微波消解的，不予讨论）。 密闭容器反应和微波加热这两个特点，决定了其完全、快速、低空白的优点，但不可避免地带来了高压（可能过压的隐患）、消化样品量小的不足。高压（最高可达100-150bar）、高温（通常170-220℃）、强酸蒸气给实验者带来了安全方面的心理压力。 现在的商品微波消解系统，一般都有测温/测压甚至控 ...

XT-III密闭微波消解仪在合成方面的应用

ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech Millipore Nunc BD Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明（白色），PVDF膜等多种类型的板。 国外主要生产商所生产的各类型ELISPOT板都能良好的进行ELISPOT试验。不推荐使用PVDF膜ELISPOT板。其原因有以下方面：1）PVDF膜在使用中容易因为温度、湿度、干燥、外力等原因产生局部皱褶，变形影响试 ...

透明板在操作的时候比PVDF板稍微容易点，PVDF板在使用时要进行预处理板，操作时还要小心不要把那层膜捅破了！！透明板就是显示的斑点都是黑色的，不能进行几种因子的同时测定，而PVDF板就可以用斑点颜色的变化一次来测定几种细胞因子总结：都有优缺点，个人认为，测一种细胞因子的话还是透明板比较好 ...

第一部分：关于ELISPOT 1． 什么是ELISPOT检测? 答:酶联免疫斑点 ( enzyme-linked immunosorbent spot ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。 淋巴细胞在体内被抗原激活后，或者在体外培养中被培养液中含有的特异性抗原或刺激剂激活后，将这些细胞转入ELISPOT培养板中。这些活化的淋巴 ...

酶联免疫斑点（ELISPOT）技术是当今世界上检测生物体细胞免疫水平的最佳技术。它集高灵敏度、高可信度、高通量、单细胞水平、功能性检测与低成本等诸多优点于一身，在国内外免疫学界获得了广泛的应用，成为主流免疫学检测技术之一。我们来一一详述这些优点。 l 灵敏度高 理论上，ELISPOT高达百万分之一，也 ...

原理：待测天然含氮有机物与浓硫酸共热时，被氧化成为二氧化碳和水，而氮转变成氨，氨再与硫酸结合生成硫酸铵。为了加速有机物质的分解反应，在消化时常加入促进剂，硫酸铜可用作催化剂，硫酸钾或硫酸钠可提高消化液的沸点，氧化剂如过氧化氢也能加速反应。 操作方法：样品处理 测定某一固体样品中蛋白质的含量都是按100克物质的干重中所含蛋白质的克数来表示。因此在定氮前应先将固体样品中的水分除去。步骤：先将样品磨细， ...

为了实现ELISPOT的标准化，显色最好在恒温箱内进行，温度控制在25°C±5°C，显色25分钟为宜。另外，在37°C显色也是不错的一个方法，但要注意相应的缩短显色时间到12-18分钟，并且显色中勤检查。为了提高ELISPOT检测结果的可重复性，增加实验的可信度，必须建立一套标准化的实验操作规范。标准化的实验操作规范不仅仅是一些实验操作，更是一个系统工程，需要 ...

第一天：ELISPOT包被程序，提供两种方案供选择（严格注意无菌操作）方案A: 传统酒精预湿包被程序该方案中，需经过：70％乙醇预湿PVDF膜、无菌去离子水洗涤去除乙醇、拍干，最后，加入已稀释好的包被抗体到各实验孔完成包被操作。具体操作如下：1. 实验卡片填写：设计好试验，把每个 ...

细胞的复苏 细胞复苏的原则－快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。 具体操作 一. 实验前准备： 1.将水浴锅预热至37℃ 2.用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。 3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、 ...

微量凯氏定氮仪的安装

1、试剂来源 Vero/slam细胞由国家麻疹实验室提供，使用代次不超过15代。 2、操作步骤 2.1维持液的配制 100mlDMEM& ...

传统的空斑实验方法测呼吸道合胞病毒的PFU值由于其空斑形成较小且需要借助特异性的表面融合蛋白抗体来确定故操作繁琐费用较高。这里介绍给大家三种简单易行的空斑形成实验操作方法： 方法一 1、以5×10e5/ml的密度接种Hep－2细胞到6孔板中，每孔加入3ml细胞悬液； 2、待细胞长成单层后（不得超过48hr），移去营养液，每孔加入400ul的PBS和100ul毒液（10倍系列稀释）； 3 ...

常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温 ...

一、细胞培养基质量标准(粉): 细胞培养基的最主要指标是使特定的细胞在指定的细胞生存环境中存活、发育生长和繁殖，基础培养基是提供这些条件的基本物质，不同的细胞可能还须添加不同的其它物质。 目前国内细胞培养基的商品没有统一的标准，即没有行业标准，也无部颁标准和国家标准。本企业为了使产品质量稳定可靠，在市场上有较强的竞争力，特编制产品标准。并经上海市质量技术监督部门批准，本企业产品标准代号 Q/TOS ...

图注：ELISPOT 法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生 IFN- 的T细胞与一百万个抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用 ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和 ELISA 法（下图）分别测量产生 IFN- 的细胞的数目。 •ELISPOT 分析使单细胞分泌产物可视化。这些分析 ...

1.为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 2.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L ...

无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无 ...