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Direct tissue explant method for derivation and study of extravillous trophoblas

From early post-implantation stages to approximately 18 weeks' gestation cytotrophoblast at the tips of anchoring villi at the placental periphery proliferate to form columns. From the distal edges of ...

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Establishment of a Primary Culture

Materials Chick embryo (approximately 8 days old) 70% (v/v) ethanol for swabbing Sterile scissors forceps and probes Sterile petri plates Phosphate buffered saline (PBS) Trypsin cold sterilized in a 1 ...

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Staining protocols for placental explant cultures

Whole mount staining. The protocol given uses a single primary antibody with nuclear counterstaining but it can be extended to double antibody staining. It requires an inverted microscope with fluores ...

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酶免疫细胞化学染色操作指南

一、材料和试剂 1、玻片:须用免疫组化专用玻片,或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。 2、5-10%正常山羊血清封闭液,用PBS配。 3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。 4、0.01M PH7.4 PBS 5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20) 6、AEC底物 (1)底物缓冲液(20X) PH 4.6 醋酸(分子量60.6) 30.6ml ...

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免疫荧光技术简介

一、材料和试剂 1、玻片:须用免疫组化专用玻片,或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。 2、5-10%正常山羊血清封闭液,用PBS配。 3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。 4、0.01M PH7.4 PBS 5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20) 6、AEC底物 (1)底物缓冲液(20X) PH 4.6 醋酸(分子量60.6) 30.6ml ...

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PCR技术的原理与方法

PCR定义PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆,序列分析,基因表达调控,基因多态性研究等许多方面。 PCR技术的基本原理一.P ...

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玫瑰组织培养研究进展

[摘 要]玫瑰组培苗已投入大规模生产中,已取得显著经济效益。本文对玫瑰的组织培养进行了较为全面的综述。目前,玫瑰采用根、茎、叶片、叶柄、茎尖、原生质体、合子胚、花药、花萼、花托、腋芽进行组织培养取得成功;主要采用MS培养基,添加低浓度的激素BAP03~05mg/L,NAA0004~03mg/L或NAA或GA005~20mg/L诱导不定芽;在MS培养基中添加更低浓度的BAP和NAA进行壮苗;多采用低 ...

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组织培养中污染及防止

一、污染的来源 1、 植物本身具有: (1)植物病原菌 有些作物的病害已被透彻研究,因此在大量繁殖时,可立即检查出来,但有些则否,造成若有污染时,不知来源为何。 (2)和植物有关的菌类 有修植物本身便会和一些菌种共生,或是寄生于植物内部。 2、 植物所带入的污染:内在污染源 许多植物表面或大气中生存的微生物,可经由植物自然的开口或伤口进如植物内部,而有一些兼性腐生菌或绝对寄生菌, ...

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病毒RNA传统提取方法

一、细胞的裂解 1、单层细胞的裂解 a)吸出培养液,以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞,重复1次,将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上,再将铝板置于冰盘上。 b)直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液,并使之遍布整个平板的表面。(RNA提取缓冲注液配方:0.14mol/L NaCl,1.5mmol/L MgCl2, ...

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Subculture of Suspension Cell Lines

1.Basic Techniques - The 'Do's and Don'ts' of Cell Culture Given below are a few of the essential "do's and don'ts" of cell culture. Some of these are mandatory e.g. use of personal protecti ...

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组织培养时各种灭菌特点

常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类,即:物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施;化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用。 一、培养基用湿热灭菌 培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序。高压灭菌的原理是: ...

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Serum Thawing Heat Inactivation

How to thaw serum: Serum that is stored at -10º C to -40º C is stable for extended periods of time. It is neither necessary or desirable to store serum at -70º C as it does not prolong ...

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园艺植物制片方法

植物制片是进行园艺植物科学研究所需用的一种基本方法,比如进行植物各个器官的解剖构造观察、花芽分化研究、授粉受精观察、贮藏营养观测以及染色体观察等等都需要进行制片。通过对切片结果的分析,可以比较不同试验处理的效果以及了解不同树种和品种相应的生物特性等。植物制片技术是一个相对独立的体系,内容繁多。在此我们仅介绍在园艺植物科学研究中常用的一些基本方法和原理。 &nbs ...

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发根(毛壮根,hairy root)培养

20世纪初植物细胞全能性的概念建立以来,植物组织和细胞培养的研究已取得了很大的进展,如试管苗大量繁殖技术、单倍体技术、原生质体培养、细胞杂交、体细胞变异及突变体的选择和利用等。80年代,随着基因工程的发展,其研究成果也渗透到细胞工程中来,引起了细胞培养研究的新突破。其中通过发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)中Ri质粒介导的天然植物遗传转化,建立发根培养系统来生产原植物中 ...

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植物组培培养条件

一、温度: 对大多数植物组织20~28℃即可满足生长所需,其中26~27℃最适合。 二、光: 组织培养通常在散射光线下进行。光的影响可导致不同的结果,有些植物组织在暗处生长较好,而另一些植物组织在光亮处生长较好,但由愈伤组织分化成器官时,则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。有些次生物质的形成,光是决定性因素。 三、渗透压: 渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。在培养基中添加食盐、蔗 ...

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PCR技术的拓展知识

1、逆转录PCR(RT-PCR)用来扩增RNA的方法。2、竞争逆转录PCR(competitive reverse transcription-polymerase chain rection C-RT-PCR)低丰度RNA定量的好方法。3、多重PCR(multiples PCR)在同一PCR体系中加入多对引物可用于基天长度很长,发生多处缺失的检测。扩增同一模板的几个区域。4、多种PC ...

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细胞培养常见问题及解答

细胞培养常见问题及解答

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Cell Cultures

Introduction A major advance in our knowledge of cells came about with the ability to maintain them in continous culture. Prokaryotes have been cultured for a relatively long time but eukaryotic cultu ...

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细菌内毒素的提取

细菌内毒素的简介及提取方法

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BIORAD-BENCHMARK酶标仪使用基本步骤

1.检测仪背面键接通电源。2.器自检30秒后,按键。3.按键,选择Analy 。4.按键,选择D/S Filter 按。5.按键,选择单或双波长。6.键 ,将光标移至检测或参考波长。7.键,选择目的波长。8.整完毕后,放入待测酶标板,请注意将板框放平,压紧后关上检测盖。按 键开始检测。9.打印完毕后,关闭电源,取出样本后请做好使用记录。如需详细说明,请借阅说明书。 ...

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