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限制性内切酶的研究进展

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动植物样品的采集及DNA样品的提取

动物样品的采集及处理方法 遗传学数据在野生动物和圈养动物的保护和管理中变得日益重要。在本文中,我们总结了一些能简便而有效地获得样品及数据的方法。 我们在采集样品之前,最好对将要进行的遗传学分析有所了解。然而,采集者并非都是研究者,当采集地与实验室有相当距离时,采集者常常要保存好样品直到有合适的接受者或存放地,这就要求采集者应具备一定的经验。 首先,所有样 ...

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超级感受态细菌制备

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石蜡包埋组织的DNA提取及其应用

近10年来,现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域,为了解病理状态下基因组DNA 的变化积累了新资料。目前认为,人类基因组并非人们想像的那样稳定,诸如基因重排、扩增、缺失,突变和DNA 甲基化类型改变等时有发生,这些改变对于基因表达和调控,以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。 医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织,是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。 ...

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目的基因的亚克隆

所谓亚就是对已经获得的目的片段进行重新,其目的在于对目的进行进一步分析,或者进行重组改造等。亚的基本过程包括:(1)目的片段和载体的制备;(2)目的片段和载体的连接;(3)连接产物的转化;(4)重组子筛选。 一、试剂准备 1.LB液体培养基:胰化蛋白胨(细菌培养用)10g,酵母提取物(细菌培养用) 5g,NaCl 10g,加ddH2O 至1000ml,完全溶解,分装小瓶,15lbf/in2高压灭菌 ...

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什么是克隆技术

什么是克隆? 克隆是英语单词clone的音译,clone源于希腊文klone,原意是指幼苗或嫩枝,以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物,如杆插和嫁接。 如今,克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖,以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。克隆也可以理解为复制、拷贝,就是从原型中产生出同样的复制品,它的外表及遗传基因与原型完全相同。 1997年2月,绵羊“多利” ...

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一步实现单拷贝到高拷贝的转换--CopyControl克隆技术(附图)

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克隆技术研究现状

一、克隆 的早期研究 克隆 一词是英文单词clone的音译,作为名词,c1one通常被意译为无性繁殖系。同一克隆 内所有成员的遗传构成是完全相同的,例外仅见于有突变发生时。自然界早已存在天然植物、动物和微生物的克隆 ,例如:同卵双胞胎实际上就是一种克隆 。然而,天然的哺乳动物克隆 的发生率极低,成员数目太少(一般为两个),且缺乏目的性,所以很少能够被用来为人类造福,因此,人们开始探索用人工的方法 ...

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DNA酶切

一、 DNA 酶切反应 1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl再加入重蒸水使总体积为19μl将管内溶液混匀后加入1μl酶液用手指轻弹管壁使溶液混匀也可用微量离心机甩一下使溶液集中在管底。此步操作是整个实验成败的关键要防止错加,漏加。使用限制性 ...

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分子克隆常用载体

DNA 片段的克隆需要合适的载体,载体或是质粒,或是噬菌体,或是病毒,通常大多经过人工改造一、质粒 常用的有pBR322,pUC系列质粒等。 (一)pBR322质粒是4362bp的环状双链DNA 载体,有2个抗药性基因(四环素和氨苄青霉素),一个复制起始点和多个用于克隆 的限制酶切点。当缺失抗药性基因的大肠杆菌被pBR322成功地转化时,它便从该质粒获得了抗生素抗性。两个抗生素基因中均含供插入外源 ...

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电转化流程

用枪头挑取单克隆菌落,投入盛有10mlLB液体培养基的50ml离心管中。(同时做培养基和枪头的空白对照)

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什么是克隆技术

1997年2月22日,英国罗斯林研究所的科学家维尔穆特等人宣布用体细胞克隆绵羊获得成功,在世界上引起巨大震动。一时间,克隆绵羊“多利”成为动物界最耀眼的“明星”,其“咩咩”的叫声迅速响遍全球。 “克隆”是英文单词“Clone”的音译,其本身的含义是无性繁殖,即由同一个祖先细胞分裂 ...

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EXO/S1 DELETION SERIES

1. Cut DNA with 5'- and 3'- overhangs gel check phenol-Sevag extract and NaOAc/EtOH ppt. 2. Prepare one S1 nuclease tube (on ice) for each time point: 15ml S1 Buffer + 0.25U S1/ml (5U). 3. Us ...

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Bisulfite Treatment of DNA

Adapted from Frommer et.al.* 1.Dilute DNA (up to 2 mg) into 50 ml with distilled H2O. 2.Add 5.5 ml of 2M NaOH. 3.Incubate at 37℃ for 10 minutes (to create single stranded DNA ). 4.Add 30 ml of 10 ...

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Genomes

Publisher: Bios Scientific Publishers Ltd Number Of Pages: 608 Publication Date: 2002-06-15 Sales Rank: 4476658 ISBN / ASIN: 1859962289 EAN: 9781859962282 Binding: Hardcover Manufacturer: Bios Scienti ...

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DNA labeling by nick translation

reagents: DNA for labeling (concentration c > 150 ng/µl) modified nucleotides: Biotin-16-dUTP Digoxigenin-11-dUTP conc. 1nmol/µl (Boehringer Mannheim) dNTPs (regular nucleotides): dATP ...

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核酸的修饰酶

The restriction/modification system in bacteria is a small-scale immune system for protection from infection by foreign DNA. W. Arber and S. Linn (1969) Plating efficiencies of bacteriophage lambda (l ...

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MINI PREP BY BOILING

Pellet 1.5 ml of an overnight culture at 12000 rpm in Eppendorf centrifuge at RT for 3 min. Resuspend bacterial pellet in 350 µl of STET buffer. Add 25 µl of freshly prepared solution of ...

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DNA Plasmid Miniprep Protocol

1. Pick single colony and inoculate 5 ml of LB broth containing 200 g/l ampicillin or 1mg/5ml. Optional: Use a 15ml conical tube with a loosened cap and a piece of tape to hold it in place. Shake at 2 ...

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MITOCHONDRIAL DNA ISOLATION

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