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Used to removed unincorporated nucleotides from labelling reactions. Prepare Sephadex G-50 (medium) by adding appropriate amount of dry beads to 100 ml TE buffer such that the beads will swell to 50 m ...

(adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) A. Sonication The generation of DNA fragments by sonication is perform ...

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Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) is an enzyme that catalyzes the repetitive addition of mononucleotides from dNTPs to the terminal 3´-OH of a DNA initiator accompanied b ...

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Material/reagents: • 2X binding buffer: 20 mM Tris pH 7.5 100 mM NaCl 2 mM EDTA ...

This procedure allows the concentration of DNA samples from dilute solution and the removal of unwanted salts from DNA samples. Materials 3M Sodium Acetate buffer pH 5.2 (store at 4 ℃). Cold 100% Et ...

功能克隆（funetional cloning）是利用疾病已知的遗传损伤而引起的生化功能如蛋白质基酸缺陷的信息，进行基因定位，进而克隆 该致病基因。以进行的基因克隆 大都是预先测知疾病基因的编码蛋白质，利用其mRNA反转录成cDNA，再用cDNA作探针，从人基因组中“约”出基因本身。然而，绝大多数遗传病的基因产物不明，就无法用功能克隆策略进行基因克隆。 ...

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CLONE ISOLATION PREP - PROTOCOL Before you begin isolating DNA from the cultures: --GENTLENESS is key through step 10! --Try to do prep steps 1-8 at the side of the centrifuge --Make Solution III and ...

基因是细胞内DNA分子上具有遗传效应的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。基因控制蛋白质合成，是不同物种以及同一物种的不同个体表现出不同的性状的根本原因，即所谓"种瓜得瓜，种豆得豆"，"一母生九子，九子各不同"。基因通过DNA复制及细胞分裂把遗传信息传递给下一代，并通过控制蛋白质的合成使遗传信息得到表达。 基因克隆技术包括了一系列技术，它大 ...

平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5—10uT4RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较 ...

Promega Wizard SV Gel and PCR Clean-up System 品牌：Promega 回收范围：100bp-10kb 价格：（50次包装的试剂盒报价为562元，11元/次） Promega的产品在进口品牌中一向以价格可亲而著称。这个胶回收试剂盒也不例外。并且这个试剂盒的性能参数好得令人刮目相看！首先是100bp—10kb的回收率高达 ...

核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法。

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所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，其目的在于对目的DNA进行进一步分析，或者进行重组改造等。 亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。 一、试剂准备 1．LB液体培养基：胰化蛋白胨（细菌培养用）10g，酵母提取物（细菌培养用） 5g，NaCl 10g，加ddH2O 至1000ml，完全溶 ...

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活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多,在基因治疗方面的优势也日趋显著,是一种很好的活体基因导入方法。

Pyrosequencing 在肿瘤基因甲基化研究的应用 甲基化研究对于基因的调控和肿瘤的发生有非常密切的关系。在一般正常的细胞中，基因调控区CpG岛处于非甲基化的状态。而当细胞发生癌变后，这些CG区域往往呈现甲基化状态。英国医学刊物《Lancet》报道奥地利因斯布鲁克医学院的专家们早就可以通过检测大便中DNA的甲基化变化，把健康人的大便与结肠癌患者的大便区分开。大便标本中SFRP2 甲基化的程 ...