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T-RFLP中文可翻译为：末端限制性片段长度多样性，又可以称为16sRNA基因的末端限制性片段分析技术。是一种新兴的研究微生物多态性的分子生物学方法，日亦受到研究人员的重视。该技术已经成功应用于各种微生物群落的分析比较、研究微生物群落多样性及结构特征等多方面。 T-RFLP的技术原理是根据的保守区设计通用引物，其中一个引物的5‘末端用荧光物质标记，常用荧光物质有HEXTET6-FAM ...

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随着基因工程的发展，常常需要构建一种能高水平表达异源蛋白质的表达载体。启动子对外源基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的重要元件。因此研究启动子的克隆方法，对研究基因表达调控和构建表达载体至关重要。 迄今为止，国外尚未见到有关启动子克隆方法的综述性报道，国内仅孙晓红等曾就启动子的结构、分类、克隆方法和食用菌中已经分离到的启动子作过综述。而近年来又有许多改进的克隆启动子的方法获得了多方面的成功 ...

Qiagen公司的琼脂糖凝胶回收试剂盒：MinElute Gel Extraction Kit 品牌：Qiagen回收范围：70bp-4kb价格：（50包装1485，约29元/反应） 特点： 洗涤体积只要10μl，回收产物浓度高，方便后继实验 使用方便快捷（wash-and-spin) 高回收率 回收产物纯度高，可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连 ...

外源DNA片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化，则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的5'磷酸和3'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的DNA连接酶催化，这两种酶就是大肠杆菌 ...

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动物样品的采集及处理方法 遗传学数据在野生动物和圈养动物的保护和管理中变得日益重要。在本文中，我们总结了一些能简便而有效地获得样品及数据的方法。 我们在采集样品之前，最好对将要进行的遗传学分析有所了解。然而，采集者并非都是研究者，当采集地与实验室有相当距离时，采集者常常要保存好样品直到有合适的接受者或存放地，这就要求采集者应具备一定的经验。 首先，所有样 ...

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近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA 的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突变和DNA 甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表达和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。 医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。 ...

所谓亚就是对已经获得的目的片段进行重新，其目的在于对目的进行进一步分析，或者进行重组改造等。亚的基本过程包括：(1)目的片段和载体的制备；(2)目的片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。 一、试剂准备 1．LB液体培养基：胰化蛋白胨（细菌培养用）10g，酵母提取物（细菌培养用） 5g，NaCl 10g，加ddH2O 至1000ml，完全溶解，分装小瓶，15lbf/in2高压灭菌 ...

什么是克隆？ 克隆是英语单词clone的音译，clone源于希腊文klone，原意是指幼苗或嫩枝，以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物，如杆插和嫁接。 如今，克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。克隆也可以理解为复制、拷贝，就是从原型中产生出同样的复制品，它的外表及遗传基因与原型完全相同。 1997年2月，绵羊“多利” ...

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一、克隆 的早期研究 克隆 一词是英文单词clone的音译，作为名词，c1one通常被意译为无性繁殖系。同一克隆 内所有成员的遗传构成是完全相同的，例外仅见于有突变发生时。自然界早已存在天然植物、动物和微生物的克隆 ，例如：同卵双胞胎实际上就是一种克隆 。然而，天然的哺乳动物克隆 的发生率极低，成员数目太少（一般为两个），且缺乏目的性，所以很少能够被用来为人类造福，因此，人们开始探索用人工的方法 ...

一、 DNA 酶切反应 1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl再加入重蒸水使总体积为19μl将管内溶液混匀后加入1μl酶液用手指轻弹管壁使溶液混匀也可用微量离心机甩一下使溶液集中在管底。此步操作是整个实验成败的关键要防止错加，漏加。使用限制性 ...

DNA 片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造一、质粒 常用的有pBR322，pUC系列质粒等。 （一）pBR322质粒是4362bp的环状双链DNA 载体，有2个抗药性基因（四环素和氨苄青霉素），一个复制起始点和多个用于克隆 的限制酶切点。当缺失抗药性基因的大肠杆菌被pBR322成功地转化时，它便从该质粒获得了抗生素抗性。两个抗生素基因中均含供插入外源 ...

用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10mlLB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照）

1997年2月22日，英国罗斯林研究所的科学家维尔穆特等人宣布用体细胞克隆绵羊获得成功，在世界上引起巨大震动。一时间，克隆绵羊“多利”成为动物界最耀眼的“明星”，其“咩咩”的叫声迅速响遍全球。 “克隆”是英文单词“Clone”的音译，其本身的含义是无性繁殖，即由同一个祖先细胞分裂 ...

1. Cut DNA with 5'- and 3'- overhangs gel check phenol-Sevag extract and NaOAc/EtOH ppt. 2. Prepare one S1 nuclease tube (on ice) for each time point: 15ml S1 Buffer + 0.25U S1/ml (5U). 3. Us ...

Adapted from Frommer et.al.* 1.Dilute DNA (up to 2 mg) into 50 ml with distilled H2O. 2.Add 5.5 ml of 2M NaOH. 3.Incubate at 37℃ for 10 minutes (to create single stranded DNA ). 4.Add 30 ml of 10 ...