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1. For double-stranded DNA templates: a. Denature template: 10ml DNA (5-10g or alkaline lysis mini prepDNA) 8ml ddH2O　　2ml 2N NaOH　　-incubate 30' at 37℃. b. Dry-ice precipitate: +10ml 4M NH4OAc 100ml ...

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This procedure is used to analyze inserts in pUC-derived plasimids. 1. Suspend E. coli colonies harbouring plasmids in 50 microliters of TE. 2. Incubate for 5 min at 95 degrees or in boiling water. 3. ...

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1) Prior to any ligation reaction you should always run one gel in which purified insert and cut backbone are run side by side preferably beside a known amount of cut DNA.You can then use this t ...

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　　一、 材料 　　基因组 DNA (大于50kb分别来自不同的材料)。 　　二、设备 　　电泳仪及电泳槽， 照相用塑料盆5只，玻璃或塑料板(比胶块略大) 4块，吸水纸若干，尼龙膜(依胶大小而定)，滤纸 ，eppendorf管(0.5ml)若干。 　　三、试剂： 　　1、限制性内切酶(BamHⅠ EcoRⅠ HindⅢ XbaⅠ)及10×酶切缓冲液。 　　2、5&time ...

问 题 可能的原因 建 议 ...

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载体（vector）是指运载外源DNA有效进入受体细胞内的工具。载体同外源DNA在体外重组成DNA重组分子，在进入受体后形成一个复制子，即形成在细胞内能独自进行自我复制的遗传因子。因此，作为载体应该满足以下几方面的要求：①有某种限制酶的一个切点，最好是有许多种限制酶的切点，而且每种酶的切点只有一个；②外源DNA插入后不影响载体在受体细胞中进行自我复制，载体应对受体细胞无害，以及载体能接纳尽可能大的 ...

脂质体(lipofectin regeant,LR)试剂是阳离子脂质体(DOTMA)和(DOPE)的混合物[1:1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5～100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。

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一、质粒的提取及鉴定 （一）质粒的提取及鉴定 1、收获细菌 （1）将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中，接入一单菌落，于37℃剧烈振荡培养过夜。 （2）将1.5ml培养物倒入1.5ml离心管中，用台式离心机于4℃以12000g离心5min，将剩余的培养物贮存于4℃。 （3）吸尽培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。 2、碱裂解法小量抽提质粒 （1）将细菌沉淀重悬于100&m ...

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所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，其目的在于对目的DNA进行进一步分析，或者进行重组改造等。 亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。 一、试剂准备 1．LB液体培养基：胰化蛋白胨（细菌培养用）10g，酵母提取物（细菌培养用）5g，NaCl10g，加ddH2O至1000ml，完全溶解，分装 ...

Materials: 3 M sodium acetate pH 5.2 or 5 M ammonium acetate DNA 100% ethanol Measure the volume of the DNA sample. Adjust the salt concentration by adding 1/10 volume of sodium a ...

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