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TRIzol method for RNA isolation -To tissue or cells add 200- 1 ml TRIzol (GIBCO BRL) 1.homogenize for 60 sec (vortex or polytron) 2.add 40ul-200 ml chloroform (1/5 volume of Trizol) 3.mix by vortexing ...

RNA interference (RNAi) is a phenomenon in which the introduction of double-stranded RNA (dsRNA) into a diverse range of organisms and cell types causes degradation of the complementary mRNA (Figure 1 ...

检测基因特异阻断的最常用的方法是进行westernblot分析，比较导入siRNA 前后蛋白表达水平的变化。在一些情况下可能使用检测报告子基因的报告子系统例如β-半乳糖苷酶。也可以应用实时PCR（例如通过使用LUX™引物）或者其它类型基于细胞的分析检测细胞中转录本的水平。 ...

S1 Nuclease Protection Assay End-label oligo (20-25 mer) 4 µl 5X T4 Kinase Buffer 5 µl ATP (7000 Ci/mmol) 10 µl water + oligo (200 ng) 1 µl T4 Kinase 1. 37 deg C for 1 hour. ...

Steve Hahn Last Modified Fri Apr 25 2003 Wear gloves throughout use RNAse free solutions (either autoclaved or sterile filtered) and clean bench and pipetmen with 95% ethanol before use to eliminate ...

Gregory Hannon Cold spring harbor lab Our overall approach is to use an RNA polymerase III promoter to drive expression of encoded short hairpin RNA (shRNA). For this purpose we use the human U6 snRNA ...

Based on: Wan C.-Y. and Wilkins T.A. 1994. Anal. Bioch. 223:7-12. 1.Collect young expanding leaves (or other tissue) and freeze in liquid N2 and store at -80℃. 2.Pulverize tissue to a fine pow ...

1) Place gene of interest between T7 promoters in Òdouble T7Ó plamsid. (slightly more difficμlt alternative: Place gene of interest in hairpin/inverted repeat config ...

Protocol for the cloning of pSHAG-MAGIC2 shRNAs Gregory HannonCold spring harbor lab pSHAG-MAGIC2.doc ...

Chemicals needed: Glucose L-(+)-Arabinose Sigma Cat # A3256 L-Rhamnose Sigma cat # R3875 Cb (carbenicillin) Sigma cat # 1389 DL-p-Chlorophenylalanine Sigma ...

RNA Isolation - Volumes and weights are for 10 ml cultures (1-2 x 107 cells/ml). 1.Spin down cells decant and resuspend in 0.2 ml extraction buffer with SDS and transfer to a 1.5 ml eppendorf tu ...

RNA干扰（RNA interference RNAi）正在迅速成为最受欢迎的阻断特异基因表达的技术。RNAi技术允许科学家关闭他们想要研究的基因，这是一种全新的令人激动的研究方法，通过研究基因表达缺失时细胞的表型，以确定基因的功能。最初，通过在无脊椎动物如：果蝇（Drosophila）和线虫（C. elegans）导入长的双链RNA，揭示了RNAi是一种降低特异基因表达的强有 ...

This is the preferred method for yeast RNA preparation use Gloves and RNAse free solutions throughout. 1. Use a YPD overnight culture to innoculate fresh YPD media and grow cells at 30 degrees overni ...

RNAi 实验中双链短RNA（dsRNA）制备过程，本实验方法来自于加州大学Jim教授实验，很权威！ Procedure for the Generation of dsRNA for use in RNAi 1.Design polymerase chain reaction (PCR ) primers that will amplify 600-800 bp of sequenc ...

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f ...

最糟糕的心态-实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？ 最糟糕的知识-RNaseA的作用。RNaseA是内切酶，内切酶的作用结果是产生片段，而不是单个核苷酸，所以，RNaseA作用于 ...

RNA酶保护试验(RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1． 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失，使灵敏度下降，而RPA将所有杂交体系进行电泳，故损失小，提高了灵敏度。 ...

Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶，使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶，cDNA第二链合成采用置换合成法，采用RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成，最后用T4 DNA聚合酶切去单链末端，方法简便易行。该系统试剂包括： 20μg 特异性引物 200& ...

1）检测RNA 溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA 中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。当R<1.8时，溶液中蛋白或 ...

一．原理 RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分，也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制，已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究，首先要获得该性状基因，从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关重要的，如Northern印迹及杂交分析、cDNA合成等实验的成效在很大程度上取决于RNA的质量。利用提取 ...