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一、目的： 学习稀碱法提RNA的原理与技术。 二、原理： 由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好地除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和 ...

第一部分 Total RNA 的提取 一、 试剂配制 准备工作： 1、研钵、5ml/10ml/ 25ml移液管、100ml/250ml量筒、250ml/100ml容量瓶、药匙、 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部，置于烤箱内180℃，烤6小时。 2、50ml/1.5ml离心管、枪头等塑料制品用0.1‰DEPC水浸泡过夜后，121℃ 20mins 高压灭菌。 3、电泳槽及电泳托、梳子 ...

第三节 植物病毒RNA 提取 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、材料 提纯TMV病毒液（10mg/ml）。 二、设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE缓冲液，无RNA 酶的 ...

Rnai 最近由于RNA 干扰（RNA interference，RNA i）的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的（1），是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNA i领域取得的进步，已经有许多这方面的综述发表（2-4）。RNA 干扰是由长的双链RNA 分子发动的，该分子可以被Dicer enzyme加工成长度为21-23个核苷酸的RNA （ ...

信号通路，只有一个目的：将细胞的外部信号转换成细胞的内部变化。不管是胰岛素，还是异亮氨酸，抗原还是肾上腺素，它们的终极目的总是如出一则：对转录活性的改变。这些对于转录活性的影响来自于转录因子与基因的调控区域：如启动子、增强子、沉默子等结合达到的。经典的凝胶迁移滞后试验（theelectrophoreticmobilityshiftassay）已经成为证明某种蛋白能与特定的短基因序列结合的有力方法手段。但是凝胶迁 ...

第二节 动植物组织mRNA 提取 一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 1、无RNA 酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装 ...

与rRNA 和tRNA 不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA 在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA 中分离mRNA dmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA 模板。 进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA 相比，采用poly(A)+ RN ...

一、用异硫氰酸胍提取 提禽流感病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）： 1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管。 2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀。 3.13000rpm离心15min。 4.在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul -20度预冷的异丙醇。 5.取第3 ...

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RNA干扰是最近发现的一种功能工具。当RNA导入一个细胞时，最终会引起细胞内互补mRNA的降解，从而导致基因功能活性的阻断。 PTGS转录后基因沉默（posttranscriptionalgenesilencing）；一种首先在植物中确定，然后发现在动物中也存在的现象。尽管PTGS最初被描述作一种病毒防御和转位子沉默的内源方法，现在它已经成为一种新的令人激动的研究工具��RNAi干扰。 协同抑制（ ...

从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA 。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。 从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA ，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般 ...

A novel approach for evaluating the efficiency of siRNAs on protein levels in cultured cells. Wu W Hodges E Redelius J Hoog C. Nucleic Acids Res. 2004 Jan 22;32(2):E17. Center for Genomics and Bioinf ...

Primer Extension analysis of total yeast RNA 1. Mix the following in a 1.5 ml eppendorf tube: a. 20-80 micrograms yeast RNA dissolved in H2O (the amount will depend on the level of expression for the ...

How does RNAi work? Genetic and biochemical data indicate a possible two-step mechanism for RNA interference (RNAi): an initiation step and an effector step. a | In the first step input double-strande ...

First strand of cDNA synthsis 1.Add 2 μl of Not I primer-adapter to a sterile 1.5 ml RNAase free tube add 4.5 μl mRNA of molt4 cells (~5.2 ug) add 0.5 μl DEPC-H2O. 2. Heat the mixture at 70℃ ...

RNA interference (RNAi ) by double stranded RNA (dsRNAs) molecules of approximately 20-25 nucleotides termed short interfering (siRNAs) is a powerful method for preventing the expression of a particul ...

The RNA in situ procedure described below is based on the protocol developed by Tautz and Pfeifle (Chromosoma 98 (1989) p81) but adapted to allow the screening of 96 RNA probes on whole-mount Drosophi ...

General Guidelines siRNA targeted sequence is usually 21 nt in length. Avoid regions within 50-100 bp of the start codon and the termination codon Avoid intron regions Avoid stret ...

Chemicals needed:GlucoseL-(+)-Arabinose Sigma Cat # A3256L-RhamnoseSigma cat # R3875Cb (carbenicillin) Sigma cat # 1389DL-p-Chlorophen ...