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平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PC ...

在动物实验中被毛有时会影响实验操作与观察，因此必须除去。 一.除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脱毛等 (一)剪毛法:剪毛法是将动物固定后，先用蘸有水的纱布把被毛浸湿，再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛。不可用手提起被毛，以免剪破皮肤。剪下的毛应集中放在一容器内，防止到处飞扬。给狗、羊等动物采血或新生乳牛放血制备血清常用此法。 (二)拔毛法:拔毛法是用拇指和食指拔去被毛的方法。在兔耳缘静脉注射或尾静脉注 ...

一.标本收集和查验程序 对于所有送检的标本，必须认真执行查验程序，方能进入下一程序，其主要程序是： 1.收集标本时：要仔细查对申请单上的姓名与标本上的姓名，序号是否一致；标本的件数与申请单是否相符；标本是否用固定液固定过。 2.标本经上述验收后，进行编号登记，以防错乱。编号按年份和流水号两种方法，如果为了今后的查找较为方便，按年份编号为较好。 二.活检组织取材 在外科送检的诸多材料中，对于每一例病 ...

PCR-SSCP分析的基本程序为：首先PCR扩增特定靶序列，然后将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，DNA单链的迁移率除与DNA链的长短有关外，更主要的是取决于DNA单链所形成的构象。在非变性条件下，DNA单链可自身折叠形成具有一定空间结构的构象。这种构象由DNA单链碱基决定，其稳定性靠分子内局部顺序的相互作用（主要为氢键）来维持。相同长度 ...

一、离心机操作步骤 １.接通电源，打开离心机盖。 ２.按要求装配好离心管。 ３.按要求安装离心转头。 ４.关上离心机盖。 ５.输入离心数据，编离心程序。 ６.抽真空，并开始运行程序。 ７.程序结束后，去真空。 ８.打开离心机盖，取出转头。 ９.取出离心管并进行分析。 二、离心管的选用 1.玻璃离心管绝对不能在高、超速离心机上使用。 2.PA管：化学性能稳定，半透明，能耐高温消毒。 3.PP管：化学 ...

变性梯度胶凝电泳(DGGE)能够将具有单个碱基差别的DNA分子分离开来。分离以 DNA在溶液中的解链特性为基础。以温度或变性剂浓增高时，DNA分子在不同的区域相 对应的解链温度称为基础。解链区域的长度从25个碱基对到数百个碱基对不等，与每 一个解链区域相对应的解链温度称为解链温度(Tm)。由于一个DNA链上相邻碱基间的 堆积作用在DNA双螺旋的稳定上起着相当重要的作用，因此解链区域的Tm值主要取决 ...

SP(streptavidin-perosidase)法，即链霉菌亲和素-过氧化物酶法。按标记物质的种类如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)；按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法和亲和连接，如卵白素- ...

一.豚鼠采血法 1.耳缘剪口采血 将耳消毒后，用锐器(刀或刀片)割破耳缘，在切口边缘涂抹20%柠檬酸钠溶液，阻止血凝，则血可自切口自动流出，进入盛器。操作时，使耳充血效果较好。此法能采血0.5ml左右。 2.心脏采血 取血前应探明心脏搏动最强部位，通常在胸骨左缘的正中，选心跳最显的部位作穿刺。针头宜稍细长些，以免发生手术后穿刺孔出血，其操作手法详见兔心脏采血。因豚鼠身体较小，一般可不必将动物固定在 ...

五、火箭电泳试验 火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为：在电场作用下，抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动，二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线，而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系，因此本法可以测定样品中抗原的含量。 1.材料： （1）诊断血清（抗体）：抗人IgG或IgA免疫血清 （2）待检血清（抗原）：人血清 （3）参考血清 （4）pH8.6，离子强度0.05M巴 ...

1 离心机类型 (1)普通离心机 (2)高速离心机 (3)超高速离心机 ①制备性超速离心机 主要由驱动和速度控制、温度控制、真空系统和转头四部分组成。 ②分析性超速离心机 分析性超速离心机使用了特殊设计的转头和检测系统，以便连续地监视物质在一个离心场的沉降过程。 2 操作注意事项 离心机工作时是高速运转 ...

四、免疫电泳实验 免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离，然后于凝胶槽中加入抗体血清。使抗原抗体进行双向扩散，在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物，故可用抗原成分分析；且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。 1.材料： （1）待检标本（抗原）：正常人血清。 （2）抗体：正常人血清的家兔免疫血清。 （3）1.5%离子琼脂（系用巴比妥缓冲液 ...

三、对流免疫电泳试验 对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果，故可用于快速诊断，敏感性比双向扩散技术高10-15倍。 血清蛋白在PH8.6条件下带负电荷，所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷，而且它的分子量又较大（为r球蛋白）。所以游动慢。更重要的是抗体分子受电渗作用影响较大，也就是说点渗作用 ...

采血方法的选择，决定于实验的目的所需血量以及动物种类。 凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。例如，研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、动脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及 K+、Na+、CI ...

二、琼脂扩散试验 琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。 抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散试验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火 ...

可溶性抗原与相应的抗体混合，在电解质存在的条件下，两者比例适合，即可有沉淀物出现，叫沉淀反应（Precipitation）.由于沉淀反应抗原多系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。 为了求得抗原与抗体的适宜比例，保证有足够的抗体，而且抗原分子小，具有较大的反应面积，因此操作上通常是稀释抗原，不稀释抗体。 沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫电泳等。此外还有放射性同位 ...

1、打开离心机电源开关，进入待机状态。 2、选择合适的转头：877转头配套的离心管为200ml专用管，875转头配套离心管为40ml专用管，离心时离心管所盛液体不能超过总容量的2/3，否则液体易于溢出；使用前后应注意转头内有无漏出液体残余，应使之保持干燥。转换转头时应注意使离心机转轴和转头的卡口卡牢。 3、离心管平衡误差应在0.1克以内。 4、选择离心参数： 按温度设置按钮，再用数字键设置离心温度 ...

1.按“power”键打开离心机电源开关； 2.平衡放置离心管； 3.设置离心参数： （1）调节温度按钮，设定所需离心温度； （2）调节速度设置按钮，设定所需离心速度，但最高不得超过14000rpm； （3）揿分/秒选择按钮，确定使用“分”或“秒”计时，再调节时间设置按钮，设置离心时间； （4）盖上离心机 ，按“s ...

离心机的种类很多，根据转速不同，可以分为低速离心机、高速离心机和超速离心机，转速少于6000r/min的为低速离心机，低于25000r/min的为高速离心机，超过30000r/min的是超速离心机；根据用途不同，还可以将离心机分为分析离心机和制备离心机。 一般实验室装备的离心机其最大转速约为4000r/min左右的台式或落地式离心机，现简要叙述一般离心机的使用方法。 1． 将待离心的液体置于离心 ...

1. 使用本仪器须在仪器管理人员指导下进行。2. 接通电源，打开仪器主机、冷阱以及真空隔膜泵。3. 开启真空泵时冷阱温度应至少低于-50℃。4. 抽真空前注意仪器所有的阀门应该关闭。5. 实验完成后恢复气压时，可等待自动放气，也可使用冷阱后方的放气阀进行缓慢放气。完全放气后才可以打开仪器盖。6. 严格按照使用情况登记使用记录，在管理人员同 ...

PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带。 PCR反应的关键环节有 ①、模板核酸的制备 ②、引物的质量与特异性 ③、酶的质量 ④、PCR循环条件。 寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①、模板中含有杂蛋白质；②、模板中含有Taq酶抑制剂；③、模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白；④、在提取制备模 ...