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丁香园网友卡列宁的微笑的观点： 用Langendorff灌流消化（胶原酶II）只能取得心肌细胞。建议直接将心脏剪碎，成纤维细胞我们这里一般采用0.05％胰酶消化。无菌条件取出心脏D-hank's液（PBS也可）漂洗，剪碎心脏加入5倍体积消化液，37C水浴3－5min，反复吹打，静置，待自然沉降后弃去上清液。剩余沉淀再加入约5倍体积0.08%胰蛋白酶及0.1%胶原酶II混合液，反复吹打，大约10分钟 ...

摘 要 一、人成骨肉瘤MG-63细胞株和成人成骨细胞的培养与分化特性的观察 目的：观察人成骨肉瘤MG-63细胞株和正常成人成骨细胞分化的特性。方法：在细胞培养的不同时间，用α-磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶（ALP）活性；放射免疫法测定骨钙素（BGP）含量；半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测I型胶原、MMP-1、TIMP-1基因mRNA表达；Van GieSon氏苦味酸酸 ...

Neuroendocrine regulation of cyclic AMP formation in osteoblastic cell lines (UMR-106-01 ROS 17/2.8 MC3T3-E1 and Saos-2) and primary bone cells. The effect of four different neuropeptides and norepine ...

Tumour suppressor p53 and Rb genes in human hepatocellular carcinoma. Aberrations of the p53 and Rb tumour suppressor genes were examined in 12 human hepatocellular carcinoma (HCC)-derived cell lines ...

颞叶癫痫由于药物治疗的效果较差成为难治性癫痫中的一大类。以往多采用系统给药的方法建立大鼠海仁酸( kainic acid KA)颞叶癫痫模型国内外偶有局部给药制作模型者但均未对模型本身进行系统研究同时所用海仁酸的浓度和剂量等差异较大。我们用立体定向技术对海马给药建立大鼠颞叶癫痫模型所需海仁酸的浓度和剂量以及模型的电生理特征和癫痫敏感性永久存在的病理学基础等进行了研究报告如下。 【材料与方法】 一、 ...

经典的沉淀试验有4个缺点无法克服，即操作繁琐、敏感度低（10～100μg/ml）、时间长和难以自动化。根据抗原与抗体能在液体内快速结合的原理，70年代出现了微量免疫沉淀测定法，即免疫透射浊度测定、免疫胶乳浊度测定和免疫散射浊度测定法。这3种技术皆已常规用于临床体液蛋白的检测，并已创造出了多种自动化仪器。 免疫浊度测定的基本原理是：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度 ...

一、实验原理 火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis，RIEP）是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时，含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此，当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成 ...

液液分配（LLE）有许多局限性，例如需要大量不互溶溶剂；样品处理步骤复杂；样品回收率和精密度不理想；处理过程中乳液的形成，和溶剂蒸发时产生的样品损失等等。 固相萃取（SPE）主要用于样品分析前的净化或浓缩富集。与传统的液－液萃取相比，由于其采用了高效、高选择性的固定相，能显著减少溶剂用量，简化样品预处理过程，同时所需费用也有所减少，一般来说，固相萃取所需时间为液－液萃取的1／12，费用为液液分配的 ...

固相萃取（SPE）在样品前处理中的应用日趋广泛。和传统的样品前处理方法相比，固相萃取具有效率更高、效果更好、容易达到定量萃取、实现快速和自动化等众多优势。 采用固相萃取技术可以去掉复杂样品中的基质干扰，提高样品纯度和检测灵敏度，延长色谱系统和色谱住的寿命。 固相萃取的作用机理 1、反相固相萃取：反相分离包括一个极性（通常是水溶液）或中等极性的样品基质和一个非极性的固定相。所感兴趣的分析物通常是中等 ...

固相萃取(Solid-Phase Extraction 简称ＳＰＥ)是 近年发展起来一种样品预处理技术 由液固萃取和柱液相色谱技术结合发展而来 主要用于样品的分离、纯化和浓缩与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率、更有效的将分析物与干扰组分分离减少样品预处理过程，操作简单，省时，省力。广泛的应用在医药、食品、环保、商检、农药残留等领域 原理：固相萃取是一个包括液相和固相的物理萃取过程。在 ...

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超滤技术的关键是膜。膜有各种不同的类型和规格，可根据工作的需要来选用。早期的膜是各向同性的均匀膜，即现在常用的微孔薄膜，其孔径通常是0.05 mm ～1.0mm。近几年来生产了一些各向异性的不对称超滤膜，其中一种各向异性扩散膜是由一层非常薄的、具有一定孔径的多孔“皮肤层”（厚约0.1m和0.025mm），和一层相对厚得多的（约1m）更易通渗的、作为支撑用的“海绵 ...

当需要以植物药材为原料制剂备浸出制剂时，一般均择适宜的浸出方法和溶媒，将药材中有效成分可有效发提取出来，然后将取液过滤以作进一步处理。 一、提出 又称浸提。浸提过程一般分为三个阶段：浸润渗透一解吸溶解一扩散及溶剂置换。影响浸提的因素有：药材粉碎度、温度、时间、浓度差（即细胞内外浓度）以及溶媒的PH值等。常用的提取方法有以下几种： 1、浸渍法适用于有效成分遇热易挥发和易破坏的药。按溶剂的温度分为热浸 ...

红豆杉(Taxus)又名紫杉，也称赤柏松，生于海拔1000～1200m处的山地，是世界上公认的濒临灭绝天然珍稀植物，从其根、皮、茎、叶中提取的紫杉醇(taxol)是目前世界上最有效的抗癌药物之一。全球每年大约需要1500～2500kg紫杉醇，而1 kg树皮仅能提取50～100mg。 10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(又称10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ，10-deacetylbaccatinⅢ，10-DABⅢ)为 ...

超滤原理 超滤（Ultrafiltration）技术是一种膜滤法，也有错流过滤（Cross Filtration）之称。它能从周围含有微粒的介质中分离出10～100A的微粒，这个尺寸范围内的微粒，通常是指液体内的溶质。其基本原理是在常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜介质，依靠膜两侧的压力差作为推动力，以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，大分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚 ...

当需要较高的收率时，尤其当研究的样品对象在微克范围时，建议应考虑以下几点： 1、根据样品处理量，选择最小可用的超滤容器，在小容器中反复添加样品，反复超滤。 2、在适量范围内，选截留分子量最低的超滤膜。 3、如可能，使用水平转头代替角转头离心，这样可减少在离心过程中溶液与离心管接触的表面积。 4、将压力或离心力降低到大约最大推荐数值的一半。 5、避免过度浓缩，最终体积越小，越难得到完全回收，如可能， ...

超滤透过通量的影响因素如下： 1、料液流速 提高料液流速虽然对减轻浓差极化、提高透过通量有利，但需要提高料液压力，增加耗能。一般紊流体系中流速控制在1-3m/s。 2、操作压力 超滤膜透过通量与操作压力的关系取决于膜和凝胶层的性质。超滤过程为凝胶化模型，膜透过通量与压力无关，这时的通量成为临界透过通量。实际操作压力应在极限通量附近进行，此时的操作压力约为0.5-0.6Mpa。 超滤过程中只有当 ...

超滤装置是在一个密闭的容器中进行，以压缩空气为动力，推动容器内的活塞前进，使样液形成内压，容器底部设有坚固的膜板。小于膜板孔径直径的小分子，受压力的作用被挤出膜板外，大分子被截留在膜板之上。超滤开始时，由于溶质分子均匀地分布在溶液中，超滤的速度比较快。但是，随着小分子的不断排出，大分子被截留堆积在膜表面，浓度越来越高， 自下而上形成浓度梯度，这日才超滤速度就会逐渐减慢，这种现象称为浓度极化现象。为 ...

一、实验常用手术器械 机能实验常对动物进行手术，因此识别和正确使用各种手术器械，既关系到操作能力的培养和实验的成败，也为今后完成动物外科打下基础。现将常用的手术器械种类及使用简述如下 （一）剪刀 1、手术剪（组织剪） 有直、弯两型，又分圆头和尖头两种。手术剪用于剪肌膜、浅筋膜、神经和血管等软组织；也可用于剪手术线。 2、眼科剪 多用于剪较小范围内的神经和血管等软 ...

动物实验过程中，可因麻醉药过量、出血过多、分泌物或血块堵塞气管造成窒息以及某种药物原因引起动物血压、呼吸不规则等现象，此时应立即进行急救处理措施。 急救处理措施首先要迅速排查原因，并中断诱因（如止血、停药、排除分泌物等），然后对症实施急救措施。 一、呼吸、心跳（血压）的改变 动物实验过程中，需密切观察实验动物的呼吸、心跳及血压的变化，一者它们是实验反应的数据指标，二者是实验动物状态的主要指征。尤其 ...