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PCR引物设计原则

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它。如这一段不能形成二级结构,那就可以在这一区域设计引物。 现在可以在这一保守区域里设计一对引物。一般引物长度为15-30碱基,扩增片段长 ...

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卡氏水份测定仪容量法与库仑法的区别

问:卡氏水份测定仪,容量法与库仑法的区别有哪些? 答:二者的基本原理都是一样的,在合适的弱碱如吡啶存在时,I2将SO2氧化为硫酸同时定量的消耗2个水,基本反应为:I2+SO2+2H2O=H2SO4+2HI,因此可以用I2来测定水的含量。 容量法和库仑法的最大区别在于I2的来源不同,容量法中的I2来自于滴定剂,而库仑法中I2则通过电解含I-离子的电解液产生。通过电解池的电量与I量是有着严格的定量关系 ...

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实时定量PCR应用中的问题及优化方案

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。随着分子生物学技术研究的不断进展,定量PCR技术取得了突飞猛进的发展,不仅建立了一系列的方法,而且也诞生了许多与这些方法相匹配的新型热循环仪和实验材料。实时定量PCR(real-time quanti ...

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ZDJ-3S卡氏微量水分测定仪操作规程

1、目的: 建立ZDJ-3S卡氏微量水分测定仪使用操作规程的使用操作规程,使检验人员正确操作。 2、适用范围: 适用于质检中心ZDJ-3S卡氏微量水分测定仪的使用和维护。 3、责任者: 操作人员对本规程实施负责。 4、规程: 4.1打开电源开关后,开机显示欢迎界面,在输入实验员名称后进入等机状态,如不输入,按“退出”键。 4.2清洗滴定管  4.2.1全程清洗, ...

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水分测定仪的保养与维护

一、仪器的安装及场所: 1、仪器不得安装在有腐蚀性气体的室内,对仪器电路部分腐蚀,缩短仪器寿命。 2、仪器不得安装在室温低于5度或高于40度的地方。 3、不得安装在阳光照射与湿度大的地方。 4、不得安装在电源不稳定的地方,建议使用电子稳压器。 二、电极的保养: 1、测量电极被污染时,可用丙酮或无水乙醇进行擦拭,如仍不能去污,可用酒精灯烧铂金球端。 2、电解电极被污染时,可将丙酮或无水乙醇注入阴极室 ...

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787容量法水分测试仪简明使用手册(图)

787容量法水分测试仪适用于:常规水分测定。 787水分测试仪是采用标定好的卡尔-费休试剂对样品进行滴定,根据消耗的体积(m)来计算样品中的含水量。 ...

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WA-1C水分测定仪使用说明书

WA-1C水分测定仪应用经典的卡尔-费休测水原理及库伦滴定原理,结合先进的计算机技术研制而成,具有灵敏度高、分析速度快、结果准确、稳定性好、操作方便灵活等特点。仪器使用当前流行的液晶模块。显示日历、始终时钟、操作参数及测量数据结果,并有微型打印机记录测量结果、操作参数以及分析测量的日期和时间,便于用户存档。 仪器主要应用于石油、化工、冶金、电力、粮食、医药、农药、环保、地质等领域的生产、研究部门。 ...

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动物实验基本操作之七“给药途径与方法”

在动物实验过程中,应根据不同的实验目的、动物种类、药物类型来决定动物的给药途径与方法。动物的给药方法主要分为注射法和投入法两种,不同方法按给药途径又分为很多具体类型。注射法分为:皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、脑膜下注射、脑内注射、胸腔内注射、腰椎内注射、静脉注射、关节腔注射和心内注射。投入法可分为:鼻腔内投入、胃腔内投入、肠管内投入、气管内投入和经口腔投入。以下将各种动物的主要给药途径和方法做一介 ...

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动物实验基本操作之六“常规采血方法”

一、不同实验动物采血方法的选择 决定于实验目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定,血液涂片以及酶活性微量分析法等,可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时,若需反复多次,应自远离心脏端开始,以免发生栓塞而影响整条静脉。而研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱,需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血pH值以及K+、Na+、 ...

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PCR技术综述

前言 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统BillClinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerasechainreaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。这也是分子生物医学令人震撼的一例。 何谓PCR 简单的说 ...

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免疫固定电泳扫描(图)

一、免疫固定电泳介绍 鉴定某一蛋白成分最好的方法是通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原性。免疫 固定电泳是抗原在载体上电泳后直接用抗血清作用于蛋白,进行抗原抗体反应,使 抗原在电泳位置被免疫固定。 血、尿中游离轻链(本周氏蛋白)的检测对诊断轻链病是不可缺少的步骤,并对多 发性骨髓瘤等疾病的预后判断也有一定帮助。免疫学方法是使用抗轻链(KAP或LAM) 抗血清进行免疫分析。 二、实验仪器 Sebi ...

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免疫固定电泳操作规程

一、项目名称 免疫固定电泳(HYDRAGEL IMMUNOFIXATION) 二、检验方法名称 琼脂糖凝胶免疫固定电泳 三、方法学原理 血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。免疫固定电泳是一种简单的技术,电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上,通过下列四 ...

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动物实验基本操作之五“分组与编号”

动物实验之前,必须对实验动物进行随机分组和编号标记,这是做好实验和实验记录的前提。 一、随机分组 (一)当分为二组时 例:设有雄性Wistar大鼠12只,按体重大小依次编为1,2,3,…,12号,试用完全随机的方法,分为甲、乙两组。 分组方法:假设所产生的点是随机数字表上第21行第31列的78,则从78开始,由上向下抄12个随机数字,如下: 动物编号:1 2 3 4 5 6 7 8 ...

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免疫胶体金银细胞化学染色中固定剂选择

免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能有一种适用于所有抗原的固定剂,而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下,仅供参考 ...

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冷凝集实验知识及操作步骤

一、概念与临床意义 冷凝集实验主要用于由肺炎支原体引起的原发性非典型性肺炎的辅助诊断。参考值:凝集价≤1:32;临床意义:由肺炎支原体感染引起的原发性非典型性肺炎患者的血清中常含有较高的寒冷红细胞凝集素,简称冷凝集素,它能与患者自身红细胞或“O”型人红细胞于4℃条件下发生凝集,在37℃时又呈可逆性完全散开。75%的支原体肺炎病人,于发病后第二周血清中冷凝集素效价达1: ...

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彩色免疫金银法(CIGSS)操作指南

1、基本原理 彩色免疫金银法(coloured IGSS简称CIGSS)是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS方法染色在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银,后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银,而彩色显影剂本身则被氧化,其氧化产物使彩色成色剂由无色变成有色的染料并沉积在银颗粒的部位,金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积 ...

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免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项

一、免疫荧光的标本制作的基本程序同DAB显色的免疫组化,不同点如下: 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理,封闭和一抗孵育与其它相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育,孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片使用专用封片剂或甘油:0.01MPBS (1:1)。 5、条件许可可以购买防淬灭的试剂加入封片剂中,标本可以保存更久。 ...

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动物实验基本操作之四“妊娠检查”

一、妊娠诊断 雌性动物妊娠后会发生一系列的复杂变化。为了在配种以后能及时掌握雌性动物是否妊娠、妊娠的时间及胎儿和生殖器官的异常情况,采用临床和实验室的方法进行检查,称为妊娠检查,又称妊娠诊断(pregnancy diagnosis)。通过妊娠检查,可以及时地对雌性动物加强护理或再次配种,以保护母体和胎儿的正常发育,避免胎儿早期死亡和流产及减少繁育时间的损失。妊娠检查不但要求准确,且及早确诊更为重要 ...

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荧光显微镜的简易操作与注意事项

1、荧光显微镜基本操作流程 (1)关闭房间内的电灯,开启显微镜汞灯。 (2)根据样品荧光素选择相应荧光组件。 (3)选择滤光片。 (4)放好样品,找到合适的视野。 (5)需拍照先确认照相机已装好。 (6)使用结束关闭所有电源并做好使用记录。 (7)如需详细说明,请借阅说明书。 2、荧光显微镜使用注意事项 (1)荧光几乎都较弱,应在暗室内进行。 (2)关闭汞灯至少在开启15分钟后。 (3)尽可能缩 ...

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飞行质谱技术引人关注

飞行质谱的全称是表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF或SELDI)。质谱技术-飞行质谱是由2002年诺贝尔化学奖得主田中(Tanaka)发明,赛弗吉(Ciphergen)系统生物公司制造的特殊芯片,诞生伊始便引起学术界的重视,成为最引人注目的亮点。 工作原理 早期的飞行质谱为基质辅助激光解吸离子飞行质谱(MALDI-TOFMS),基质使被分析蛋白质离子化,再由质谱测定。SELD ...

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