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免疫浊度法

经典的沉淀试验有4个缺点无法克服,即操作繁琐、敏感度低(10~100μg/ml)、时间长和难以自动化。根据抗原与抗体能在液体内快速结合的原理,70年代出现了微量免疫沉淀测定法,即免疫透射浊度测定、免疫胶乳浊度测定和免疫散射浊度测定法。这3种技术皆已常规用于临床体液蛋白的检测,并已创造出了多种自动化仪器。 免疫浊度测定的基本原理是:抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物,使反应液出现浊度 ...

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火箭免疫电泳实验原理及操作步骤

一、实验原理 火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此,当琼脂中抗体浓度固定时,以不同稀释度标准抗原泳动后形成 ...

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固相萃取技术

液液分配(LLE)有许多局限性,例如需要大量不互溶溶剂;样品处理步骤复杂;样品回收率和精密度不理想;处理过程中乳液的形成,和溶剂蒸发时产生的样品损失等等。 固相萃取(SPE)主要用于样品分析前的净化或浓缩富集。与传统的液-液萃取相比,由于其采用了高效、高选择性的固定相,能显著减少溶剂用量,简化样品预处理过程,同时所需费用也有所减少,一般来说,固相萃取所需时间为液-液萃取的1/12,费用为液液分配的 ...

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Silicycle固相萃取指南

固相萃取(SPE)在样品前处理中的应用日趋广泛。和传统的样品前处理方法相比,固相萃取具有效率更高、效果更好、容易达到定量萃取、实现快速和自动化等众多优势。 采用固相萃取技术可以去掉复杂样品中的基质干扰,提高样品纯度和检测灵敏度,延长色谱系统和色谱住的寿命。 固相萃取的作用机理 1、反相固相萃取:反相分离包括一个极性(通常是水溶液)或中等极性的样品基质和一个非极性的固定相。所感兴趣的分析物通常是中等 ...

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固相萃取

固相萃取(Solid-Phase Extraction 简称SPE)是 近年发展起来一种样品预处理技术 由液固萃取和柱液相色谱技术结合发展而来 主要用于样品的分离、纯化和浓缩与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率、更有效的将分析物与干扰组分分离减少样品预处理过程,操作简单,省时,省力。广泛的应用在医药、食品、环保、商检、农药残留等领域 原理:固相萃取是一个包括液相和固相的物理萃取过程。在 ...

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超滤法

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超滤膜

超滤技术的关键是膜。膜有各种不同的类型和规格,可根据工作的需要来选用。早期的膜是各向同性的均匀膜,即现在常用的微孔薄膜,其孔径通常是0.05 mm ~1.0mm。近几年来生产了一些各向异性的不对称超滤膜,其中一种各向异性扩散膜是由一层非常薄的、具有一定孔径的多孔“皮肤层”(厚约0.1m和0.025mm),和一层相对厚得多的(约1m)更易通渗的、作为支撑用的“海绵 ...

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基本操作技术:提取与过滤

当需要以植物药材为原料制剂备浸出制剂时,一般均择适宜的浸出方法和溶媒,将药材中有效成分可有效发提取出来,然后将取液过滤以作进一步处理。 一、提出 又称浸提。浸提过程一般分为三个阶段:浸润渗透一解吸溶解一扩散及溶剂置换。影响浸提的因素有:药材粉碎度、温度、时间、浓度差(即细胞内外浓度)以及溶媒的PH值等。常用的提取方法有以下几种: 1、浸渍法适用于有效成分遇热易挥发和易破坏的药。按溶剂的温度分为热浸 ...

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红豆杉提取液的过滤

红豆杉(Taxus)又名紫杉,也称赤柏松,生于海拔1000~1200m处的山地,是世界上公认的濒临灭绝天然珍稀植物,从其根、皮、茎、叶中提取的紫杉醇(taxol)是目前世界上最有效的抗癌药物之一。全球每年大约需要1500~2500kg紫杉醇,而1 kg树皮仅能提取50~100mg。 10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(又称10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ,10-deacetylbaccatinⅢ,10-DABⅢ)为 ...

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超滤原理及其优缺点

超滤原理 超滤(Ultrafiltration)技术是一种膜滤法,也有错流过滤(Cross Filtration)之称。它能从周围含有微粒的介质中分离出10~100A的微粒,这个尺寸范围内的微粒,通常是指液体内的溶质。其基本原理是在常温下以一定压力和流量,利用不对称微孔结构和半透膜介质,依靠膜两侧的压力差作为推动力,以错流方式进行过滤,使溶剂及小分子物质通过,大分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚 ...

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提高超滤收率方法

当需要较高的收率时,尤其当研究的样品对象在微克范围时,建议应考虑以下几点: 1、根据样品处理量,选择最小可用的超滤容器,在小容器中反复添加样品,反复超滤。 2、在适量范围内,选截留分子量最低的超滤膜。 3、如可能,使用水平转头代替角转头离心,这样可减少在离心过程中溶液与离心管接触的表面积。 4、将压力或离心力降低到大约最大推荐数值的一半。 5、避免过度浓缩,最终体积越小,越难得到完全回收,如可能, ...

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超滤透过通量的影响因素

超滤透过通量的影响因素如下: 1、料液流速 提高料液流速虽然对减轻浓差极化、提高透过通量有利,但需要提高料液压力,增加耗能。一般紊流体系中流速控制在1-3m/s。 2、操作压力 超滤膜透过通量与操作压力的关系取决于膜和凝胶层的性质。超滤过程为凝胶化模型,膜透过通量与压力无关,这时的通量成为临界透过通量。实际操作压力应在极限通量附近进行,此时的操作压力约为0.5-0.6Mpa。 超滤过程中只有当 ...

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超滤类型及其原理

超滤装置是在一个密闭的容器中进行,以压缩空气为动力,推动容器内的活塞前进,使样液形成内压,容器底部设有坚固的膜板。小于膜板孔径直径的小分子,受压力的作用被挤出膜板外,大分子被截留在膜板之上。超滤开始时,由于溶质分子均匀地分布在溶液中,超滤的速度比较快。但是,随着小分子的不断排出,大分子被截留堆积在膜表面,浓度越来越高, 自下而上形成浓度梯度,这日才超滤速度就会逐渐减慢,这种现象称为浓度极化现象。为 ...

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动物实验基本技术之十一“手术操作”

一、实验常用手术器械 机能实验常对动物进行手术,因此识别和正确使用各种手术器械,既关系到操作能力的培养和实验的成败,也为今后完成动物外科打下基础。现将常用的手术器械种类及使用简述如下 (一)剪刀 1、手术剪(组织剪) 有直、弯两型,又分圆头和尖头两种。手术剪用于剪肌膜、浅筋膜、神经和血管等软组织;也可用于剪手术线。 2、眼科剪 多用于剪较小范围内的神经和血管等软 ...

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动物实验基本技术之十“急救措施”

动物实验过程中,可因麻醉药过量、出血过多、分泌物或血块堵塞气管造成窒息以及某种药物原因引起动物血压、呼吸不规则等现象,此时应立即进行急救处理措施。 急救处理措施首先要迅速排查原因,并中断诱因(如止血、停药、排除分泌物等),然后对症实施急救措施。 一、呼吸、心跳(血压)的改变 动物实验过程中,需密切观察实验动物的呼吸、心跳及血压的变化,一者它们是实验反应的数据指标,二者是实验动物状态的主要指征。尤其 ...

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动物实验基本操作之九“处死方法”

当实验中途停止或结束时,实验者应站在实验动物的立场上以人道的原则去处置动物,原则上不给实验动物任何恐怖和痛苦,也就是要施行安乐死。安乐死是指实验动物在没有痛苦感觉的情况下死去。实验动物安乐死方法的选择取决于动物的种类与研究的课题。 一、蛙类 常用金属探针插入枕骨大孔,破坏脑脊髓的方法处死。将蛙用湿布包住,露出头部,左手执蛙,并用食指按压其头部前端,拇指按压背部,使头前俯;右手持探针由凹陷处垂直刺入 ...

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动物实验基本操作之八“麻醉方法”

麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉,保障实验动物的安全,使动物在实验中服从操作,确保实验顺利进行。 一、常用的麻醉剂 (一)动物实验中常用的麻醉剂分为三类,即挥发性麻醉剂、非挥发性麻醉剂和中药麻醉剂。 1、挥发性麻醉剂 包括乙醚、氯仿等,乙醚吸入麻醉适用于各种动物,其麻醉量和致死量差距大,所以安全度亦大,动物麻醉深度容易掌握,而且麻后苏醒较快。其缺点是对局部 ...

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实验性X综合征大鼠模型的建立

1988年Reaven提出X综合征目前多称“代谢综合征”也称“胰岛素抵抗综合征”(Syndrom of insu- lin resistanceSIR)它不等同于胰岛素抵抗(insulin resistanceIR)而是一组临床和实验室的征候群其主要表现为: IR、高血压、高胰岛素血症及脂质代谢紊乱其核心问题是IR。该病的发生即有遗传因素也有环境因素 ...

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性功能障碍的药效学试验

阳痿系临床最常见的性功能障碍,其病因、病情复杂,既有病理原因造成的性功能低下,又有生理原因造成的性功能衰退。补肾壮阳药主治肾虚阳痿、早泄等性功能障碍。在此探讨功能性性功能障碍药效学研究的设计和方法。 1、去势大鼠模型 1.1 原理 成年雄性大鼠去势,可复制肾阳虚模型。 1.2 方法 1月龄的SD或Wistar大鼠,体质量100~120 g,雄性大鼠在戊巴比妥钠麻醉下行双侧睾丸切除术,术后肌注青霉素 ...

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影响PCR仪器温度控制性能的因素

一、PCR仪器之间的差别对实验结果的影响。如前所述,没有任何两台PCR仪器的温度控制是一模一样的。相对于预设的温度模块温度总是偏高或偏低,就是同一模块不同的孔之间,温度有时也会不一样,相差可能达几摄氏度之多。一些PCR仪温度控制性能的不足造成的后果是:当PCR仪的模块温度在升温时,温度过冲或不足,不能准确的达到预设的平台温度。 二、温度控制技术的差别对实验结果的影响。导致PCR仪温度控制性能优劣的 ...

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