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Abstract: Single strand conformational polymorphism (SSCP)is the most widely used PCR-based methods for point mutation detection. The abnormal band found by SSCP analysis is normally verified ...

Tissue collection storage microdissection sectionin g: See separate protocol. Tissue handling : Note that all fresh tissue shoμld be handled as BioSafety Level 2 materials (wear gloves lab coat etc ...

1）致癌化学物转化细胞：转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验 1．取材：妊娠后第13天取材，取数个同窝胚胎，去头和内脏，在无菌条件下剪碎至米粒大小，再用0.25%胰蛋白酶（含0.01%EDTA）37℃消化30分钟，滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入75cm/培养瓶中，接种密度10～20×106/75cm，37℃培养2～3天，在顺利情况下能迅速长满瓶面。 2．贮存：选大 ...

双酶切buffer的选择： 1、U ：Supplied with its own unique reaction buffer that is different from the four standard NEBuffers. Its compatibility with the four standard NEBuffers is indicated by the chart. 2、BSA ...

我做了稳定转染，从G418浓度确定到最后的单克隆化鉴定。有自己的体会也有其他战友遇到的情况，和大家分享. 没有总结好的地方，大家补充。 筛选之前确定G418浓度： 1.由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。 2.G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是 ...

基因(gene)是遗传物质的最基本单位，也是所有生命活动的基础。不论要揭示某个基因的功能，还是要改变某个基因的功能，都必须首先将所要研究的基因克隆出来。特定基因的克隆是整个基因工程或分子生物学的起点。本文就基因克隆的几种常用方法介绍如下。 1　根据已知序列克隆基因 对已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最为简便的一种。获取基因序列多从文献中查取，即将别人报道的基因序列直接作为自己克隆的依据。现在 ...

质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。 质粒的提取方法很多，大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例，介绍质粒的抽提过程。 实验目的：掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。 实验材料：含有质粒pUC18载体的大肠杆菌菌液，克隆有水稻外源片段的BA ...

SDS 高盐法(方案1) 　 具体步骤: 称取1g 土壤放入研钵中倒入适量的液氮立即研磨;再倒入适量的液氮研磨重复3 次使土壤颗粒研成粉末; 将13.5 ml 提取缓冲液(0.1 mol/L磷酸盐 0.1 mol/L EDTA 0.1 mol/L Tris-HCl 1.5 mol/L NaCl 1.0 % CTAB) 和50μl蛋白酶K(10 g/L ) 与5 g 土壤置于50 m ...

申海鹰 周元国（第三军医大学野战外科研究所分子生物学中心，重庆400042） 摘要 疾病基因的分离和克隆 是功能学的研究热点，具体策略的选择取决于疾病背景资料的掌握程度，为能快速、准确地克隆 出目的基因，本文介绍两类常用的基因克隆 策略――定位克隆 策略、功能策略――及其主要方法，如：家系连锁分析、等位基因共占法、人群相关分析法、抑制性消减杂交、差示反转录PCR、差异消减显示法、代表性差异分析法、 ...

1　概　述 核酸的分子杂交(molecular hybridization)技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA 或DNA 序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来的。在碱性环境中加热或加入变性剂等条件下，双链DNA 之间的氢键被破坏(变性)，双链解开成两条单链。这时加入异源的DNA 或RNA (单链)并在一定离子强度和温度下保温 ...

近年来抗性基因研究的突破性进展、抗性基因的克隆和序列分析所揭示的其编码蛋白的组成、拓扑学和亚细胞定位等特征为揭开抗性基因的作用特点提供了线索。一般来讲基因克隆的策略可分为两种:正向遗传学途径和反向遗传学途径。前者以欲克隆的基因所表现的功能为基础通过鉴定其产物或某种表型的突变进行如功能克隆( Functional Cloning) 和表型克隆( Phenotype Cloning) ;后者则着眼于基 ...

目的： 在体外连接组装而成的重组DNA分子只能转入合适的受体细胞，才能大量地进行复制、增殖和表达。通过实验学会重组DNA转化的最基本的操作以及如何提高转化效率的基本思路。 原理： 带有外源DNA片段的重组体分子在体外构建成后，需要导入适当的宿主细胞内进行繁殖或表达出具有一定生物活性的蛋白。能够作为重组体转化的受体，主要有动物细胞、植物细胞、微生物细胞等。导入受体细胞的途径重要有转化（转染），显微注 ...

摘　要　对植物中DNA抽提是在分子水平上对植物进行系统分析与研究的基础性工作.经多次实验，使用改良的CTAB法抽提山茶属植物中总DNA，即在抽提前加入抗氧化剂β-巯基乙醇，并使用冷冻的异丙醇来沉淀DNA， 获得了较好的效果，其纯度和得率完全能满足常规分子生物学操作的要求. 关键词　山茶属植物；DNA抽提；叶片；改良CTAB法 中图法分类号　Q523；Q949.758.4 DNA Ex ...

前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，结合丁香园战友的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。 1、回收PCR产物： 在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHIHindIII提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各 ...

原理 DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中，制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。 蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。在匀浆后提取 DNA 的反应体系中， SDS 可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA 分子分 ...

Use from 0.01 - 0.1 gram plant material. Grind the plant material with liq. N2 in a mortar. We normally use some alumina to crush hard tissue. Transfer the ground tissue to a eppendorf tube. Add 1 ...

This clearly is an "old procedure revisited" but is extremely efficient because 1) the amount of resulting nested fragment set is at least 5 to 10 times more than obtained by Sephadex G-50 ...

Yale Genome Analysis Center Yale University http://ygac.med.yale.edu/mtn/LS_transf_prot.stm The following protocols were developed by Petra Ross-Macdonald for Mike Snyder's LacZ fusion project at Yale ...

Procedure 1. Grind 2 to 5 g of frozen leaves to a very fine powder with a liquid nitrogen-cooled mortar and pestle. 2. Add 25 ml of CTAB Buffer and transfer to a 50 ml tube. 3. Incubate a ...

I am seeking procedures and/or advice on how to isolate human genomic DNA from platoregistry sera. The sera is lymphocytes that have been frozen for 35-40 years but are not dessicated. Will the isolat ...