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溶液配制 （一）LB培养基 每1000 ml加分析纯NaCl 10 g，蛋白胨10 g，酵母粉5 g，用ddH2O配制，再用10 M NaOH调pH至7.4（100 ml一般加450 μl），高温高压蒸汽灭菌15 min冷却后使用。 固体培养基加入琼脂1.5%。 10 M（或N）NaOH配制方法是称200 g NaOH加300 ml，搅拌充分溶解后定容至500 ml。 （二）溶液Ⅰ、 ...

基因工程又称遗传工程、DNA 重组技术、分子克隆等。它是七十年代在分子生物学发展的基础上形成的新学科。所谓基因工程，就是在分子水平上，用人工方法提取（或合成）某一生物的遗传物质，在体外切割，拼接和重新组合，然后通过载体把重组的DNA 分子引入受体细胞，使外源DNA 在受体细胞中进行复制和表达。按人们的意愿定向创造生物新性状，使之稳定地遗传给下一代。所以基因工程具有广阔的应用前景，即能为工农业生产和 ...

实验目的 1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。 3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。 实验原理 转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。 转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞 ...

涂布棒在酒精蘸一下，然后烧一下，能不能保证把所用的菌烧死？ 参考见解：涂布棒可以在酒精中保藏，但是酒精不能即时杀菌。蘸了酒精后再烧一小会，烧的是酒精而不是涂布棒。建议涂布棒还是干烧较长时间后，冷却了再涂。同时作多个转化时，应用几个涂布棒免得交叉污染。 原先测序鉴定没有问题的细菌，37℃摇菌后发现质粒大小或序列出现异常? 参考见解：这种情况出现的几率较小，常出现在较大质粒或比较特殊的序列中。解决办 ...

甲基化研究对于基因的调控和肿瘤的发生有非常密切的关系。在一般正常的细胞中，基因调控区CpG岛处于非甲基化的状态。而当细胞发生癌变后，这些CG区域往往呈现甲基化状态。英国医学刊物《the Lancet》报道奥地利因斯布鲁克医学院的专家们早就可以通过检测大便中DNA的甲基化变化，把健康人的大便与结肠癌患者的大便区分开。大便标本中SFRP2 甲基化的程度是诊断结肠癌最灵敏的标记。研究人员发现 ...

问题：转化后无克隆菌产生 可能的原因：转化过程有问题或感受态细胞失活 建议：可通过转化pUC18/19等未切割的可用于抗性筛选的质粒，检测感受态细胞的转化效率和转化操作是否正确 问题：插入对照DNA片段的阳性率低 可能的原因：10×快速连接缓冲液稀释不当 建议：提供的T4 连接酶缓冲液为十倍浓度，10μl 反应体积加1μl T4 连接酶缓冲液 &n ...

一、原理 基因组DNA 文库包括了基因组所有顺序的随机克隆片段。一个好的基因组DNA 文库的大小应足够大，以便包括所有的基因DNA 顺序。DNA 克隆片段也应足够大，其中包括整个基因、连接基因及它们稳定形式所要的侧翼顺序。为了获得高的克隆效率和较大的插入片段，λ噬菌体载体和质粒经常被使用构建基因组DNA 文库。λ噬菌体文库易于操作，噬菌体载体上有多克隆位点。&lambd ...

1. 细菌离心后，加入溶液I蜗旋振荡时，发现菌体呈絮状不易混匀，或成细砂样。—— 很可能是细菌发生溶菌，可减少培养时间、降低培养温度试试看，通常降低培养温度 会使细菌生长更加稳定；同时也可以试试平板培养 ，培养后，用PBS将菌落洗下，再进行质粒的提取，固体培养基上细菌生长的要好一些。 2. 加入溶液II，菌液浑浊度没有发生明显变化。—— 裂解不完全， ...

(一) ...

1. Pour a vertical acrylamide gel using TEA buffer. A 4 % non denaturing gel is correct for most applications. 2. Run out DNA fragments. For fragments greater than 500 bp run the xylene cyanol dye to ...

When just a few transformants are sufficient such as the transformation of a test plasmid or a GAL4BD fusion plasmid the following protocol can be used. This procedure is very flexible and can be appl ...

Procedure for 100 ~ 300 mg of tissue. 1. Collect fresh tissue coleoptiles or small amount of leaf tissue. Use about three inches of a leaf blade. Preferably younger tissue. Fold leaf and place i ...

I am working with birds of prey....i am looking for a simple method for isolating genomic DNA from avian breast muscle....I have found protocols for mammalian tissue...will these work fine? als ...

Localization of particular sequences within genomic DNA is usually accomplished by the transfer techniques described by Southern (1975). Genomic DNA is digested with one or more restriction enzymes an ...

Materials: Whatman 3 mm Blotting Paper nitrocellulose (Schleicher & Schuell Amersham) or nylon membrane filter (Amersham). Paper towels (preferably C-fold "cheap-o" variety) Pyrex or Tup ...

Hahn Lab，The Fred Hutchinson Cancer Research Center and Howard Hughes Medical Institute http://www.fhcrc.org/science/labs/hahn/methods/genetic_meth/yeast_transf_rapid.html ...

Sequence Analysis . Automated (Semi-Automated) Sequencers generate a four-color chromatograms on the results of the sequencing gel as well as a text file of sequence data. The sequencer can not verif ...

CTAB TECHNIQUE / Method / Schedule / Protocol (JPB) FOR DNA ISOLATION / DNA EXTRACTION FROM PLANT LEAF / LEAVES SAMPLES (see also if both DNA and RNA are needed) Reagents needed CTAB buffer 2% CTAB&nb ...

Molecularpourous membrane tubing is used for desalting protein and DNA isolation / purification. It comes in several diameters and pore sizes (for molecular weight conversions for nucleic acids see ge ...

1. Separate DNA fragments in an agarose gel cast with 0.5 mg/mL Ethidium bromide. Locate bands with a hand-held long-wave UV lamp.2. Slice the gel with a razor blade above and below the bands of inter ...