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Saghai-Maroof MA Soliman KM Jorgensen RA & Allard RW (1984) PNAS 81:8014-8018 DNA successfully isolated from fungal species of Cochliobolus Aternaria and Fusarium. The key elements in this ...

Phenol-chloroform DNA extraction from sand flies 1. Crash Individual sand flies in 0.5 ml lysis buffer (50 mM NaCl 10 mM EDTA 50 mM Tris-HCl pH 8). 2. Incubate The sand fly homogena ...

Michael Koelle's LabDepartment of Molecular Biophysics and Biochemistry Yale University http://info.med.yale.edu/mbb/koelle/protocols/protocol_subcloning.html ...

Map-Based Cloning of KAM2 Map-based cloning of the KAM2 gene was performed essentially as described previously (Tamura et al. 2005). We used codominant cleaved amplified polymorphic sequence markers ( ...

These procedures were originally devised in Richard Palmiter's lab for use with tail dots (DNA spotted onto a nitrocellulose filter and probed for a transgene; quicker than doing southerns) and subseq ...

macerate tissue in Eppendorf tube without butter at RT add 400 ml extraction buffer vortex for 4 sec leave sample at RT until other samples are ready (> 1 h) spin in microfuge for 1 min ...

To efficiently determine the chromosomal location of phenotypic mutants we designed a genome-wide mapping strategy that can be used in any crop for which a dense AFLP (Amplified Fragment Length Polymo ...

Author: Laura-Lee Boodram Source: Laura-Lee Boodram Department of Life Sciences The University of the West Indies Abstract: The protocol is simple and fairly rapid. It does not require the use of orga ...

自杀性质粒载体完全可以自己构建，只要保证两点： 1.自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，也就是说载体上不能有能在宿主菌中复制的复制子； 2.要由筛选标记． 自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，否则会导致细菌染色体突变株的构建失败。但是在构建时，要注意以下方面： 1、在制备质粒载体和DNA插入片断时 2μg 5kb大小的线状DNA大约含有1.4poml/L5'末端磷酸。5&lsqu ...

DNA Isolation by a Cleared Lysate Method Followed by Double Acetate Precipitation Version 3b - updated September 26 1999 The Most Recent Roe Lab Implementation (by Feng Chen Hau-Qin Pan and Fu Ying) A ...

Gene cloning or recombinant DNA technology is the joining of two or more segments of DNA to generate a single DNA molecule capable of autonomous replication within a given host (1). Ligase enzym ...

Important : Extract the DNA within one week of receiving samples. Samples that have been processed should be frozen to prevent degradation. Freeze samples between use each day. 1.Add 600 ml of 50 mM ...

Recovering DNA from agarose gels Paul N. Hengen Ph.D. (July 14 1999) Introduction Methods and reagents is a unique monthly column that highlights current discussions in the newsgroup bionet.molbio.met ...

1) Use Pharmacia #27-4564-01. With clean flamed scissors and forceps weigh 0.25 g/50 ml conical and add 50 ml/conical of 0.02 M Tris pH 7.6. Allow to dissolve over several days at 4℃. 2) Vortex. Draw ...

H. Simmler and H. Singpiel Acconovis GmbH Lindenhofstr. 42-44 68163 Mannheim Germany eMail: simmler@acconovis.com R. M¨anner Universit¨at Mannheim B6 23-29 68131 Mannheim Germany maenner@ti.un ...

作分子生物学实验，核酸纯化、酶切、克隆算是最基本的步骤了。因为要做定向克隆，通常要作双酶切。为了省时省事儿，我们常常想方设法把两个酶放在一起切。可是事情并非总那么称心如意——两个酶经常在一起闹别扭，不是反应温度不同啦，就是Buffer不同，有时候两个酶切位点连在一起，必须先切一个再切另一个，否则就切不动——因为有的酶除了识别位点之外还需要旁边留有几个 ...

一、实验目的 ： 1、 掌握质粒DNA 分离，纯化的原理 2、 学习煮沸法快速提取质粒DNA 的方法 3、 学习DNA的限制性酶切的基本技术 4 、 学习利用琼脂糖电泳测定DNA片段的长度 二、实验原理 在基因工程中，DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的DNA 序列，在一定的条件下切断双链DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的，如反应温度，缓 ...

DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。在DNA提取过程中应做到1，根据不同研究需要，保证结构的相应完整性；2，尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等)；3，保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓 ...

在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的DNA分子片段。主要目的是获得某一基因或NDA片段 ...

MassPREP自动酶切仪操作步骤 一 开机前检查： 1 检查仪器台面（DECK）上所有的实验材料（Labware）。 2 检查SystemWater 水桶的水位。 3 检查恒温循环水浴（Chiller）水箱的水位，并定期更换或填充Chiller 中的循环水。 4 倒掉废液桶中的废液。 二 开机步骤： 打开Chiller、Heater、仪器及计算机电源，进入WinPREP程序 ： 1 仪器初 ...