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Hi Dear All Have you ever tried to ligate 3 DNA fragments with sticky ends into Vector(5.2kb). A. Fragment: 3.0kb with HindIII/ Bam HI cut from a Vector. B. Fragment: 0.5kb BamHI / XbaI cut fro ...

Isolation of Mouse genomic DNA Kill mouse by cervical luxation and dissect liver. Add to a 50ml tube and place on liquid nitrogen. Grind to a powder under liquid nitrogen using a mortar and pe ...

Protocol for Sequencing Very Difficult Regions Ziyun Yao and B.A. Roe 02-14-2002 Target DNA (SAP-ExoI cleaned PCR 7-deaza-dG containing product) ...

Hi Does enzyme digestion before bisulfite treatment make a big difference - i am having a few problems with incomplete conversion. If so can anyone reccomend me a good 'general' enzyme to use - I know ...

Prior to getting cells: 1) Turn on 42 deg bath. Takes about 30 min to reach 42 deg. 2) Put 0.1 M sterile CaCl2 on ice. 3) One tube of cells is good for several transformations. For two transform ...

I need to purify 20mer from a mixture containing 200mer and 20mer. How to purify this small fragment? Thanks~~ -HS- -------------------------------------------------------------------------------- Hi ...

Southern Blotting: Detection via Chemiluminescence (BM's Genius System) Modified to include the use of CSPD for chemiluminescent detection! This is the method we are currently using for Southern blo ...

I'm trying to do a southern blot and I have a trouble the bands I get are the same bands that appear in the genomic DNA digestion my probe is specific and it works in northern blot. Thanks -PPlopez- - ...

Hi I am a Biochem student.I am extracting DNA from plants that have been exposed to contaminants then using restriction enzymes to see if there is any change.I was wondering if there was a ...

Principle The nucleic acids contained within the gel slice are electrophoresed out of the gel funneled down into the v-shaped channel and trapped within a high salt cushion resting at the bottom of th ...

Hi. I am a new member of this forum. Currently I am trying to look for some novel methylated gene in NPC cell line. What method should I start with? Pls help. Thank you. -CHOO- ---------------------- ...

Part A: Purifying nuclear pellets. 1) Add 50-60ul fresh packed red blood cells (RBC) to 700ul PBS. Mix by inversion. 2) Add 700-800ul Lysis buffer. Close tube. Vortex briefly (2-5s) 3) Centrifuge for ...

转膜是把DNA 从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物（一般是尼龙膜）上固定，是进行各种后续研究（如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究）的前提。 实验目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤 实验原理： 1．转膜的方式： 向上的毛细管转移 向下的毛细管转移 同时向两张膜转移 电转移 真空转移 ...

本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。） 一、片断平移的克隆（也适用于多片断连接） 简介：将用作载体的质粒A（制作大片断）酶切3μl ，要切出小片断的质粒B酶切7μl；琼脂糖回收胶电 ...

方法一： 效率非常高，一般可到1undefined8，好时可到1undefined9，特别适宜于大片段与文库构建及珍贵材料的连接转化。 实验试剂： A液：1M，MnCl2： B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅1 ...

实验原理： 体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒，选用转化和筛选技术， 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中，DNA可在生物体系中大量扩增，繁殖， 保存以及表达目的基因的产物，这是PCR体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术，所获得的，不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研，医药生产和生物发酵等领域。 质粒转化不同细菌有不同的转化效率，转化效率的高低与实验的成败直接相关， 通 ...

提取DNA需要的仪器和试剂： ⑴ 1.5ml 离心管 ⑵ 移液管: 1000μl 200μl 40μl 各一支和移液管尖头: 100-1000μl 1-200μl 各一盒 ⑶ 微型滤柱（备用） ⑷ 小型旋转混合器一台 ⑸ 小型离心机: 可放入1.5ml 离心管和2ml收集管. ⑹ 恒温水浴 ⑺ 电冰箱: -20℃ 4 ℃ ⑻ 无水乙醇(自备) ⑼ 70 ...

PCR扩增反应完成之后，必须通过严格的鉴定，才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物。凝胶电泳是检测PCR产物常用和最简便的方法，能判断产物的大小，有助于产物的鉴定。凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，前者主要用于DNA片段大于100bp者，后者主要用来检测小片段DNA。 1．琼脂糖凝胶电泳 这是实验室最常用的方法，简便易行，只需少量DNA即可进行实验。其原理是不同大小 ...

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA 送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法，其目的是要达到设置转染效率，影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒DNA 的纯度、靶细胞的生长状态等，下面重点介绍向几种常用的转染技术： 被用于作靶基因转染的细胞，其生长状态如何， ...

在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA为此需要大量提取质粒DNA。 许多年来，一直认为在氯霉素存在下扩增质粒只对生长在基本培养基上的细菌有效，然而在带有pMBl或ColEl复制子的高拷贝数质粒的大肠杆菌菌株中，采用以下步骤可提高产量至每500ml培养物2-5mg质粒DNA，而且重复性也很好。 1、将30ml含有目的质粒的细菌培养物培养到对数晚期（OD600约0.6)。 ...