Solutions Protocol: Digest 5-10 μg genomic DNA overnight with restriction enzyme of choice. Run digested gDNA on 0.8% TAE gel with marker (with no ethidium bromide). Transfer Setup: 1. Remove gel ...
Steven FinkbeinerDepartments of Neurology and PhysiologyUCSF http://gweb1.ucsf.edu/labs/finkbeiner/Protocol/protocol_list/cloning.shtml DIGEST: 1.Digest 10 - 20μg DNA to isolate either the desired ...
DNA sequencing is the determination of the precise sequence of nucleotides in a sample of DNA. The most popular method for doing this is called the dideoxy method. The equipment and supplies:·S ...
Recovery of DNA from LMP (Low Melting Point) Agarose Gel 1. Separate DNA fragments through an LMP agarose gel containing ethidium bromide (0.5 microgram/ml). 2. Detect DNA by irradiating the gel with ...
Alkaline lysis miniprep 1. Grow bacteria overnight in 37℃shaking incubator with lids very loose and taped on. I normally use 5 ml of liquid medium in a 50ml conical bottom tube. Be sure to include the ...
This protocol was written by Jean-Pierre Issabased on Adams et al.* Kam-Wing Jair has made some useful shortcuts that work well if you are careful.Here is .This assay can be used to measure activity i ...
(adapted from Bruce A.RoeDepartment of Chemistry and BiochemistryThe University of OklahomaNormanOklahoma 73019 broe@ou.edu) A.Large scale double-stranded DNA isolation The method used for the isolati ...
What are the differences between phasmidcosmidsphagesand plasmids. -- -------------------------------------------------------------------------------- Hope this brief explanation helps. Phasmid are hy ...
Cepko/Tabin Lab Harvard University This protocol works well from a 5 ml starting culture or a 1 ml starting culture (adjust volume accordingly). http://axon.med.harvard.edu/~cepko/protocol/mike/S2.ht ...
Abstract: The protocol is simple and fairly rapid.It does not require the use of organic solvents but rather utilizes salt extraction to precipitate contaminating proteins.High quality DNA is obtained ...
Donis-Keller Lab Manual Department of Genetics in Washington University School of Medicine http://hg.wustl.edu/hdk_lab_manual/plasmid/plsmid13.html Purpose: To maintain lab stock of highly efficient ...
Mirmira Laboratory at the University of VirginiaThere are multiple variations to this protocol but we find that this one works well in all cases we tested. http://faculty.virginia.edu/mirmira/resource ...
Hi everybo ...
SNGENIMHNIH http://intramural.nimh.nih.gov/lcmr/snge/Protocols/Miniprep.html SOLUTIONS: •Resuspension buffer: 25mM Tris-HCl (ph8) 50mM Na2 EDTA 1% glucose Autoclave and store at 4℃. •NaOH/ ...
DNA 分子是分子生物学研究的基本材料，依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的 DNA 。 实验目的：了解植物 DNA 抽提的主要方法，掌握 CTAB 法快速抽提水稻 DNA 。 实验材料及试剂： 水稻叶片，1.5 × CTAB ，氯仿 / 异戊醇 (24:1) ，95% 乙醇或无水乙醇等 实验原理：植物 DNA 的抽提常采用两种方法： （1）SDS 法： 离子去污剂 ...
载体与外源DNA分子体外重组时，如何选择优化连接条件以达到最高的重组率。因此有必要根据影响连接效率的因素综合考虑连接条件。影响连接效率的因素很多，如反应温度、插入片段和载体之间的摩尔比、DNA末端性质、反应时间、ATP浓度等。 1. 反应温度是比较重要的影响因素。因为连接酶的最适反应温度为37℃，但在此温度下仅含4-6bp的退火粘末端之间的氢键结合不稳定（Tm≤15℃），不足以抵抗拒热运动的 ...
实验目的 为了获得大量的质粒作为克隆载体，我们需要将购买来的质粒通过转化的方法导入细菌的细胞内。 制备出感受态的细胞，我们就可以方便的将需克隆的质粒导入其中，使其繁殖，就能获得大量质粒。 本次实验的目的就是增加质粒的数量。 同时，我们能掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的基本原理和实验技术方法。 实验原理及过程 ...
一、目的 1.了解感受态细胞生理特性及制备条件，掌握大肠杆菌感受态细胞制备方法。 2.掌握质粒DNA 转化大肠杆菌的方法，了解转化的条件和利用半乳糖苷酶基因插入失活选择重组质粒DNA 的原理。 二、原理 （一）大肠杆菌感受态细胞制备的原理 所谓感受态，是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物，只有某一生长阶段中的细菌才能作为转化的受体，能接受外源DNA而不将其降解的生理状态。感受态形成后，细胞生理状态 ...
体外连接的DNA重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。为了提高受体菌摄取外源DNA的能力，提高转化效率以获得更多的转化子，人们摸索出了不同的方法处理细菌，使其处于感受态。目前主要采用电转化法和CaCl2法将外源DNA导入受体细胞中，并需要相应地制备电转化感受态细胞和CaCl2感受态细胞。 实验目的：学习感受态细胞的制备过程 实验材料：大肠杆菌菌株DH5a或DH10B 实验原理：电转化法是利用瞬间 ...
【目的和要求】 1.学会CTAB法提取细菌总DNA。 2.掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳法。 【实验原理】 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后，必须将其中蛋白质去除。CTAB（溴代十六烷基三甲胺）是一种去污剂，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中可溶并且稳定存在，若降低盐浓度，CTAB与核酸的复合物会沉淀出来，而大部分蛋白和多糖仍溶于溶液中。 DNA的电泳 ...
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