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Sugden labMcArdle Laboratory for Cancer ResearchUniversity of Wisconsin-Madison Medical School DNA /EMSA.pdf">http://mcardle.oncology.wisc.edu/sugden/Protocols/PDF files/Association of protein ...

The standard solution typically used for both pre-hybridisation and hybridisation is based on that given in Maniatis et al.(1982)with both Denhart's solution and heterologous DNA being replaced by hep ...

Section of Cancer GenomicsGenetics BranchNCI National Institutes of Health Reagents Chloroform Mallinckrodtcat.4440 EDTA0.5 M Ethanol100% Ethanol70% Isoamyl Alcohol Sigmacat.I-3643 Phenol Gibco BRLCat ...

Note All centrifugation speeds are given in units of g.Please refer to Table 1 for information on vonverting g -force to rpm.If centrifuges/rotors for the required g -forces are not availableuse the m ...

按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern analysis的结果进行标准化，因为DNA 变异程度比总RNA 或组织重量要小。 实验所需但试剂未提 ...

一．农杆菌感受态细胞的制备 （同大肠杆菌质粒DNA的提取），然后将其转化大肠杆菌，再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。 取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM（0.5g/L KH2 PO4 10 g/L Mannitol2 g/L L-Glutamine0.2 g/L NaCL0.2 g/L MgSO4 0.3 g/L ...

目的： 1.从人或动物血液中抽提DNA 。 2.从体液，唾液，尿液中抽提DNA 。 3.从人体组织，切片和各种临床样品中抽提DNA 。 4.抽提出的DNA 可以用于PCR及相关诊断。 原理： 临床常常需要从各种生物组织或细胞中抽提基因组DNA ，用于病症的辅助性分析和诊断。样品根据试剂盒（SK1341试剂盒，上海生工）提供的方法进行处理，然后在特定的DCL Buffer中用Protenase K ...

摘要： DNA 甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用，是目前新的研究热点之一。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。这些方法概括起来可分为三类：整体水平的甲基化检测、基因特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。本篇将主要介绍目前存在的大部分DNA 甲基化研究 ...

对于大的基因组，DNA 酶切图谱凭肉眼是分辨不开的（EB 染色），因为大小不等的分子呈现弥散分布，只有借助灵敏的放射性同位素（或其他化学发光物质），将靶 DNA 在凝胶上（膜上）的带型通过特定的探针与之杂交，转换成 X 光片上直观的带型，才能进行相关分析。另外如果需要鉴定或寻找与已知 DNA 同源的 DNA 片段如：染色体步查、基因组文库的评价和利用、阳性克隆的分析鉴定、转基因拷贝数分析等也都需进 ...

一、核酸的纯化 在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后，再用有机溶剂抽提。这些广谱的蛋白酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K等，它们对多种天然蛋白均有活性，（1）用酚 ...

一、目的 鉴定载体与目的基因是否已经成功连接成新的重组质粒。 二、原理 载体pUC18具有一个EcoRI 和HindIII的单酶切位点，含氨苄青霉素抗性基因。目的基因设计时分别在上、下游引物中加入了EcoRI 和HindIII单酶切位点，两者双酶切后，经连接酶连接，连接成功就形成了新的重组质粒。 在含50μg/ml Amp、40ml X-gal 储液和4μlIPTG 储液LB 固体平皿 ...

现代分子生物学研究发现，中药材(不含矿物药)所依赖的生物资源――“物种”的多样性是由于其基因多态性的结果，而基因多态性可在分子水平上检测，它比在形态、组织和化学水平上检测更能代表其变异类型的遗传标记。传统的分子标记主要有血清学特征、蛋白质谱 、同工酶谱，近10年来则有迅速发展起来的DNA 分子标记，现介绍如下。 1 　传统的分子标记 1.1　抗血清　中药有许多具有抗原决定 ...

Pyrosequencing是对短到中等长度的DNA序列样品进行高通量的、精确和重复性好的分析的技术。 第一步——测序引物和PCR扩增的、单链的DNA模板杂交，与酶—DNA聚合酶（DNA polymerase）、ATP硫酸化酶（ATP sulfurylase）、荧光素酶（luciferase）、三磷酸腺苷双磷酸酶（apyrase）—和底物&mdash ...

1.对于微量DNA样品溶液（如100ml以下），应预先将DNA溶液以TE或无菌水稀释至一定体积。以减少第5步中的DNA损失。 2.加入等体积的酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）。 3.剧烈振荡管中内容物，将水相和有机相充分混匀，使之成为乳浊液。 4.室温下静置以初步分层。再用离心机于室温以10000rpm离心至少5分钟以上，使无机相与有机相充分分开。 5.用剪去尖头的微量移液器枪头小心移出 ...

本法的产量要低得多，但却比本章所述的其他方法更温和，是提取大质粒(大于15kb)的首选方法。 试验步骤: 1、将500ml细菌沉淀物洗过后重悬于10ml用冰预冷的10%蔗糖、50mmol/L Tris.Cl(pH8.0)溶液中，将悬液移至30ml的带盖螺口塑料试管中。 2、加入2ml新配制的溶菌酶溶液。当溶液的pH值小于8.0时，溶菌酶不能有效地发挥作用。 3、加8ml 0.25mol/L EDT ...

Materials: • 0.8 % agarose gel in 1x TAE • Digested DNA • Glass Milk • NaI solution • New Wash Procedure: 1)Run digested DNA out on agarose gel slowly (70 V on BioRad gel) 2)U ...

1.Grow 5 ( large scale-15ml culture). Harvest in single eppendorf tube (or 15 ml disposable tube). 2.Resuspend pellet with 300μl STET buffer (900μl). After resuspending add 30μl RNase/lysozy ...

Hancock Laboratory Methods. Department of Microbiology and Immunology University of British Columbia British Columbia Canada http://www.cmdr.ubc.ca/bobh/showmethod.php?methodid=12 REFERENCE: GATA 19 ...

Amberg Lab Upstate Medical University http://www.upstate.edu/biochem/amberg/protocols/seq_temp.html Notes on DNA : The cleaner the better.If mini DNA use phenol extracted and use the entire mini pre ...

Section of Cancer GenomicsGenetics BranchNCI National Institutes of Health Reagents Chloroform EDTA0.5 M Ethanolabsolute Isoamyl alcohol SigmaCat.I-3643 Phenol Phosphate Buffered Saline (PBS)1X Protei ...