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目的 ： 采用碱变性法，学习小规模制备质粒DNA的技术 原理 ： 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保 ...

第一节 概 述 DNA的提取通常用于构建文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用DNA较长的特性，可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中，可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到提取的目的。在提取过程中，染色体会发生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离DNA时应尽量 ...

克隆成功与否除与连接方式以及载体选择有关外载体的处理也是一个重要环节。为了提高连接效率处理载体时应注意以下几点: (1)应加入常用量5~10倍的内切酶水解载体以保证载体被完全酶切; (2)如用双酶切割载体则必须电泳回收载体片段除去双酶切所产生的小DNA片段;�(3)如粘端连接单酶切处理过的载体必须用 碱性磷酸酶 (如牛小肠碱性磷酸酶CIP)处理防止载体自身环化。 CIP 可以水解掉DNA5末端的 ...

标记育种是利用与目标性状基因紧密连锁的遗传标记，对目标性状进行跟踪选择的一项育种技术。与育种有关的遗传标记主要有四种类型: 形态标记（morphological marker）、细胞标记（cytological markers）、生化标记（Biochemical marker）和分子标记（molecular marker）。早在1923年，Sax等就提出利用微效基因与主基因的紧密连锁，对微效基因进 ...

带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 瞬时转染 相对简便、重复比磷酸钙好但对细胞有一定的毒副作用转染时需除血清且一般只用于BSC-1CV-1COS细胞系 Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit)磷酸钙法 磷酸钙DNA 复合物吸附细胞膜被细胞内吞 稳定转染染瞬转染 不适用于原代细胞（所需的DNA 浓度较高）操作简 ...

1 目的 ：DNA 抽提标准化操作规范适用于HLA试验中的DNA 抽提操作。 2 适用范围 ：DNA 抽提实验室 3 依据 ： DNA 抽提标准化操作规范 4 引用文件 ：德国BAG公司（以下简称BAG）《Instructions for use EXTRA-GENE I》 5 程序 5.1试剂准备 5.1.1 BAG® EXTRA-GENE I 该试剂盒包括3部分：Solution 1 ...

试验原理： 碱裂解法是较常用的提取的方法。其优点是收获率高，适于多数的菌株，所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。十二烷基磺进行质粒的小量制备。十二烷基磺酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性。用SDS处理细菌后，会导致细菌细胞破裂，释放出质粒DNA和染色体DNA，两种DNA在强碱环境都会变性。由于质粒和主染色体的拓扑结构不同，变性时前者虽然两条链分 ...

酶切扩增多态性序列（C1eaved Amplified Polymorphic Sequences，CAPS）是一类以PCR为基础的共显性的分子标记，它的基本原理是先用已知位点的DNA 序列去设计一套特异性的PCR引物（19~27 bp）。然后应用这些去扩增该位点上的某一DNA 片段；接着用一种专一性的限制性内切酶切割所得的扩增带并进行RFLP分析。 1993年Konieczny和Ausubel首 ...

实验目的 学习和掌握限制性内切酶的特性 掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法 并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具。 相关基础知识 限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于体外剪切基因片段的重要工具酶。 上世纪七十年代，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包 ...

1 导论 聚合酶链式反应（PCR）以其优越性极大地影响到了分子生物学的几乎所有领域，并以其基本程序和DGGE（denaturing gradient gel electrophoresis），开发出多种检测核苷酸变异的方法。RAPD（Random Amplifed Polymorphic DNA）就是其中的一种，它是1990年美国杜邦公司科学家J.G.K.Williams和加利福尼亚生物研究所J ...

原理 基因组步行技术是一种新发展的利用已知序列(cDNA或基因组DNA)从基因组中获得基因的上游(如启动子)或下游序列的方法。其原理如下：首先利用不同的具有平末端的 DNA 限制性内切酶消化基因组 DNA，然后将预先设计好的 DNA 接头连接在 DNA 的两端这样的一组两端带有接头的 DNA 片段就称为所谓的无载体的 DNA 文库；根据接头和目的基因的序列设计两组引物，以上述的DNA为模板，先以外 ...

对于神经科学中分子生物学部分，特别是相关疾病方面的研究手段并不是很多。特别是对于多个因素的作用，现在的研究手段还比较稚嫩，对于DNA 的初步大规模分型无疑是一种好的方法。AFFY用基因来检测SNP达到了高通量的目的，非常适合于第一步的筛查。 复杂DNA 的大规模基因分型 Nature Biotechnology Volume 21 Number 10 October 2003 以复杂的人类表型的 ...

实验步骤： 1、待回收的DNA段经电泳分离后，从琼脂糖凝胶上切下所需DNA段，放在1.5ml EP管中； 2、加入3 倍（请准确估量凝胶的体积）体积的溶胶液（以100μl 体积胶加入300μl 溶胶液为一次标准反应），室温下放置5分钟或50℃ 保温3分钟，其间轻摇EP管几次使胶完全融化； 3、加入10μl玻璃奶（玻璃奶使用前请充分摇匀），颠倒混匀，冰浴下放置10分钟。每隔2~3分 ...

BAC提取前准备（前两天 ） 配制含25 mg/l Kan的LB培养基选择平板，在超净工作台上用接种环从购买的BAC划线接种至选择平板，于37℃培养箱培养过夜，供选择单。 BAC提取前准备（前一天） 1、在超净工作台上，用50 µg/ml Kan和液体LB培养基配制成25 mg/l Kan培养基，每个Falcon试管分装10 ml。也可先分装10 ml无抗生素的液体LB培养基后，然后每 ...

聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种技术。利用PCR技术可在数小时之内大量扩增目的基因或DNA 片段，从而免除基因重组和分子等一系列繁琐操作。由于这种方法操作简单、实用性强、灵敏度高并可自动化，因而在分子生物学、基因工程研究以及对遗传病、传染病和恶性肿瘤等基因诊断和研究中得到广泛应用。 PCR进行的基本条件是： （1）以 ...

DNA methylation is an epigenetic event that affects cell function by altering gene expression and refers to the covalent addition of a methyl groupcatalyzed by DNA methyltransferase (DNMT)to the 5-car ...

1.Safety precautions Hoechst 33258 is carcinogen and toxic.Use with adequate ventilation.Avoid contact with eyesskinclothing.Wash after handling.Keep container closed. 2.Rationale For biochemical qu ...

MATERIALS: ...

Denatured Salmon Sperm DNA is used in prehybridization and hybridization solutions to reduce background signal.The Salmon Sperm DNA (Sigma No.D-1626)is first "denatured" in large volumes and ...

does anyone have a reasonably successful protocol for isolating dna from bones---bones that are highly compromised in integrity---i.e.really bad shape? I've tried and am well seasoned in the tra ...