全部

第一，盖玻片需要过酸，并且自来水、蒸馏水冲洗干净。两张或者以上的玻片很容易因为虹吸作用粘到一起，很容易冲不干净，很容易把两张完全重叠在一起的玻片当成一张，一定要看清楚，晾干片子最好是在消毒饭盒中进行，饭盒底面放上纱布，将玻片斜靠在饭盒侧壁，玻片正面不要接触纱布，否则会粘上毛毛的。然后高压蒸汽灭菌，烤箱中烤干。 第二，爬片前最好用多聚赖氨酸或者层粘蛋白或者胶原溶液处理玻片，未处理过的细胞不容易贴壁， ...

1.细胞爬片； 2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)； 3.PBS漂洗5min； 4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)； 5.PBS漂洗2次，每次5min； 6.1%BSA封闭30min； 7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h； 8.PBS漂洗2次，每次5min； 9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h； 10 ...

第一节基本概念 生命与非生命物质最显著的区别在于生命是一个完整的自然的信息处理系统。一方面生物信息系统的存在使有机体得以适应其内外部环境的变化，维持个体的生存；另一方面核酸和蛋白质信息在不同世代间传递维持了种族的延续。生命现象是信息在同一或不同时空传递的现象，生命的进化实质上就是信息系统的进化。 一、几个容易混淆的概念 细胞信号发放（cell signaling）：细胞释放信号分子，将信息传递给其 ...

1.做细胞爬片(爬片的步骤就不详述了)，注意: 洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛一定要新鲜配制的(一周以内的都能用)， 因为PBS和4%多聚甲醛放久了后，都会有自发荧光。 2.抗体的孵育: 预实验的时候荧光根据文献和经验设定一、二抗的浓度，一抗4度孵育过夜（时间8－12h）；二抗（荧光抗体）孵育时要避光，孵育好后用PBS充分冲洗；可以将做好的片子直接在板子中孵育，如果从节约的角度来看，可以用1 ...

电镜的主要结构：电子光学系统、真空系统、供电系统。 1.电子光学系统1）照明部分 （1）阴极：又称灯丝，一般是由0.03~0.1毫米的钨丝作成V或Y形状。 （2）阳极：加速从阴极发射出的电子。为了安全，一般都是阳极接地，阴极带有负高压。 （3）控制极：会聚电子束；控制电子束电流大小，调节象的亮度。 阴极、阳极和控制极决定着电子发射的数目及其动能，因此，人们习惯上把它们通称为“电子枪&r ...

一、补体测定 1、血清总补体活性测定 当兔抗羊红细胞血清与羊红细胞结合后，遇到补体即可使羊红细胞发生溶血，依据这一特点可建立测定血清中总补体活性的方法。 当血清的效价和绵羊红细胞浓度保持一定的情况下，在规定的反应温度和时间内，溶血程度与补体量呈正相关。因此，通过测定溶血程度，即可测知补体的含量。目前常用的方法是用 50%补体溶血试验（CH30）测定总补体活性，即求出使50％致敏羊红细胞发生溶血时的 ...

药物研发、个性化用药研究是基因芯片技术在药物开发中应用最为广泛的一个领域。在药物靶点发现、药物作用机制、药物毒理评估研究中所使用的生物芯片主要是检测RNA水平的表达谱芯片；在个性化用药研究中，主要从人群的SNP入手，用SNP芯片或者再测序芯片评估个体的遗传背景是否适合使用某种药物，以及适合的剂量。 在当代药物开发过程中发现和选择合适的药物靶点是药物开发的第一步，也是药物筛选及药物定向合成的关键因素 ...

全内反射荧光显微术(Total internal reflection fluorescence microscopy TIRFM)是利用全内反射产生的消逝波激发样品,使样品表面数百纳米厚的薄层内的荧光团受到激发，再用高灵敏度和高时间分辨率的摄像机CCD来捕捉荧光并用计算机进行显像，从而实现对生物样品观测的一种新生技术。由于消逝波特点及CCD的优势使全内反射荧光显微镜具有高信噪比和高时间分辨率，因此它在对单分子的动态观测具有很高的应用价值。本文将对全内反射荧光显微镜的原理及应用和发展展望作一个简要的介绍。

1、材料与试剂 （1）pH7.2巴比妥缓冲液 氯化钠 85.00g 巴比妥 5.75g 巴比妥钠 3.75g ...

定义：结构、功能和发生上相关的内膜形成的细胞结构称为细胞内膜系统，如核被膜、内质网、高尔基体等。 功能：区隔化；增加内表面积，提高代谢和调节能力。 从系统发生来看内膜系统起源于质膜的内陷和内共生。 从个体发生来看新细胞的内膜系统来源于原有内膜系统的分裂，具有核外遗传（epigenetic）的特性。 第一节蛋白质分选的基本原理 细胞内合成的蛋白质、脂类等物质之所以能够定向的转运到特定的细胞器取决于两 ...

试管苗的生理和解剖特征决定了必须对它们逐渐降低相对湿度和增强光照来进行炼苗，以使试管苗移出后适应大田的自养生长和有菌环境。 移栽前宜对移栽基质进行消毒处理。消毒方法一般有两种。一是用干热消毒法，将移栽基质在烘箱中烘烤处理或在高压灭菌锅中以15磅压力维持20~30 min。二是采用福尔马林熏蒸消毒法，即用5%的福尔马林或0.3%硫酸铜稀液泼浇于基质，然后用塑料布覆盖1周后揭开，翻动基质使气味挥发。常 ...

可溶性抗原，如蛋白质、多糖、类脂质和病毒等，与相应抗体结合后，抗原抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入红细胞和溶血素，即可根据是否出现溶血反应来判定反应系统中是否存在相应的抗原或抗体。这个反应就是补体结合反应。 补体结合反应是一种古老的血清学技术，Bordet和Gengou在1901年设计这一试验，由于有敏感性高和适应性广的优点，尽管操作繁杂，目前仍被有效地应用。 1、补体及其 ...

养细胞就像养孩子，甚至比养孩子还难。忘记是谁这么说了。上次一次性死了14瓶细胞，前后分析都是培养基污染了。然后换了新培养基，换了新的种子，开始长得不错，但今天看了一下，又污染了，培养基变浑浊。我养的是HUVEC，8月4日从一个老师处取种子（8月3日复苏），他原先是用高糖DMEM培养的，而我用的是1640。在倒置显微镜下，细胞形态不是太好，而且有小黑点。我用1640换掉原先的DMEM培养基，5，6日 ...

目前制备生物芯片采用的方法主要有2类：光引导原位合成法和预先合成后点样法。最常使用的是接触式预合成后点样法（简称接触点样法）。这种方法的优点是可以充分利用原有的方法和仪器来制备探针溶液，探针的长度可以任意选择，且制备方法简单，成本低，合成芯片品种较多，因此受到世界上大多数研究机构的欢迎。本文将对接触式点样法制备生物芯片的点样机理进行分析与讨论，并给出了样点估算的经验公式。 《生物芯片点样机器人样品 ...

一、目的要求 了解植物细胞悬浮培养的基本原理，通过实验掌握植物细胞悬浮培养的方法和技术。并通过实验练习和巩固无菌操作技术。 二、基本原理 利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点，比如在培养过程中，植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布，而且琼脂本身也有一些不明的物质成分可能对培养物 ...

1991年，美国Stephenfodor等提出了DNA芯片的概念，随着人类基因组计划（HumanGenomeProject，HGP）的实施，生物芯片术已成为基因组计划中的一种重要技术手段。生物芯片（biologicalchip或biochip），把生化分析系统中的样品制备、生化反应和结果检测三个部分有机地结合起来连续完成。与传统的检测方法相比，具有高通量、高信息量、快速、微型化、自动化、成本低、污 ...

High-throughput SNP genotyping by single-tube PCR with Tm-shift primers. Wang J Chuang K Ahluwalia M Patel S Umblas N Mirel D Higuchi R Germer S. Human Genetics Department Roche Molecular Systems Alam ...

将豚鼠血清用水合肼或氨水处理去除其中的C4，这种C4缺乏血清（简称R4）不能使致敏的SRBC溶解，当加入含有C4的受检血清后，级联酶促反应发生即可导致致敏的SRBC溶解。溶血的程度与待测血清中C4的活性相关。 1、无补体C4-抗原抗体复合物（EAR4）的制备 在新鲜豚鼠血清中按每ml加0.15mol/L氨水0.25ml或0.75mol/L水合肼0.25ml，混合后置37℃水浴30～90 ...

1. SG浓度：　　终浓度1:5000－1:100000，一般为1:10000—1:70000 2. Primer浓度：　　终浓度50nM－300nM　　固定摸板浓度的梯度实验　　不加摸板的对照实验（NTC）——有无非特异信号　　熔解曲线的分析——是否单峰　　建议使用HPLC纯化的引物 3. MgCl2浓度　　降低MgCl2浓度以减少非特 ...

据估计细胞膜上与物质转运有关的蛋白占核基因编码蛋白的15~30%，细胞用在物质转运方面的能量达细胞总消耗能量的2/3。 细胞膜上存在两类主要的转运蛋白，即：载体蛋白（carrier protein）和通道蛋白（channel protein）。 载体蛋白又称做载体（carrier）、通透酶（permease）和转运器（transporter），有的需要能量驱动，如：各类APT驱动的离子泵；有的则不 ...