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确定抗原表位，包括表位的序列和构象，是免疫学家感兴趣的一个问题。表位的确定不仅可以了解有关免疫反应的众多信息，为进一步人工控制免疫反应奠定基础，而且对药物合成、疫苗设计等也具有指导意义。确定表位常用的方法有：还原法、蛋白印迹法、肽扫描、突变分析等，后两种方法还同时解决了蛋白分子一级序列问题。但这些方法大多困难而繁琐。 近几年来，噬菌体展示技术成为探测蛋白空间结构、探索受体与配体之间相互作用结合位点 ...

一、实时荧光Taqman 探针设计 总原则：探针选择要保守，引物选择要保守，因此必须找一段100-200bp相对要保守的片段来设计引物与探针。即real-time PCR的扩增片段是50bp----150bp。当找不到150bp的保守片段时，必须确保探针的片段是保守的。在设计探针和引物时，要同时考虑在两条链上设计引物与探针。但要注意的是：在那条链上设计探针时，就应靠近在同一条链上设计的引物(即上游 ...

1. 分离制备单细胞悬液： （1） 体外培养的细胞株：用胰酶消化，最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液，细胞要计数，具体的量我前边已经说过。 （2） 体内脏器细胞：处死动物，取出脏器，于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。 2. 胶板制备： （1） 取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。盖玻片推匀，不能有气泡，4度凝固5至8分钟。 （2） 水平取 ...

消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞 用DMEM配0.2%的1型胶原酶（用20的血清的DMEM配可能更好，有类似文献），分装于青霉素小并，每并2-3ml。1只免的胸主动脉置于1瓶消化液中消化，消化约10几个小时（消化程度的把握要体会），离心后，接种（若见细胞量大，成功把握大），绝对静置3天（没必要看，看多了无益），8天可传代。 犬胸主动脉平滑肌贴块法——方法成熟，比消化法好控 ...

细胞培养经验之谈

器材与试剂 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。 具体步骤 一. 水的制备 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水 二.PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制) 1.溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4•H2O 1.56g ...

剪碎法CEF制备需要器材、设备及步骤方法

一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR 密码子具有兼并性，如表22-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。兼并度越低，产物特异性越强，设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸，并避免引物3’末端兼并，针对兼并的混合引物已成功地用于未知靶DNA ...

有实验者提问：筛选的噬菌体扩增后滴度没有增加 一丁香园网友建议： 你筛选的噬菌体必须保证有完整的系列； 你的扩增条件必须控制好如酶的用量;温度;PH及时间等； 如果能排除以上条件再思考一下检测滴度有没有问题. 另一丁香园网友观点： 关键是酶的质量; 用过好几种酶，国产的如天为时代、生工的不太行，建议用MBI的试一下。 ...

本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。

细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗 ...

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 (二)P ...

摘要：预防和避免污染是细胞培养成功的关键，黑胶虫（也称黑焦虫）是近几年来几乎出现在每个细胞培养实验室。但是现在无法对黑胶虫的确认和鉴别，导致学术界说法不一，笔者收集了关于黑胶虫的资料，对黑胶虫进行类系统描述，对黑胶虫出现的情况对细胞培养的影响以及黑胶虫污染后的有效处理进行介绍。 (Grade 2005 Biotechnology School of Life Science and Enginee ...

我所在的实验室有用于培养细胞的超净台，内置酒精灯一个。老师传授授说在打开培养瓶或培养液之前要用酒精灯的火焰快速的烧一下，目的是消毒，减少污染。自己很怀疑这样做的有效程度，因为瞬间的火焰不可能将瓶口的温度升高很多，又如何达到消毒的目的呢？在网上搜索后找到一些资料，认为不应在超净台内使用火焰。现将其放到丁香园上供大家参考，希望有经验的同学给个说法，超净台内到底应不应该有酒精灯。 Open flames ...

一 引物的设计 引物的设计对于这个实验至关重要，因为real time pcr的检测灵敏度比较高，所以相应的对引物设计的要求就很高。普通的要求规则大家都知道，还有几点必须注意： 1，引物的错配率（引物错配形成引物二聚体，但是SYBR照样能嵌入进去，结果导致实验结果的误差很大，重复性也不好）。 2，引物的特异性一定要高（不像常规PCR，引物同源性不高，只要两条产物的片段长度相差足够大，在电泳的时候能 ...

由多个实验室参与、Roche赞助的、研究LigntCycler和ABI PRISM real-time PCR仪性能对比的论文，发表在2004年Clinical Chemistry上（2004;50:1088-1092），SCI IF 5.454 点击下载 ...

正在定购MG63 ，即人成骨头瘤细胞，但是以前没买过，都是从别人那直接扩培的，所以对于刚拿到细胞株要做的不清楚，恳请有经验的战友提供帮助。 打算买三瓶，新购进时应该会配培养基，那我是否需要提前配培养基（按厂家提供的培养基配方，是一拿到手直接冻到液氮里吗？还是先培养几天再冻？查文献发现很多种培养基都可以用，可否用实验室已有培养基培养，大约需要多久后才能用实验室的培养基培养。 对于新买的细胞，必然是有 ...

ECM(extracellular matrix)是细胞外大分子构成的网络。 包括：胶原、非胶原糖蛋白、氨基聚糖与蛋白聚糖、弹性蛋白等。 ECM在结缔组织中含量较高。 ECM的成分及组装形式由所产生的细胞决定，并与组织的功能相适应。如：角膜、肌腱。 ECM影响细胞的存活、死亡、增殖和分化。 第一节ECM的成分 一、胶原Collagen 组成： 由原胶原交联而成，原胶原是三条肽链形成的三股螺旋，含有 ...

C3是由α和β两条肽链通过二硫键连结组成，为β1球蛋白，沉降系数9.5s，分子量180kD，含糖量约占2.2%，是血清中含量最多的补体成分，约占总补体含量的1/3以上，在补体系统激活过程中，无论是经传统途径还是旁路途径，均需C3活化后，才能推进后续补体成分（C5～C9）的连锁反应，因此，它在两条激活途径中起关键作用。C3主要在肝实质细胞被合成分泌少量由巨噬细胞和单核细胞合成。生理情况下，体液中或组 ...

成分：微丝（microfilament）、微管（microtubule）和中间纤维（intemediate filament）构成。均由单体蛋白以较弱的非共价键结合在一起，构成纤维型多聚体。 微丝确定细胞表面特征，使细胞能够运动和收缩。 微管确定膜性细胞器的位置和作为膜泡运输的导轨。 中间纤维使细胞具有张力和抗剪切力。 其它骨架成分：核骨架、核纤层、细胞外基质。 第一节微丝microfilamen ...