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PCR技术在癌症的运用

癌症为基因突变造成的疾病,是由于细胞生长、分化及分裂繁殖等有关的基因产生病变所造成的。这些基因包括促进细胞分裂及繁殖的致癌基因,抑制细胞分类及繁殖或促进细胞分化的抑癌基因。当致癌基因过度活化或抑癌基因不活化而使细胞分类繁殖不受控制时,细胞就渐渐进入癌化的过程。因此癌细胞常包括有多个基因的突变,而不同的癌症又有不同的基因病变。如慢性骨髓性白血病会产生BCR-ABL的病变基因;又如以消化系肿瘤而言,大 ...

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植物组织培养和植物快速繁殖

组织培养是一种利用人工培养基(液)使细胞在体外发育和繁殖的技术。除了能够为许多实验提供大量的动植物细胞材料之外,它也是一项克隆植物细胞和个体的实用技术。实际上,在日常生活中必不可少的蔬菜、花卉及粮食作物中,许多种类都是克隆植物,例如,脱病毒马铃薯和红薯、百合和兰花、水稻等等。 病毒是威胁园艺和蔬菜种植的主要问题之一。目前仍然没有特效防治药物。事实上,利用分生组织细胞克隆的方法,可以有效地防治病毒。 ...

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定量PCR的新技术

real-timeimmuno-PCR1992年,Sano等人将免疫测定技术与PCR结合,创建了一种全新的极其敏感的抗原分子检测技术,即免疫-PCR(Immuno-PCR),随着这种技术的不断发展,2000年,Sim等使用荧光定量PCR代替普通PCR,发展了免疫定量PCR技术(real-timeimmuno-PCR)。该技术把抗原抗体反应的高特异性和聚合酶链反应的高敏感性有机结合起来, ...

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复苏L929记录

头一次自己培养L929细胞,手忙脚乱的,把冷冻的细胞直接放进培养基里就结束了。过了60个小时,去显微镜下看,只能看到几个帖壁细胞。仔细想想做实验的步骤,又上网查查帖子,觉得可能是没有在第二天换新培养基的问题,导致冷冻液里的DMSO影响细胞贴壁。不知道培养皿里的细胞还有没有活下去的可能。总之第一次做实验结果不好也不应该轻易放弃。 把培养皿里的上清液转移到离心管里,离心,加入新的培养基重新放到培养箱里 ...

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植物组织培养的概念

(广义)又叫离体培养,指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞,原生质体等,通过无菌操作,在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。 (狭义)组培指用植物各部分组织,如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株,也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养,愈伤组织再经过再分化形成再生植物。植物组织培养基础理论 1、植物细胞全能性 植物细胞全能性 ...

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实验性急性血栓性肺栓塞动物模型的建立

目的 建立操作简便、成功率高、趋近真实、耗资低廉的急性血栓性肺栓塞(acute pulmonary embolism APE)动物模型。方法 首先,将兔麻醉,暴露并切开左侧颈静脉后,插入一5F导管。然后,经此导管注入2-3个自体栓子,栓子则会顺血液循环栓塞肺动脉,从而造成急性血栓性肺栓塞。待兔存活足够时间后进行尸解,并取出诸如:栓塞的和非栓塞的肺动脉、心脏、主动脉、肝脏和脂肪等器官和组织。结果 ...

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免疫荧光技术基本原理

免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物 ...

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性功能障碍模型分类

性功能障碍模型分类: (1)去势大鼠模型 (2)大鼠交配试验 (3)小鼠交配试验 (4)重复应激性小鼠性行为低下动物模型 (5)氢化可的松肾阳虚证模型 (6)腺嘌呤肾阳虚证模型 (7)“劳倦过度,房室不节”致肾虚模型 (8)对幼年雄鼠性器官发育的影响 (9)果蝇性活力实验 观察指标:阴茎勃起、交配功能、器官重量、形态学观察与激素、生物活性因子及相关酶有关的实验指标等 附文献 ...

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猴类的饲养方法

以宠物申请进口的猴类,大致可分为懒猴、松鼠猴、须猴3类。而黑猩猩等被称为类人猿的猴类,是华盛顿公约中的保护动物,一般人不可以当做宠物来饲养(在签定条约之前所进口饲养的除外)。 除类人猿之外,所有的猿猴的进口都受到管制,选购时务必向有输入许可证,或是国内繁殖证明书的商店购买。 根据媒体报道,经常有走私进口的情况发生,这些走私进来的动物,由于捕捉及运送的条件不良,经常有骨折的现象,最好是购买合法进口的 ...

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多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)的配制、保存、使用总结

因为自己做PC12细胞培养,想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被,到园子里搜索了下,关于多聚赖氨酸的帖子不少,看了一些帖子,将大部分收集在此。个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题,这些帖子里面都解释了。 注:我只是摘了一个帖子里某段或某句话。一般一段话来自某一位战友。 一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水,或者PBS,浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。 二、其他常用包被方法比较( ...

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亚急性衰老动物模型

基本原理:在一定时间内连续给动物注射D-半乳糖,使机体细胞内半乳糖浓度增高,在醛糖还原酶催化下,还原为半乳糖醇,这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内,影响正常渗透压,导致细胞肿胀,功能障碍、代谢紊乱,破坏并消耗机体抗氧化防御系统,使自由基积聚。同时在半乳糖还原成半乳糖醇的过程中又产生(O2-),这样使细胞膜脂质受损,过氧化脂质、脂褐质等增高,出现衰老。操作步骤:取健康雌性小鼠,普通饲料常规喂 ...

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慢性上颌窦炎动物模型

模型建立方法: 1 选取成年雄性新西兰大白兔2-2.5公斤 2 麻醉 戊巴比妥钠(30mg/kg) 从兔耳缘静脉注入实行全身麻醉,麻醉充分后固定在兔架上 3 进行局部备皮,采用脱毛剂(实验室自配) 4 消毒 铺巾 5 沿眶下15mm鼻背正中旁6mm矢状切开皮肤逐层切开分离至上颌骨直径4mm电钻在上颌骨上钻一小孔用无菌棉签取窦内分泌物作培养手术显微镜下找到窦口后用甲基丙烯酸树脂堵塞之并逐层缝合至皮肤 ...

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纯化心肌细胞差速贴壁的时间

大部分文献报导差速时间是2小时,但我个人做实验是遇到的情况说明2小时有些长了,已经有心肌细胞贴壁,而且把上层悬液吸出后转移,不知道为什么不好帖壁,成活率较低。我用的是0.125%胰酶分次消化。请各位有经验的战友讨论。 我觉得影响心肌细胞贴壁的因素可以总结为如下几点: 1、所用老鼠的品系以及年龄:SD大鼠和Wister大鼠还是有很大差别的,包括小鼠在内也是,大部分用SD大鼠差速贴壁时间为2小时,个 ...

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血清补体总活性测定

1.原理 补体能使抗体致敏的羊红细胞发生溶血反应,根据溶血程度可测定补体总活性。以溶血百分率作纵坐标,相应的血清量为横坐标绘图,可知在50%溶血附近补体的量与溶血程度呈直线关系。因此以50%溶血作为终点较以100%溶血作为终点更为敏感。故称为50%溶血试验,即CH50(50%complementhemolysis)。 2.主要试剂 &n ...

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补体旁路途径溶血活性的测定(ACH50)

1、原理 兔红细胞不经致敏可激活人补体旁路途径,导致兔红细胞溶解。在反应系统中加入乙二醇双氨基四乙酸(ethyleneglycol-bis-aminotetracetate,EGTA)可和血浆Ca2+螯合,EGTA与Mg2+结合能力很弱,故经典途径被封闭。根据兔红细胞的溶血程度,可测定补体旁路途径的总补体活性。 2、所需主要试剂 (1)兔红细胞(rabbitredbloodcell,RRBC)悬液 ...

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免疫复合物的测定

免疫复合物(immunecomplex,IC)或抗原抗体复合物是抗原与其对应抗体相结合的产物。在正常情况下,机体内的游离抗原与相应抗体结合形成IC,可被机体的防御系统清除,作为清除异物抗原的一种方式,对机体有利。但在某些情况下,体内形成的IC不能被及时清除,则可在局部沉积,通过激活补体,并在血小板、中性粒细胞等参与下,引起一系列连锁反应而导致组织损伤,出现临床症状,称为免疫复合物病(immunoc ...

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补体C4溶血覆盖技术

电泳是通过电场作用将C4迁移率不同的同种异型分离开,然后依照分型标准定型。在某些情况下,C4A某种同种异型与C4B某种同种异型迁移率相同不易区分开,此时可用溶血覆盖技术加以区别。 1、原理 用肼处理豚鼠血清,可灭活其补体成分C4,使之成为帜缺乏的血清。将C4缺乏的豚鼠血清与致敏的SRBC混合,因缺乏C4,补体的攻膜效应不能发挥,将混合物与一定浓度琼脂糖混合倾注在电泳完毕的凝胶板上,凝胶板上C4区带 ...

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小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的培养

养BMDC有好几个月了,看了2、3篇文献就开搞,发现论坛里还是有一些战友养这个。就想开个专题讨论贴,请新手老手都上来谈谈经验或者问些问题。集思广益,大家相互促进下。 我在论坛里看到因为有战友养DC看百把篇文献的,感到佩服又奇怪,就BMDC的培养我目前只知道有个经典版本和改良版本。 我用的是改良版本,参考文献改天附上(可能养这个的战友大多看过了),说 1.取小鼠股骨胫骨,小鼠要年轻!(6W-8W,以 ...

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补体遗传多态性的检测

补体遗传多态性的检测大多分二步进行,第一步是用琼脂糖高压电泳或聚丙烯酰胺等电聚焦电泳将EDTA抗凝血浆通过凝胶电泳,根据分子量的大小、所带电荷的多少及等电点(pI)将血浆蛋白分开。第二步是免疫固定或溶血鉴定,琼脂糖高压电泳或聚丙烯酰胺等电聚焦后,在凝胶板上铺上抗补体某一成分的抗血清,使其与凝胶板上的抗原结合,形成分子量较大的免疫复合物沉淀嵌在凝胶孔中,不易漂洗掉,故称免疫固定。将免疫固定后的凝胶板 ...

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化学发光检测原理

概述 化学发光作为一种分析工具的吸引之处就在于检测的简单性。化学发光的实质是自身发光,这意味着化学发光的分析测试仪器只需要提供一种可以检测光信号和纪录结果的方法就可以了。自发光检测仪需要一个闭光的样品室和光检测器。最简单的便是相片纸或X光片,甚至视觉检测器都可以。 化学发光检测方法的简单性使得它的应用很简单并且完全可以自动化。但是它的灵敏度又是怎么样的呢?化学发光有如下两个内在的优势: 1.绝大多 ...

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