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细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗 ...

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 (二)P ...

摘要：预防和避免污染是细胞培养成功的关键，黑胶虫（也称黑焦虫）是近几年来几乎出现在每个细胞培养实验室。但是现在无法对黑胶虫的确认和鉴别，导致学术界说法不一，笔者收集了关于黑胶虫的资料，对黑胶虫进行类系统描述，对黑胶虫出现的情况对细胞培养的影响以及黑胶虫污染后的有效处理进行介绍。 (Grade 2005 Biotechnology School of Life Science and Enginee ...

我所在的实验室有用于培养细胞的超净台，内置酒精灯一个。老师传授授说在打开培养瓶或培养液之前要用酒精灯的火焰快速的烧一下，目的是消毒，减少污染。自己很怀疑这样做的有效程度，因为瞬间的火焰不可能将瓶口的温度升高很多，又如何达到消毒的目的呢？在网上搜索后找到一些资料，认为不应在超净台内使用火焰。现将其放到丁香园上供大家参考，希望有经验的同学给个说法，超净台内到底应不应该有酒精灯。 Open flames ...

一 引物的设计 引物的设计对于这个实验至关重要，因为real time pcr的检测灵敏度比较高，所以相应的对引物设计的要求就很高。普通的要求规则大家都知道，还有几点必须注意： 1，引物的错配率（引物错配形成引物二聚体，但是SYBR照样能嵌入进去，结果导致实验结果的误差很大，重复性也不好）。 2，引物的特异性一定要高（不像常规PCR，引物同源性不高，只要两条产物的片段长度相差足够大，在电泳的时候能 ...

由多个实验室参与、Roche赞助的、研究LigntCycler和ABI PRISM real-time PCR仪性能对比的论文，发表在2004年Clinical Chemistry上（2004;50:1088-1092），SCI IF 5.454 点击下载 ...

正在定购MG63 ，即人成骨头瘤细胞，但是以前没买过，都是从别人那直接扩培的，所以对于刚拿到细胞株要做的不清楚，恳请有经验的战友提供帮助。 打算买三瓶，新购进时应该会配培养基，那我是否需要提前配培养基（按厂家提供的培养基配方，是一拿到手直接冻到液氮里吗？还是先培养几天再冻？查文献发现很多种培养基都可以用，可否用实验室已有培养基培养，大约需要多久后才能用实验室的培养基培养。 对于新买的细胞，必然是有 ...

ECM(extracellular matrix)是细胞外大分子构成的网络。 包括：胶原、非胶原糖蛋白、氨基聚糖与蛋白聚糖、弹性蛋白等。 ECM在结缔组织中含量较高。 ECM的成分及组装形式由所产生的细胞决定，并与组织的功能相适应。如：角膜、肌腱。 ECM影响细胞的存活、死亡、增殖和分化。 第一节ECM的成分 一、胶原Collagen 组成： 由原胶原交联而成，原胶原是三条肽链形成的三股螺旋，含有 ...

C3是由α和β两条肽链通过二硫键连结组成，为β1球蛋白，沉降系数9.5s，分子量180kD，含糖量约占2.2%，是血清中含量最多的补体成分，约占总补体含量的1/3以上，在补体系统激活过程中，无论是经传统途径还是旁路途径，均需C3活化后，才能推进后续补体成分（C5～C9）的连锁反应，因此，它在两条激活途径中起关键作用。C3主要在肝实质细胞被合成分泌少量由巨噬细胞和单核细胞合成。生理情况下，体液中或组 ...

成分：微丝（microfilament）、微管（microtubule）和中间纤维（intemediate filament）构成。均由单体蛋白以较弱的非共价键结合在一起，构成纤维型多聚体。 微丝确定细胞表面特征，使细胞能够运动和收缩。 微管确定膜性细胞器的位置和作为膜泡运输的导轨。 中间纤维使细胞具有张力和抗剪切力。 其它骨架成分：核骨架、核纤层、细胞外基质。 第一节微丝microfilamen ...

第一，盖玻片需要过酸，并且自来水、蒸馏水冲洗干净。两张或者以上的玻片很容易因为虹吸作用粘到一起，很容易冲不干净，很容易把两张完全重叠在一起的玻片当成一张，一定要看清楚，晾干片子最好是在消毒饭盒中进行，饭盒底面放上纱布，将玻片斜靠在饭盒侧壁，玻片正面不要接触纱布，否则会粘上毛毛的。然后高压蒸汽灭菌，烤箱中烤干。 第二，爬片前最好用多聚赖氨酸或者层粘蛋白或者胶原溶液处理玻片，未处理过的细胞不容易贴壁， ...

1.细胞爬片； 2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)； 3.PBS漂洗5min； 4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)； 5.PBS漂洗2次，每次5min； 6.1%BSA封闭30min； 7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h； 8.PBS漂洗2次，每次5min； 9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h； 10 ...

第一节基本概念 生命与非生命物质最显著的区别在于生命是一个完整的自然的信息处理系统。一方面生物信息系统的存在使有机体得以适应其内外部环境的变化，维持个体的生存；另一方面核酸和蛋白质信息在不同世代间传递维持了种族的延续。生命现象是信息在同一或不同时空传递的现象，生命的进化实质上就是信息系统的进化。 一、几个容易混淆的概念 细胞信号发放（cell signaling）：细胞释放信号分子，将信息传递给其 ...

1.做细胞爬片(爬片的步骤就不详述了)，注意: 洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛一定要新鲜配制的(一周以内的都能用)， 因为PBS和4%多聚甲醛放久了后，都会有自发荧光。 2.抗体的孵育: 预实验的时候荧光根据文献和经验设定一、二抗的浓度，一抗4度孵育过夜（时间8－12h）；二抗（荧光抗体）孵育时要避光，孵育好后用PBS充分冲洗；可以将做好的片子直接在板子中孵育，如果从节约的角度来看，可以用1 ...

电镜的主要结构：电子光学系统、真空系统、供电系统。 1.电子光学系统1）照明部分 （1）阴极：又称灯丝，一般是由0.03~0.1毫米的钨丝作成V或Y形状。 （2）阳极：加速从阴极发射出的电子。为了安全，一般都是阳极接地，阴极带有负高压。 （3）控制极：会聚电子束；控制电子束电流大小，调节象的亮度。 阴极、阳极和控制极决定着电子发射的数目及其动能，因此，人们习惯上把它们通称为“电子枪&r ...

一、补体测定 1、血清总补体活性测定 当兔抗羊红细胞血清与羊红细胞结合后，遇到补体即可使羊红细胞发生溶血，依据这一特点可建立测定血清中总补体活性的方法。 当血清的效价和绵羊红细胞浓度保持一定的情况下，在规定的反应温度和时间内，溶血程度与补体量呈正相关。因此，通过测定溶血程度，即可测知补体的含量。目前常用的方法是用 50%补体溶血试验（CH30）测定总补体活性，即求出使50％致敏羊红细胞发生溶血时的 ...

药物研发、个性化用药研究是基因芯片技术在药物开发中应用最为广泛的一个领域。在药物靶点发现、药物作用机制、药物毒理评估研究中所使用的生物芯片主要是检测RNA水平的表达谱芯片；在个性化用药研究中，主要从人群的SNP入手，用SNP芯片或者再测序芯片评估个体的遗传背景是否适合使用某种药物，以及适合的剂量。 在当代药物开发过程中发现和选择合适的药物靶点是药物开发的第一步，也是药物筛选及药物定向合成的关键因素 ...

全内反射荧光显微术(Total internal reflection fluorescence microscopy TIRFM)是利用全内反射产生的消逝波激发样品,使样品表面数百纳米厚的薄层内的荧光团受到激发，再用高灵敏度和高时间分辨率的摄像机CCD来捕捉荧光并用计算机进行显像，从而实现对生物样品观测的一种新生技术。由于消逝波特点及CCD的优势使全内反射荧光显微镜具有高信噪比和高时间分辨率，因此它在对单分子的动态观测具有很高的应用价值。本文将对全内反射荧光显微镜的原理及应用和发展展望作一个简要的介绍。

1、材料与试剂 （1）pH7.2巴比妥缓冲液 氯化钠 85.00g 巴比妥 5.75g 巴比妥钠 3.75g ...

定义：结构、功能和发生上相关的内膜形成的细胞结构称为细胞内膜系统，如核被膜、内质网、高尔基体等。 功能：区隔化；增加内表面积，提高代谢和调节能力。 从系统发生来看内膜系统起源于质膜的内陷和内共生。 从个体发生来看新细胞的内膜系统来源于原有内膜系统的分裂，具有核外遗传（epigenetic）的特性。 第一节蛋白质分选的基本原理 细胞内合成的蛋白质、脂类等物质之所以能够定向的转运到特定的细胞器取决于两 ...