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养好、管好怀孕母猪的中心任务是保证胎儿能在母体内得到充分的生长发育，防止化胎、流产和死胎的发生，使怀孕母猪每窝产出数量多、初生体重大、体格健壮和均匀整齐的仔猪，并使母猪有适度的膘情和良好的泌乳性能。 为此，需要做好如下几点： （一）进行早期怀孕诊断 为了缩短猪的繁殖周期，提高年产仔窝数，需要对配种后的母猪进行早期怀孕诊断。早期怀孕诊断的方法很多，现把便于养殖户应用的两种方法介绍如下： （１）根据发 ...

为了对以个特定序列进行PCR做重复检测需要三个不同的区域，每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出。 一、样品准备区 这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施： （1）PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。 （2）组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。 （3）用于样品处理的工具不能被用作普 ...

一、实验室网络设置 实验室网络由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心和省级流感实验室两级组成。 二、实验室条件及生物安全操作的要求 1．省级流感实验室实验条件及生物安全的操作要求 （1）实验生物安全要求：安全Ⅱ级+（BSL-2 级+）或安全Ⅲ级（BSL-3 级）。 （2）特异性H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测、血清学检测中用到的血凝抑制实验（HI）可以在安全Ⅱ级+（BSL-2 级+ ...

反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。 笔者一直从事实验室动物疫病检测工作，现就应用RT-PCR实验方法过程中出现的一些常见污染问题做如下论述，仅共同行参考 ...

一、中国主要矮小品种猪种质概况 1）藏猪 藏猪是我国较为古老的原始品种，系高原放牧猪种。主要分布在西藏自治区及比邻的四川甘孜藏族自治州，云南边庆藏族自治州，交通极不便利的半农半牧区。海拔一般在2800～3500米的半山地带。长期生在长气候严寒、四季不分的高寒地区。年平均气温7～12℃，昼夜温差大，海拔高，空气干燥，日照长达2300小时左右，年降雨量600～700毫米，无霜期110～120天，在极其 ...

1.收取细胞。 2.PBS洗三遍。 3.线粒体BUFFER洗一遍。 4.线粒体BUFFER(加PMSF)洗一遍。 5.分离BUFFER洗一遍。 6.匀浆80次。 7.1000G取上清。 8.10000G弃上清。 9.贴壁物即为线粒体。 ...

研究背景 猪性情温驯，毛色白、黑、黑白及褐色，汗腺不发达，幼猪和成年猪都不耐热，性成熟早，寿命最长达27年，平均16年。 研究思路 小型猪体型矮小，成年体重30~60kg。染色体数2n=38。 选用广西、贵州的小香猪培育而成。 腹股沟区的局部解剖、腹股沟管的构成及阴囊疝的发生均与人相似。 其腹股沟阴囊疝形成的年龄、突出途径疝块外形回纳疝块压住内环、精索与疝囊关系、疝囊颈与腹壁下动脉关系、箝闭机会疝 ...

当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞。与其他常用的导入外源物质的方法相比，电穿孔具有很多优点。首先，不 ...

随着基因工程的发展，常常需要构建一种能高水平表达异源蛋白质的表达载体。启动子对外源基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的重要元件。因此研究启动子的克隆方法，对研究基因表达调控和构建表达载体至关重要。 迄今为止，国外尚未见到有关启动子克隆方法的综述性报道，国内仅孙晓红等曾就启动子的结构、分类、克隆方法和食用菌中已经分离到的启动子作过综述。而近年来又有许多改进的克隆启动子的方法获得了多方面的成功 ...

外源基因进入细胞主要有三种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法，实际上其基本原理都是利用不同的方法在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入，但是由于前两者的效率低且伤害较大，所以现在除了对于一些特殊细胞系，一般的转染方法都利用脂质体。 利用脂质体转染和其他方法一样，最重要的就是防治其毒性，因此脂质体与治理的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸 ...

一 原理 Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。 滤膜孔径一般为8um，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel的滤膜，这与体内情况较为相似。 铺有Ma ...

体外肝细胞损伤模型建立（CCl4和H2O2） 1　大鼠肝细胞的分离和培养 大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r·min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次 ...

在人体发育过程中，γδΤ细胞先于αβΤ细胞出现，γδΤ细胞 主要分布于皮肤，小肠、食道、肺和生殖器官等上皮组织内，而在外周血中淋巴细胞仅占0.5%-5%。外周血中γδΤ细胞主要为Vγ9Vδ2、δ1Τ细胞，它在抗感染、抗肿瘤和免疫监 ...

一、免疫PCR 所谓免疫（Immune PCR）就是利用抗体与DNA特异结合来检测抗原，把抗原抗体反应与PCR联合应用而建立的一种抗原检测系统。 在免疫PCR中，一个中介分子同时具有与DNA、抗体分子特异结合的能力。其一端连接DNA（标记物），另一端连接抗原-抗体复合物，形成一个特殊的抗原-抗体-DNA连接物。作为标记物的DNA分子可用PCR的扩增，存在特异的PCR产物应证明作为标记物的DNA分子 ...

一、耐热DNA聚合酶特点 合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。 TIANGEN公司生产的耐热DNA聚合酶全部采用标准化生产工艺和质量检测标准，是经过多次分子筛、离子交换层析柱纯化的超纯型产品，去 ...

确定抗原表位，包括表位的序列和构象，是免疫学家感兴趣的一个问题。表位的确定不仅可以了解有关免疫反应的众多信息，为进一步人工控制免疫反应奠定基础，而且对药物合成、疫苗设计等也具有指导意义。确定表位常用的方法有：还原法、蛋白印迹法、肽扫描、突变分析等，后两种方法还同时解决了蛋白分子一级序列问题。但这些方法大多困难而繁琐。 近几年来，噬菌体展示技术成为探测蛋白空间结构、探索受体与配体之间相互作用结合位点 ...

一、实时荧光Taqman 探针设计 总原则：探针选择要保守，引物选择要保守，因此必须找一段100-200bp相对要保守的片段来设计引物与探针。即real-time PCR的扩增片段是50bp----150bp。当找不到150bp的保守片段时，必须确保探针的片段是保守的。在设计探针和引物时，要同时考虑在两条链上设计引物与探针。但要注意的是：在那条链上设计探针时，就应靠近在同一条链上设计的引物(即上游 ...

1. 分离制备单细胞悬液： （1） 体外培养的细胞株：用胰酶消化，最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液，细胞要计数，具体的量我前边已经说过。 （2） 体内脏器细胞：处死动物，取出脏器，于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。 2. 胶板制备： （1） 取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。盖玻片推匀，不能有气泡，4度凝固5至8分钟。 （2） 水平取 ...

消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞 用DMEM配0.2%的1型胶原酶（用20的血清的DMEM配可能更好，有类似文献），分装于青霉素小并，每并2-3ml。1只免的胸主动脉置于1瓶消化液中消化，消化约10几个小时（消化程度的把握要体会），离心后，接种（若见细胞量大，成功把握大），绝对静置3天（没必要看，看多了无益），8天可传代。 犬胸主动脉平滑肌贴块法——方法成熟，比消化法好控 ...

细胞培养经验之谈