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重组PCR是利用PCR法在DNA片断上进行定点突变，用PCR介导产生核苷酸的突变包括碱基替代、缺失或插入。 引物设计 通常引物中至少有15个碱基与靶序列相互补，而靶序列的3'-末端可以与任何添 加序列发生错配，单个碱基错配除引物3'-末端处3-4个碱基外，其他地方都可引入。 在PCR产物之间提供重叠的添加序列至少要有15个碱基，当然越和越好，这样它将使 重叠的杂合分子稳定。 原初PCR(Prima ...

步骤： 1、从棉签上取下有检材的棉花并置于1.5塑料离心管中。 2、管中加入400微升TNE缓冲液；25%微升sarcosyl(硅鱼精)；75微升水；5微升蛋白酶K溶液手混匀，37度保温2小时。 3、用一新的灭菌牙签将棉花拧干后管中取出再用12000rpm离心5分钟。 4、.移上清液(内含裂解细胞或雌性片段)于一新的15微升管，不要震荡沉淀物(内含非裂解细胞或精子)，再用TNE洗脱四次。 5、 ...

DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。本实验介绍的是ABI PRISM 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程。【原理】 ABI ...

提取植物DNA时遇到多糖成分的干扰， DNA质量一直不高，如何消除多糖的影响？ 参考见解：一般来说，SDS法提取的DNA会还有较多的多糖，使DNA成胶冻状。而CTAB法提取可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比较高，可用以下方法试一试： 1、 在 DNA 未溶出之前，先用一些缓冲液洗去多糖。如可用缓冲液：100 mmol/LTris -HCl(pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0. ...

The In Situ PCR: Amplification and Detection in a Cellular Context Ernest F. Retzel Katherine A. Staskus Janet E. Embretson and Ashley T. Haase Department of Microbiology University of Minnesota Minne ...

Reagents Agarose Ultrapure Ampli Taq polymerase 5 U/µl Buffer 10X and 25 mM MgCl 2 Loading ...

Materials Chromosome medium (one bottle per student)--- KaryoMAX Peripheral Blood Karyotyping Medium #41675-018 These bottles usually come in groups of 10 (each bottle conmtaining 5 mL of media). &nbs ...

Reagents dH 2O Ethanol absolute (70% 90% and 100%) Formamide deionized Ambion Cat. No. 9342 ...

试剂 Earles Balanced Salt Solution (BSS) earles Fetal Bovine Serum Giemsa stain original azure blend Giemsa ...

生物芯片是指包被在硅片、尼龙膜等固相支持物上的高密度的组织、细胞、蛋白质、核酸、糖类以及其它生物组分的微点阵。芯片与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号即可实现对生物样品的分析。目前常见的生物芯片主要有基因芯片，蛋白质芯片、组织芯片等。基因芯片也可以叫做reverse northern - dot blots。目前主要有检测基因突变的基因芯片和检测基因表达水平的基因表达谱芯片。基因芯片技术主要包括 ...

Chromosome # Relative length Centromere index ...

生物芯片技术是应人类基因组计划而发展起来的一项高新技术。从1992年美国人Stephen Foder研制出第一块基因芯片起，生物芯片技术飞速发展：从基因芯片到蛋白质芯片、组织芯片、细胞芯片、芯片实验室，从表达谱芯片到诊断芯片、药物筛选芯片、生物传感器，从寡核苷酸芯片到cDNA芯片、基因组芯片，新兴的生物芯片技术层出不穷，生物芯片的应用领域也在不断扩展，生物芯片发挥的作用也越来越大，特别是在 200 ...

随着分子生物学芯片技术研究工作的进一步深入开展，NDA芯片技术已经被逐渐应用于对生物样品中的各种已知或未知的核酸序列表达的检测和比较研究。但是，作为生物体细胞中实施化学反应功能成分的蛋白质，其相当部分与活性基因所表达的mRNA之间未能显示出直接的关系，因此使作为高通量基因表达分析平台的cDNA芯片技术的应用过程受到一定的限制。另外，由于蛋白质结构和构象方面的各种微小的化学变化均能引起活性或功能的改 ...

1、芯片实验和定量PCR的优劣比较？ 基因表达谱芯片实验可以对大量基因一次性进行定量研究定量PCR则对大量基因需逐一进行定量研究。 2、在芯片制作过程中的PCR原液是否可以为客户保存？ 可以抽干冷冻保存一年。 3、可否用DNA和芯片杂交？ 不可以，因为芯片上的样品是cDNA而真核基因DNA中普遍存在內显子，核酸杂交无法顺利进行。 4、对于临床症状不明显的的遗传病，如何取样？ 可以从病人抽取血样或者 ...

酵母表达的多肽不出条带原因

尽管现在所有的注意力都集中到了蛋白芯片的研究上，蛋白质组研究实验室的主流技术还是双向凝胶电泳。双向凝胶电泳在历史上由于其低通量、低重复性以及对于少量蛋白不易检出的特性，其应用受到限制，这些少量蛋白通常是人类蛋白质组中最重要的疾病相关蛋白。然而，双向凝胶电泳技术的优势又继续推动了日益进展高通量模式的细化与开发。 数码蛋白质组芯片是Protein Forest公司的微化芯片，用于通过电荷和分子量大小在 ...

一、前言 芯片实验室（Lab-on-a-chip）或称微全分析系统（Miniaturized Total Analysis System，µ-TAS）是指把生物和化学等领域中所涉及的样品制备、生物与化学反应、分离检测等基本操作单位集成或基本集成一块几平方厘米的芯片上，用以完成不同的生物或化学反应过程，并对其产物进行分析的一种技术。它是通过分析化学、微机电加工（MEMS）、计算机、电子学 ...

酵母表达纯化问题

一、培养基的历史 体外培养（in vitro culture）包括：组织培养（tissue culture）、细胞培养（cell culture）、器官培养（organ culture）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百年的发展历史， ...

1.实时PCR原理 对扩增产物进行可重复性的定量长期以来一直是科学家和研究者的目标。传统的方法需要对终产物进行凝胶电泳分析。这种方法可以确定目的产物和竞争产物的大小，估算纯度，计算条带强度。然而，所用扩增试剂和体系的变动会造成扩增的终产物的重复性有较大的变动，成为这种方法的主要弊端。 扩增过程的指数期提供给我们最有用的，可重复的数据。在起始的目的DNA量与循环过程的指数期的扩增产物量之间存在着定量 ...