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1、 在冰上预冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管。1支用来转化样品，1支做pUC18对照。同时将NZY+ broth培养基在42°C预热。 2、 冰上融化感受态细胞。融化时轻轻将细胞混匀并分装成100ul/管。 3、 每管中加入随试剂盒提供的4 ml b-ME（巯基乙醇）。 4、 温和转动试管，将细胞在冰上放置10分钟，每2分钟温和转动一下。 5、 每管细胞加入0.1&n ...

试验试剂： PLATE溶液： iZN ；40％聚乙二醇（PEG，分子量3350；Sigma P 3640）；0.1mol/L 醋酸锂 g；10 mmol/L Tris-HCl （pH7.5）；1 mmol/L EDTA； 实验步骤： 1、 用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。 2、 将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA ...

实验原理： 体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒，选用转化和筛选技术， 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中，DNA可在生物体系中大量扩增，繁殖， 保存以及表达目的基因的产物，这是ＰＣＲ体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术，所获得的，不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研，医药生产和生物发酵等领域。 质粒转化不同细菌有不同的转化效率，转化效率的高低与实验的成败直接相关， ...

方法一： 效率非常高，一般可到1undefined8，好时可到1undefined9，特别适宜于大片段与文库构建及珍贵材料的连接转化。 实验试剂： A液：1M，MnCl2 B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121 ...

SNP是可遗传的，做F2代主要是验证Hardy－Weinberg遗传平衡定律。 群体遗传平衡定律，即哈迪一魏伯格定律，是群体遗传学一个最基本最重要的定律，这是由英国数学家哈迪(Hardy)和德国医生魏伯格(Weinberg1在1908年先后独立地证明过的： 在一个随机交配的大群体．如果没有其他因素(如突变、选择、迁移、漂变)的干扰，总是处于一种平衡状态，即从上一代到下一代基L大J型频率不改变，也意 ...

细胞爬片可以买专门的爬片，几块钱一小包的，爬片用前泡酸，高压消毒（包括镊子和枪头）。把用过的24孔板清洗干净，一孔一片，很方便，又互不干扰。把细胞培养到对数生长期，消化后再滴上去，爬1-2天贴壁后（中间可加适量培养液），可在板子里一直做完。清洗时，将PBS滴在片子上即可，不要剧烈摇晃。需要照相时候，再取出来，细胞面贴在载波片上，最好用50%甘油，中性树脂贴不好，容易毁坏细胞形态。取爬片时候，可以用 ...

SNP位点信息已知的情况下， 选择SNP的GENOTYPING的方法，主要根据你的经费情况设计，我分别给你分析一下现状： A一般实验室： 经费一般， 仪器不具备时， 最多用的是以下两种方法： 1、 基于PCR的方法，也叫AS-PCR， (ALLELE-SPECIFIC PCR)的办法，园子里这方面的东西不少，特别是在遗传发育版面应该很多。 主要原理是利用引物在扩增时3'端相对高的BASE要求，进行 ...

常态的细胞不能摄入外部溶液中的DNA，，所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。 转化，是将异源DNA分子引入一细胞株系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，是基因工程等研究领域的基本实验技 ...

看说明书上是写着用ＣsＣl梯度离心的方式，除此外还有别的吗？最好是所涉及的器材可方便取得的。还有啊，像M13之类的噬菌体可以用PEG/NaCl方法得到其DNA，这个T7就不适合了？多谢各位支持。 相关的例子: 1.取活鲤鱼肝胰脏经冲洗后立即投入液氮中.然后制成匀浆.先在4℃下600g离心保留上层液.再900g离心保留沉淀物并用不同溶液重复悬浮洗涤离心可得到比较纯的线粒体.将上述线粒体在含1% ...

1、多态性是一个群体概念，多态性指这个差异占群体的1%以上。否则就叫突变（小于1%）。 2、SNP是多态性中的一种，只是进一步限定了差异只是单碱基。 3、SNP一般来说，是全部体细胞一样的基因型（除开嵌合体）。 4、突变一般不是一个个体全部细胞的变化。 5、如果突变发生在生殖细胞，则可以遗传，但是只要这个突变群没有达到总群体的1%，它就只是一个突变株/系。达到了1%就是多态性了。 ...

1、 连接缓冲液的影响：大体上缓冲液含有以下组分：20-100mmol/L的Tris-HCl，较多用50mmol/L，pH的范围在7.4-7.8，较多用7.8，目的是提供合适酸碱度的连接体系；10mmol/L的MgCl2，作用是激活酶反应；1-20mmol/L的DTT，较多用10mmol/L，作用是维持还原性环境，稳定酶活性，25-50ug/ml的BSA，作用是增加蛋白质的浓度，防止因蛋白浓度过稀 ...

当我们已经获得目的基因片段，选择好适当的克隆（或表达，转化）质粒载体， 并确定重组方案后，下面要进行的就是ＤＮＡ片段之间的体外连接，从而获得重组子。 此重组子可转入相应的宿主菌中用于对目的基因的扩增以及目的基因表达（如现代基因工程药物的生产），还可用于序列分析和转基因等重要生物技术的研究中。 DNA连接实验原理： ＤＮＡ分子的体外连接就是在一定条件下， 由ＤＮＡ连接酶催化两个双链ＤＮＡ片段组邻的５ ...

我根据分子克隆上的经典方法提取M13噬菌体单链DNA，第一次就成功。但是随后几次，试剂和方法都一样，在可以看见噬菌体白色沉淀的基础上（量足够多），却怎么也提不出来，最后乙醇沉淀时，一片空白。请求各位大侠指点迷津。谢谢 既然首先可以成功，说明方法肯定没问题。建议： 1、检查你的试剂有无污染； 2、操作有无问题（虽然可能性小，但有时很难想到的）； 3、也可以换用其他方法，做个对照。 ...

目前已有多种方法可用于SNP检测，如根据DNA列阵的微测序法、动态等位基因特异的杂交、寡聚核苷酸特异的连接、DNA芯片以及TaqMan系统等。但不管哪一种方法，首先必须进行靶序列的扩增，然后才能进行其它检测。 传统的SNP检测方法是采用一些已有的成熟技术，如DNA测序、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)、单链构象多态性(SSCP)、等位基因特异的寡聚核苷酸杂交(ASO)等。这些技术虽在某种程度上 ...

1、PCR 产物测序时出现重叠峰问题图1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序结果移码）解决方法：将PCR 产物克隆到质粒（如T 载体）中挑单克隆测序，或将PCR 产物进行PAGE纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序。问题图2（PCR 产物不纯，含部分序列一致的两种以上的片段，长度不一）解决方法：主要原因是PCR 产物没有纯化，含有部分序列一致 ...

宿主不一样，你要分离的噬菌体方法步骤也不一样，下面摘录部分菌株对应的噬菌体分离过程步骤，仅供参考： 1、噬菌体分离　 (1) 以新鲜鸽粪4g 加入100ml 普通液体培养基内放入37 ℃温箱培养24h。 (2) 次日从中取出10ml70 ℃加热30min 离心2000r/ 10min 上清液用滤器过滤后保存于4 ℃冰箱备用。 (3) 在普通琼脂平板底面分别注明1、2、3 号。 (4)在1 号平板接 ...

采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单，但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同（主要是盐离子浓度不同）或反应温度不同，这时可以采用如下措施解决： 1）先用一种酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切； 2）先进行低盐要求的酶酶切，然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求，加入第二种酶进行酶切； 3）使用 ...

λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径，其一是裂解生长，环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体DNA中与之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不裂解。平板培养时 ...

pfu指的是噬菌体的空斑形成单位。以下是关于测定M13效价的一个方法： 测定噬菌体滴度 只有当噬菌体的感染复度MOI (multiplicity of infection)值远低于1时（即细胞过量时），噬菌斑的数量才会随着加入噬菌体的量而呈线性增加。正因如此，建议检测噬菌体贮液的滴度时，在感染前进行稀释，而不是在高MOI值的情况下稀释被感染的细胞。低MOI值有助于确保每个噬菌斑仅含一个DNA序 ...

一、实验目的与原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。 提取质粒的基本步骤分为三步： ①细菌的培养和质粒的扩增 ②细菌菌体的裂解 ③质粒DNA的纯化 本实验采取的菌体裂解方法为碱解法，质粒纯化方法为梯度离心法。 二、材料与试剂 1、材料：大肠杆菌 2、仪器：超净工作 ...