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蛋白酶抑制剂

蛋白 酶 已知对应的抑制剂 蛋白 酶 已知对应的抑制剂 ...

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Purification of Gcn4

Purification of Gcn4 James FishburnHahn Lab March 2006 Gcn4 constructs are cloned into the pET21(a)vector and have a 6-His tag expressed at the N-terminus Gcn4 is expressed and purified from BL21(DE3) ...

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Western Blots

1)Run protein gel. Set up blot: 2)Prepare two tupperware containersone with dH2O and one with 1/2X Transfer Buffer (TB). 3)Remove one glass plate from the gel by twisting a spacer between the plates.T ...

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Monoclonal Antibody Production

Order 6 six week old Balb/C mice and let the ARC know they are coming.Have your antigen ready for when they arrive.Once they get there earmark the mice and perform a pre-bleed on them to be used as an ...

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GST fusion protein purification--GST融合蛋白纯化

GST fusion protein purification GST融合蛋白纯化 John MundyInstitute of Molecular BiologyCopenhagenDenmark http://www.arabidopsis.org/info/Protocols_Mundy2.jsp#gst 1)grow 20ml cells O/N37℃ dilute 50X into pr ...

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In-gel Tryptic Digest for Protein ID by Mass Spectrometry

This protocol is based on Shevchenko AWilm MVorm O& Mann M.Mass spectrometric sequencing of proteins from silver-stained polyacrylamide gels.Anal Chem 199668:850-8.I have used it with success on b ...

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切除融合标签常用蛋白酶的酶切位点

Cleavage Sites Table for Fusion Proteins: PROTEASE COMPANY Protease Capture Thrombin Leu-Val-Pro-Arg�Gly-Ser ...

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GST-融合蛋白的表达与纯化

原理 GST 纯化系统是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白,并可反复使用数次。试剂u IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2g IPTG 溶解入10ml 水,过滤除菌,分装,-20℃保存。u Lysis bu ...

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Affinity Column Preparation--亲和层析柱制备

Affinity Column Preparation 亲和层析柱制备 Peter Novick LabDepartment of Cell Biology Yale University School of Medicine http://info.med.yale.edu/cellbio/Novick/Second/Protocols/Affinity.pdf 1.Prepare 1 ml ...

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Sample preparation (analytical gels)

Sample preparation and solubilization are crucial factors for the overall performance of the 2-D PAGE technique.Protein complexes and aggregates should be completely disrupted in order to avoid appear ...

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气相色谱法的新进展及发展方向

1、仪器方面的最新进展 自动化程度进一步提高,特别是EPC(电子程序压力流量控制系统)技术已作为基本配置在许多厂家的气相色谱仪上安装(如HP6890,Shimadzu GC-17A GC-2010,Varian 3800,PE Auto XL,CE Mega 8000等),从而为色谱条件的再现、优化和自动化提供了更可靠更完善的支持。 _与应用结合更紧密的专用色谱仪,如天然气分析仪等。 _色谱 ...

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Multiple Tissue Northern (MTN™)Blots

人、小鼠和大鼠的多种组织来源的高质量mRNA经电泳分离后预转于尼龙膜上 .预制的即用型Northern杂交膜,免去RNA电泳操作过程 .可检测范围:0.5-10kb .可重复使用 .提供ExpressHybTM快速杂交液样品 .可靠的优良品质 从1991年始,公司就向广大的生命科学研究者提供高质量的预制杂交膜。而MTN™膜更是在国际著名的学术期刊上有将近3000篇文献引用。 严谨的制作 ...

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基因表达调控的现象和概念

一、基因表达调控是生命的必需 基因表达 (gene expression)是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。典型的基因表达是基因经过转录、翻译,产生有生物活性的蛋白质的过程。rRNA 或 tRNA 的基因经转录和转录后加工产生成熟的 rRNA 或 tRNA也是 rRNA 或 tRNA 的基因表达,因为 rRNA 或 tRNA 就具有在蛋白质翻译方面的功能。 基因组 ( ...

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基因表达及其调控

某些基因不断地进行转录和翻译,产生出各种蛋白质,通常称之为基因表达。每个细胞都有一套完整的基因调控系统,使各种蛋白质只有在需要时才被合成,这样就能使生物适应多变的环境,防止生命活动中的浪费现象和有害后果的发生,保持体内代谢过程的正常状态。但是,原核细胞和真核细胞的基因调控有着明显的区别。 原核细胞表达的基因调控,比真核细胞要相对简单,这里以大肠杆菌乳糖操纵子为例来说明。大肠杆菌能以乳糖为唯一碳源生 ...

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蛋白质含量测定法

本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。 蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高,比 ...

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蛋白纯化经验指南

原创:Chromatography weixingui@263.net, 推荐书籍:《蛋白纯化与实验鉴定指南》、《生物工程下游技术》、《酶工程》、《酶制剂工业》 1)我现在手头有个融合蛋白,纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析,之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列,没有问题。细胞破碎后,融合蛋白在沉淀里,我用助溶剂提取后,可以用GS ...

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质谱蛋白质组学在微生物鉴定中的应用

微生物传统的鉴定方法是建立在微生物的形态学、生态学、细胞生理和生化以及基因的基础上的,自20世纪80~90年代以来,微生物鉴定系统不断发展,自动化程度不断提高,但也是建立在传统的生理生化和基因基础上。无论是微生物鉴定的传统技术还是基于传统的生理生化和基因基础上的自动化仪器技术,它们均需要经过培养繁殖、分离纯化等步骤,然后再根据表型和基因型来进行鉴定,但是由于微生物群落及其生存环境的复杂性,目前自然 ...

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蛋白质二级结构(secondary structure)(图)

二级结构是指多肽链借助于氢键沿一维方向排列成具有周期性的结构的构象,是多肽链局部的空间结构(构象),主要有α-螺旋、β-折叠、β-转角等几种形式,它们是构成蛋白质高级结构的基本要素。 α-螺旋(α-helix)是蛋白质中最常见最典型含量最丰富的二级结构元件.在α螺旋中,每 个螺旋周期包含 3.6 个氨基酸残基,残基侧链伸向外侧,同 ...

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Western Blot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答)

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类 i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL iii.底物荧光ECF iv.底物DAB呈色 三、主要试剂 四、主要步骤 五、 ...

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蛋白质化学思考题总汇

第一章 绪 论 1.蛋白质组: 一个基因组内所有基因表达的全部蛋白质。的定义有什么不足。 蛋白质组:不同类型的细胞或同一个细胞在不同的活动,状态(时空)下,蛋白质组的蛋白质种类构成却很不一样。因此,蛋白质组的定义:一个基因组内所有基因表达的全部蛋白质。定义从字面上容易理解,但在实际中却很成问题。 2.如何理解从基因组-蛋白质组是一个复杂而漫长的里程。 ①目前基因注释的方法还有较高的出错率,尤其对那 ...

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