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yhbdxs:实验思路是这样的，将目的基因连接到含有GFP的表达载体上，得到GFP和目的基因的融合蛋白，再纯化。 我现在还没有选定用哪个载体，请你们帮帮我，太多不清楚的地方了。 E.coli:通常在进行原核表达实验时，选择使用pET系列载体居多。但是pET系列载体不带有GFP基因，其上的His Tag标签是专门用于分离纯化的。通常情况下，目的基因与GFP蛋白融合，用于真核表达的实验较多。 yhbd ...

影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外，还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素。由于VectorNTIsuitor7.0软件模拟表达，可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难，所以本实验的工作主要针对载体拷贝数、载体稳定和宿主菌的生长状态。 本实验中重组表达质粒PrP-pET-32 ...

我想表达遇到的第一个瓶颈估计就是为什么我的外源片段插到载体里面，PCR鉴定没问题，双酶切也OK，可是就是不见表达。一般我们是如何判断没有表达呢？大多都是首先进行SDS-PAGE。在跑胶的时候一定要设对照，比较严谨的电泳对照，应该是：Marker，标准品阳性对照（如果有，且打算做Western的话），以及空白载体（诱导）和重组载体（不诱导）2个阴性对照，再加上诱导不同时间的表达结果。Marker用于 ...

蛋白质的提取和纯化--选择分离材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置 ...

主要产品 : 1.蛋白提取试剂盒I(实体组织和细胞总蛋白提取) 2.蛋白抽提试剂盒-II (液体样品蛋白抽提和回收) 3.核-胞浆蛋白制备试剂盒 4.变性/非变性细胞裂解产物制备试剂盒 5.非变性裂解液 6.变性裂解液 具体介绍: 1.蛋白抽提试剂盒 -I (实体组织和细胞蛋白抽提100 extractions) P1250 50 次提取 286元 100次提取 520元 描述：实体组织如大脑 ...

在重组蛋白纯化的过程中，研究者常常利用融合表达的各种亲和标签，通过一步法亲和纯化的方法获得自己的目的蛋白。其中，6×His•Tag标签因其氨基酸个数少、对蛋白活性影响较小、亲和纯化方便，成为大家常用的选择。但是，His Tag并非万能标签，依然有不少使用限制因素，如：对重金属离子敏感、不适合金属离子螯和层析方法的蛋白；活性不稳定的蛋白；对蛋白纯度要求更高等。所 ...

作为分子生物学领域老牌厂家，Promega同样有很有特色的原核表达系统，不过纵观Promega近年的表现，似乎不满足于此，而是将目光投向了跨物种间的穿梭表达，以及越来越热的体外表达系统了。 蛋白纯化，永远是蛋白表达后最令人关注的问题。Promega的 PinPoint™ Xa 表达系统则是巧妙利用了生物素作为亲和纯化的中介――将目的基因克隆到表达载体上的一段“神秘&rdqu ...

随着人类基因组计划取得巨大的成功和许多物种基因组测序的完成，仅仅靠基因组的序列来试图阐明生命现象是远远不够的，因此，研究重心已经开始从揭示生命的所有遗传信息转移到在分子整体水平对功能的研究上，生命科学已实质性地跨入了后基因组时代。 尽管现在已经有多个物种的基因组被测序，但这些基因组中通常有一半以上基因的功能是未知的。目前功能基因组研究中所采用的策略，如微阵列法（microarray）（Wodick ...

双向电泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做“热”的所谓蛋白质组的，嘻嘻！ IEF用Biorad的圆盘电泳槽（不行用国产的吧，不推荐），SDS-PAGE用六一厂的就可以了（ft，六一厂应该给我money吧，给你做广告了）（money不是很多的强烈推荐六一的，买进口电泳槽的钱留出来测搞出的 ...

1．启动子 启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。 原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRNA的合成极为重要。在转录起始点上游5～10 bp处，有一段由6～8个碱基组成，富含A和T的区域，称为 ...

蛋白表达系统已经发展到了令人惊讶的顶峰时代。最近30年来，科学家们已经推动了基因工程、重组技术、纯化指南和性质鉴定等技术的急剧发展。其中包括驾驭病毒和细菌质粒的天然性质的能力，这些“carriers”将运载外源基因到宿主细胞中，然后被转化成蛋白。经过许多年的发展，蛋白生产能力的提高已经在进一步理解基因的功能和所编码蛋白的功用和相互作用等方面起到了积极作用，也将为寻找如单克隆 ...

摘 要 综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法，主要包括高效液相色法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。 多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。随着现 ...

浅述蛋白质分离纯化的新技术 摘 要： 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术，综和近年来国内外的一些研究结果，结合实际应用的例子，分析了各种分离纯化方法的优点，同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。 关 键 词： 分离纯化 蛋白质 进展 生物技术的发展非常迅速，基因工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术， ...

双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。80 年代的工作表明，转录激活因子在结构上是组件式的（modula r），即这些因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成，其中有DNA 结合结构域（DNA binding domain，简称为DB）和转录激活结构域（activation domain，简称为AD），它们是转录激活因子发挥功能所 ...

电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 各电泳法，除另有规定外，照下述方法 ...

酵母双杂交技术及其在蛋白质组研究中的应用 作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一蛋白质组学(proteomics)正受到越来越多的关注。蛋白质组学的研究目标是对机体或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析。蛋白质组学的研究不局限任何特定的方法。高分辨率的蛋白质分离技术如二维凝胶电泳和高效液相层析经典的蛋白质鉴定方法如氨基酸序列分析等现代质谱技术基因组学研究的各种手段现代计算机信息学和计算机网络通讯 ...

研究者们在分离到某一基因后，要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达――即：有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多，除了要有强启动子和起始密码子外，良好的表达尚需编码目的蛋白的mRNA中含有核糖体结合位点，表达水平受密码子喜好程度的影响，也受编 ...

大规模基因组 测序计划的实施已改变生命科学的重心，在相当短的时期内，一些原核生物和某些低等真核生物的基因组 序列已被测定. 1995年，流感嗜血杆菌基因组 序列首次被破译，在此后不到两年的时间，近50个细菌的基因组 序列已被完成. 然而，这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组 时代，许多DNA序列信息仅提供相关基因组 的结构和 ...

关于离子交换层析实验的介绍，对于常用到的层析介质的一些基本技术数据罗列如下： 离子交换介质名称 最高载量 ...

Bradford quantification of protein concentration Brandford法测定蛋白浓度 http://www.msu.edu/user/delgadoi/192.html Standard Curve m g of standard B ...