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目前常用的离子交换纤维素列于下表 DEAE － 纤维素 形状 长度 （微米） ...

This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives.Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obje ...

Solutions Elution Buffer 50 mM Tris 7.5 5 ml 1M Tris pH 7.5 0.1% SDS 0.1 g SDS 0.1 mg/ml BSA 1.0 mg BSA 0.25 mM EDTA 50 ml 0.5M EDTA 2.5% glycerol 2.5 ml glycerol up to 100 ml with Q For every 10 ml a ...

Glutathione- a microassay for determining glutathione content in cells 检测细胞谷胱苷肽含量 Laboratory of P.J.HansenDept.of Animal SciencesUniversity of Florida http://www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/gsh.ht ...

TCA-DOC For precipitation of very low protein concentration 1)To one volume of protein solutionadd 1/100 vol.of 2% DOC (Na deoxycholatedetergent). 2)Vortex and let sit for 30min at 4ºC. 3)Add 1 ...

Preparation of Affinity Column SEK 5/3/95 1.Add 222.2μl 1M MOPSpH 7.5 to 2ml of 10mg of CREBtide (0.1M MOPS pH 7.5 final concentration). 2.Read OD205OD280 (using 0.1M MOPS buffer as blank) 3.Affi ...

薄层色谱法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1.仪器与材料 (1)玻板 除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 (2)固定相或载体 最常用的有硅胶G、硅胶 ...

分析者对待测离子应有一些一般信息，首先应了解待测化合物的分子结构和性质以及样品的基体情况，如无机还是有机离子，离子的电荷数，是酸还是碱，亲水还是疏水，是否为表面活性化合物等。待测离子的疏水性和水合能是决定选用何种分离方式的主要因素。水合能高和疏水性弱的离子，如Cl-或K+，最好用HPIC分离。水合能低和疏水性强的离子，如高氯酸（ClO4-）或四丁基铵，最好用亲水性强的离子交换分离柱或MPIC分离。 ...

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。 （一）透析袋浓缩法 利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%－40%浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然 ...

传统方法难以对蛋白质进行分离且保持其活性，但采用连在磁珠上的单克隆抗体进行免疫沉淀富集，SDS-PAGE电泳法检测则可达想要结果。用磁珠分离细胞溶菌液中的蛋白 质，几乎不需要预先处理，与其他方法相比，非特异性结合也较少。 要从全血，培养上清液，血清，腹水中分离蛋白质，用于制备、分析，运用磁珠作为固相载体进行免疫测定的优点在于快速的结合动力学和简单的分离，洗涤过程。在蛋白质纯化中，为了得到高结合容量 ...

yhbdxs:实验思路是这样的，将目的基因连接到含有GFP的表达载体上，得到GFP和目的基因的融合蛋白，再纯化。 我现在还没有选定用哪个载体，请你们帮帮我，太多不清楚的地方了。 E.coli:通常在进行原核表达实验时，选择使用pET系列载体居多。但是pET系列载体不带有GFP基因，其上的His Tag标签是专门用于分离纯化的。通常情况下，目的基因与GFP蛋白融合，用于真核表达的实验较多。 yhbd ...

影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外，还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素。由于VectorNTIsuitor7.0软件模拟表达，可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难，所以本实验的工作主要针对载体拷贝数、载体稳定和宿主菌的生长状态。 本实验中重组表达质粒PrP-pET-32 ...

我想表达遇到的第一个瓶颈估计就是为什么我的外源片段插到载体里面，PCR鉴定没问题，双酶切也OK，可是就是不见表达。一般我们是如何判断没有表达呢？大多都是首先进行SDS-PAGE。在跑胶的时候一定要设对照，比较严谨的电泳对照，应该是：Marker，标准品阳性对照（如果有，且打算做Western的话），以及空白载体（诱导）和重组载体（不诱导）2个阴性对照，再加上诱导不同时间的表达结果。Marker用于 ...

蛋白质的提取和纯化--选择分离材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置 ...

主要产品 : 1.蛋白提取试剂盒I(实体组织和细胞总蛋白提取) 2.蛋白抽提试剂盒-II (液体样品蛋白抽提和回收) 3.核-胞浆蛋白制备试剂盒 4.变性/非变性细胞裂解产物制备试剂盒 5.非变性裂解液 6.变性裂解液 具体介绍: 1.蛋白抽提试剂盒 -I (实体组织和细胞蛋白抽提100 extractions) P1250 50 次提取 286元 100次提取 520元 描述：实体组织如大脑 ...

在重组蛋白纯化的过程中，研究者常常利用融合表达的各种亲和标签，通过一步法亲和纯化的方法获得自己的目的蛋白。其中，6×His•Tag标签因其氨基酸个数少、对蛋白活性影响较小、亲和纯化方便，成为大家常用的选择。但是，His Tag并非万能标签，依然有不少使用限制因素，如：对重金属离子敏感、不适合金属离子螯和层析方法的蛋白；活性不稳定的蛋白；对蛋白纯度要求更高等。所 ...

作为分子生物学领域老牌厂家，Promega同样有很有特色的原核表达系统，不过纵观Promega近年的表现，似乎不满足于此，而是将目光投向了跨物种间的穿梭表达，以及越来越热的体外表达系统了。 蛋白纯化，永远是蛋白表达后最令人关注的问题。Promega的 PinPoint™ Xa 表达系统则是巧妙利用了生物素作为亲和纯化的中介――将目的基因克隆到表达载体上的一段“神秘&rdqu ...

随着人类基因组计划取得巨大的成功和许多物种基因组测序的完成，仅仅靠基因组的序列来试图阐明生命现象是远远不够的，因此，研究重心已经开始从揭示生命的所有遗传信息转移到在分子整体水平对功能的研究上，生命科学已实质性地跨入了后基因组时代。 尽管现在已经有多个物种的基因组被测序，但这些基因组中通常有一半以上基因的功能是未知的。目前功能基因组研究中所采用的策略，如微阵列法（microarray）（Wodick ...

双向电泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做“热”的所谓蛋白质组的，嘻嘻！ IEF用Biorad的圆盘电泳槽（不行用国产的吧，不推荐），SDS-PAGE用六一厂的就可以了（ft，六一厂应该给我money吧，给你做广告了）（money不是很多的强烈推荐六一的，买进口电泳槽的钱留出来测搞出的 ...

1．启动子 启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。 原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRNA的合成极为重要。在转录起始点上游5～10 bp处，有一段由6～8个碱基组成，富含A和T的区域，称为 ...