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Preparation of protein extracts for western blot 1.Grow cells to mid-log (OD600 less or equal to 1.0). 2.Harvest about 5 OD's of cells in a 13X100 glass dispo tube (Use new tubes.Can be up to about 6 ...

1. After electrophoresis of protein gel transfer gel to round staining tray. Add ~200 ml protein gel stain. 2. Microwave for ~45 sec until the s ...

高分子量标准参照 中分子量标准参物 &n ...

notes Written (2004-04-16)by Jonathan Sheehan Adapted from Pace and Sholtz1 Purpose When you really need to know the concentration of your urea or guanidinium HCl solutionsuse this method.Especially ...

This extraction procedure was developed by the Simmlaboratory and described in Rudolph et al.1999(Anal Biochem 26966-71).It’s a great way to make very concentrated extracts for Western blottinga ...

利用一种创新分析策略，Scripps研究所的研究人员深入分析了在恶性人类肿瘤细胞中异常高度表达的一种酶。当这种叫做KIAA1366的酶被失活时，能抑制宫颈癌和乳腺癌细胞中肿瘤的生长和迁移。这意味着这种酶的抑制剂可能成为治疗多种癌症的“良药”。 通过联合酶活性和代谢物分析，研究人员确定出这种之前未知功能的蛋白质是一种促进癌症生长的脂质信号途径的一个关键调节因子。KIAA136 ...

一、MTT比色法检测细胞活性 （一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 （二）试剂准备 1、 青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中 抽滤除菌。 2、 L15基础培养基：1000mlL15培养基，加2g碳酸氢钠， ...

（一）原理 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。 此法具有高效、快速、简便等优点。 （二）载体的基本要求和选择 理想的载体应具有下列基本条件：①不溶于水，但高度亲水；②惰性物质，非 ...

Clontech公司最新推出的Living Colors Fluorescent Timer，是唯一一种能随着时间的延长而由绿色变为红色的的荧光蛋白报告基因。这种颜色可变的荧光蛋白为实时研究启动子的调控时效提供了可能：在活细胞或者活的生物体内，你不但可以看到某个启动子什么时候、在什么位置开始启动基因的表达，还可以观察到它什么时候关闭表达――这在以前是不可能实现的――而且由于这种报告基因是荧光蛋白， ...

(一)实验原理 双缩脲法(Biuret法)和Folin�酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法)是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料在酸性溶液 ...

之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的pET系列载体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darmstadt，已有300多年的历史。已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建有62个生产基地。 ...

　　尽管我们现在对真核基因表达调控知道还不多，但与原核生物比较它具有一些明显的特点。 　　真核基因表达调控的环节更多 　　如前所述：基因表达是基因经过转录、翻译、产生有生物活性的蛋白质的整个过程。同原核生物一样，转录依然是真核生物基因表达调控的主要环节。但真核基因转录发生在细胞核（线粒体基因的转录在线粒体内），翻译则多在胞浆，两个过程是分开的，因此其调控 ...

一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2 CH2 COOH+3H2 SO4 ――2CO2 +3SO2 +4H2O+NH3 (1) 2NH3 +H2 SO4 ――(NH4 )2 SO4 (2) ...

表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然，它也存在一些缺乏高级修饰、细胞内部还原性过高等缺点。 原核表达从一开始的设计就非常重要，所谓好的开始是成功的一半 ...

最佳的银染灵敏度和最快的染色速度 SilverQuest™ Silver Staining Kit实验步骤专门设计，确保最快地得到结果的同时保证最好的银染灵敏度和清晰的背景。90分钟内就可以检测到0.3ng蛋白（图1）。 图1 使用SilverQuest™ Sliver Staining Kit得到亚纳克级灵敏度 下面列出的样品在NuPAGE® Novex 4- ...

1 分离方法 　　采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。 1.1 高效液相色谱（HPLC） HPLC的出现 ...

等电聚焦 等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上，电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开；一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽 ...

Upstate公司在世界上最先开发出步骤优化简洁的商业化ChIP分析试剂盒，保证实验的准确性和可重复性，同时Upstate提供广泛可行的ChIP级别应用抗体。ChIP基本试剂盒和特定蛋白 质ChIP级别应用抗体结合完成一个完整的染色质免疫沉淀分析。在过去的数年中，Upstate提供的ChIP分析试剂盒和ChIP级别应用抗体得到了全世界科学家的认可，文献应用极为广泛。 Upstate最新推出EZ C ...

蛋白 浓缩方法基本有： 丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法…… 1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白 质变性。 ...

摘　要：　叶绿体基因的表达在许多方面与原核基因表达相似，所以最早的理论认为叶绿体基因的表达与原核相似，是在转录起始水平上的调控，进一步的研究认为叶绿体基因表达调控是在不同水平上进行的如：转录水平的调节、转录后调节与修饰、翻译和翻译后修饰等。 关键词：　叶绿体；叶绿体基因组；表达调控 叶绿体基因组的特点是具相同或相关功能的基因组成复合操纵子结构。这一特点有利于叶绿体基因的表达与调控，例如rpoB-r ...