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Q:流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的？A:FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度 FL2-H是指脉冲高度. 通常在做细胞周期分析时应用 用于去除粘连细胞 Q:流式同型对照怎样选择？A:同型对照(Isotype Control)：使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。如果一抗 ...

1离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，2 加入预冷70％乙醇，于4℃固定过夜，或-20℃长期固定。（4℃过夜一般隔天就进行检测，如果想推迟几天测，那就保存在-20℃，有资料说-20℃可以保存一个月，个人建议尽量在最短时间内检测，有些实验是在不同时间点上收细胞，这时我就等最后一次固定完了一块测，基本上也多在一周内检测完毕，没有特地去比较保存时间对检测结果的影响）3 细胞染色：离心收集细胞， ...

annexinＶ-FITC(FL1 通道)+ PI（FL2通道）双染细胞，FITC阳性＋PI阴性细胞百％就是早期凋亡％。原理磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS 高亲和力特异性结合。将An ...

一、surface marker染色 1、收获细胞，0.5-1x10e6/tube，用FACS Buffer 2ml洗涤一次，倾倒后滤纸吸干管口液体2、加入预先配置好的你需要染的surface marker的抗体混合液(即CD3CD4CD8抗体mixture）充分混匀，室温下孵育20分钟3、FACS Buffer 2 ml洗涤一次倾倒后滤纸吸干管口液体二、Intracellular Stainin ...

Q:用流式作细胞凋亡为什么跟tunel差别那么大啊？？tunel测出来的细胞凋亡率大概有30％而作流式测出来的凋亡率只有2％（阴性对照 0.5％）差别好大啊，用的是beckman公司的Annexin V /PI双染试剂盒，实验步骤如下：1，胰酶消化贴壁细胞，加培养基中止，离心1000转 5min2，吸去上清，PBS0.5ml 重悬细胞（因为要送到别处作流式，期间路程约1h，户外温度约37度）3，然 ...

一、 细胞培养实验室的设置及设备 （一）细胞培养实验室的设置 组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。 细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。 1．无菌操作区 （1）无菌操作室：无菌操作区只 ...

1、认真按照操作规程进行实验，一般不大会导致污染，很多情况下是由于所用的试剂或培养基有污染而使实验失败， 2、粉末培养基配制好后 ( 加了血清 ) ，一般在 4 度尽量不要超过 1 个月，如在 -20 度 存放时间 可长一些，但最好也不要超过 3-4 个月，可能对于永生化细胞株来说要求不是太高，但我在过去的 4 年里一直是作原代细胞培养的，细胞娇弱，经验表明放置时间不宜过长。 3、关于实验用品 ...

1、保存血清最好的方法? 建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2、如何解冻血清才不会使产品质量受损? 建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 3、血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 血清中沉淀物 ...

各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株 ，都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物 性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可 给以相应的名称，即文献中常称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。 已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。当前世界上已建的各种细胞系（株）已难胜数，我国也建有百种以上，并在不断增长中。 体外培养细胞的种类和命名 体外培养细胞的 ...

体内组织细胞在体外培养时，所需培养环境基本相似，但由于物种、个体遗传背景及所处发育阶段等的不同，各自要求条件有一定差别，所采取的培养技术措施亦不尽相同，现介绍个别组织细胞培养的要点如下: 上皮细胞培养 上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮 ...

组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿瘤细胞和在体外培养的肿瘤细胞，其差异较小，但也并非完全相同。培养中的肿瘤细胞具以下突出特点： （－）形态和性状 培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多数肿瘤细胞镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮廓明显，核糖体颗粒丰富。电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微 ...

无菌操作基本技术 1、实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌 ...

上流式前细胞用75％乙醇固定行吗？Q:我养肿瘤细胞，测周期。看到帖子说70％乙醇必须用PBS和乙醇配，用水配细胞会碎裂，有帖子说PBS和乙醇配会出现絮状物。上流式前细胞用75％乙醇固定，就用买来的现成的瓶装75％乙醇，行吗？必须那么严格吗？A:先用冷PBS悬浮细胞，大约1-2ml，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。不直接加75%乙醇的原因是：直接加入 ...

体内、外细胞的差异和分化 1、差异： 细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。 ...

Analysis Kits (Chips and Reagents)Experion Automated Electrophoresis — Sample Types What types of samples can the Experion separate and analyze? The Experion automated electrop ...

PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。常见问题如下： 一、假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中 ...

Antibiotic Stock Solutions Ampicillin Beta-lactam-antibiotics are not very stable when dissolved. Slow but steady degradation happens even when frozen to -20°C. Therefore commercial b ...

请问各位前辈们，在配制细胞培养液（主要是胚胎培养液）时，哪些成分需要分开溶解（分成A、B液），最后才混合到一起？配制试剂时有没有个大体的原则，哪些情况下得分开配制呢，原因是什么？ 不同的培养液在配制的时候其成分不同，要注意的事项也不同。一、配制首先要保证每种成分都是合格的。1 水的质量很关键，最少是三蒸，电阻率在0.1-1.0×10-6Ω•cm 以上。2 血清等其 ...

方法： 试剂试剂甲：A液：Na2CO3 10.00gNaOH 2.00g酒石酸钾钠（或钾盐钠盐） 0.25g混合、溶于500ml蒸馏水中。B液：CuSO4·5H2O 0.5gH2O 100.00ml用前将A液50份与B液1份混合即为试剂甲。试剂乙：于磨口回流瓶加入下列试剂Na2WO4·2H2O 100.00gNaMoO4·2H2O 25.00gH2O 70 ...

（1）xinglinzi 提到PBS的配制是用：NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4•H2O 1.56g，KH2PO4 0.2g，pH7.4 灭菌。我查到其他文献用的是：NaCl 160g，KCl 4g， Na2HPO4•12H2O 58g，KH2PO4 48g， pH7.4 灭菌。对比起来，就是终液量不同，差20倍而已，但两组中的不同处是一个用的Na2HPO4 ...