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放射免疫分析法的建立

一、放射免疫分析的基本试剂 (一)标准品 标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。 按实验要求,将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液,用于制作标准曲线。 (二)标记物 标记抗原应具备:①比放射 ...

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高效液相色谱柱

一、怎样选择色谱柱 现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。 (一)正相与反相 1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据 ...

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Glycosphingolipid analysis 鞘糖脂分析

Contributor: Suprya JayadevDate: Nov. 10 1993 1) Incubate cells with 1 µCi/ml of 3H-galactose for 72 hours.---> If treatment is for an extended period of time: treat in serum free media conta ...

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Labeled Sphingomyelin Synthesis 合成标记的神经鞘磷脂

Contributor: Suprya JayadevDate: Mar. 11 1993 Synthesis reaction: 1) Mix purified DMSM with cyclohexylamine and 14CH3I at a ratio of 1/1.1/1.3 in 5 ml of methanol. 2) Allow reaction to proceed at room ...

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In vitro Sphingomyelinase Assay 体外分析神经磷脂酶

Contributor: Suprya JayadevDate: May 25 1993 Reagents: Lysis buffer25 mM Tris-HCl pH 7.45 mM EDTA1 mM ATP20 µg/ml CLAP1 mM PMSF Buffer A10 mM MgCl20.2 M Tris-HCl pH 7.40.2 % Triton X-100 Buffer ...

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Sphingomyelin Mass Measurement 鞘磷脂质量分析

Contributor: Suprya JayadevDate: Oct. 20 1994 Reagents:2N methanolic NaOH 2N HCl-------------------------------------------------------------------------------- Protocol: Bligh & Dyer extraction 1 ...

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Liposome Preparation

OBJECTIVE: Method for incorporating proteins into liposomes for liposome swelling assay or as an alternative antigen presentation method. REAGENTS: Dioleoyl Phosphatidyl Choline Buffer of choice / dis ...

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Desalting Acidic Glycosphingolipids 鞘糖脂脱盐

1) Prepare a C-18 reverse phase prep-sep cartridge by washing with: a) 10 ml of methanol b) 20 ml of chloroform-methanol (2:1) c) 10 ml of methanol d) 10 ml of methanol-1.6 M sodium acetate (1:1) 2) A ...

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细胞芯片和组织芯片

不只有DNA或蛋白质,还有整个细胞或器官也能布置在玻璃表面上从而制得细胞芯片或组织芯片。举例来说,如果你想要找与细胞膜受体成键的配体,你需要布置整个细胞而不是提纯受体并用其点板。如果矩阵由不同的细胞组成,将会容易地辨认出与细胞特异性成键配体。这种方法应用将会很广。例如,如果配体与一个特定的癌细胞成键,对照试剂或者毒素取代物将会连到配体上,然后对每个做图像分析和处理。 相反,小分子或基因排列将会在一 ...

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生物芯片技术及其应用进展

摘要: 生物芯片技术是一种新型的生物检测技术,具有平行、快速、自动化等特点。本文着重论述了关于生物芯片的基本概念,主要制作技术及其应用前景。 生物芯片(biochip)技术是生命科学与微电子等学科相互交叉发展起来的一门高新技术,是随着人类基因组计划(human genomic project,HGP)的研究发展应运而生。并使原定于2005年竣工的人类30亿碱基的测序工作,于2003年4月由美、英、 ...

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血清总胆固醇的测定——邻苯二甲醛法

胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物,它不仅参与血浆蛋白的组成,而且也是细胞的必要结构成分,还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在,统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一方法。 胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质,此物质在550nm波长处有最大吸收,可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400m ...

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基因芯片技术应用研究进展

基因芯片(gene chip)是近年发展起来的一种新型实用的高新生物技术,已成为目前国际上生命科学研究的热点之一。其突出特点是具有高度的并行性、多样性、微型性和自动化,已成为高效、快速、大规模获取相关生物信息的重要手段。利用该技术可在数分钟至几小时内完成传统分子生物学方法要数月甚至数年才能完成的几万次至几十万次的基因分析实验。目前基因芯片技术已在疾病诊断、发病机制及疾病易感性研究、药物设计与筛选、 ...

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粗脂肪含量的测定——索氏抽提法

一、目的 脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中,测定脂肪的含量,可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。脂肪含量的测定有很多方法,如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。目前国内外普遍采用抽提法,其中索氏抽提法(Soxhlet extractor method)是公认的经典方法,也是我国粮油分折首选的标准方法。通过本实验的学习掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法。 二、原&nbs ...

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脂类测定标准化工作的回顾和建议

脂类测定标准化十分重要。心脑血管病的临床和流行病学研究,高脂血症的诊断或治疗过程中血脂变化的监测,以及冠心病危险性的估计都需要准确、精密和实验间可比的测定结果。 一、国外标准化工作的回顾和现状 早在1958年,美国疾病控制与预防中心(CDC)即提出脂类[胆固醇(chol)和甘油三酯(TG)]测定的标准化计划,并和世界卫生组织(WHO)合作,对美国和国际实验室进行脂类测定的质量评价。当时有800多 ...

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血清脂类测定方法

脂蛋白和脂质测定方法学评价血浆脂蛋白和脂质测定是临床生化检验的常规测定项目,其临床意义主要是:早期发现与诊断高脂蛋白血症;协助诊断动脉粥样硬化症;评价动脉粥样硬化疾患如冠心病和脑梗塞等危险度;监测评价饮食与药物治疗效果。 一、血浆脂蛋白测定 1、超速离心分离纯化法超速离心法是根据血浆中各种脂蛋白的比重(密度)的差异,在强大离心力作用下进行分离纯化的一种方法。血浆在不同密度盐溶液中经过超速离心,各种 ...

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星形胶质细胞的一些经验

丁香园网友xxxdada的观点为: 1、我取脑的时候是用双镊,先用一把夹住头部,另一把在人状缝下面撕开,要特别小心,别弄出血来,因为出血的话取出的脑组织含血块就会比较多,离心的时候可以看出来,不知各位同仁有没有更好的方法。 2、尽量去除脑膜和血管,PBS清洗干净,胰酶消化37度10-15分钟消化中止按每10ml胰酶加1ml血清。 3、玻璃培养瓶差速30-40min过滤75-100um滤网,种植,其 ...

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血清脂类测定方法

脂蛋白和脂质测定方法学评价血浆脂蛋白和脂质测定是临床生化检验的常规测定项目,其临床意义主要是:早期发现与诊断高脂蛋白血症;协助诊断动脉粥样硬化症;评价动脉粥样硬化疾患如冠心病和脑梗塞等危险度;监测评价饮食与药物治疗效果。 详细内容请下载: ...

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关于人退变椎间盘细胞原代培养的一点体会

丁香园网友clellwei的观点为: 原代椎间盘细胞培养其实并不太难,但培养时间相对较长,所以容易出问题。 1、选材很关键 选用胎儿椎间盘进行原代培养相对容易一些,可利用反复传代的方法来制作退变模型。直接选择人退变椎间盘进行培养时(一般选择手术摘除的椎间盘),患者的年龄及间盘的退变情况必须充分考虑在内。若年龄偏大,间盘退变很严重,培养的难度相应增大。20-50岁之间的患者都可采用。如果实验需要进行 ...

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Liposome Swelling Assay

REFERENCES: Nikaido and Roseenberg (1983) J.Bact 153: 241-252; Yoshimura et al. (1983) J.Bact 258: 2308-2314. METHOD: 1、6.2 ?moles of lipid (ideally egg phophatidylcholine or dipalmitoyl phosphorylcho ...

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Planar Lipid Bilayer Experiment平面脂双层实验

Preparation of chambers: Immediately after use rinse with distilled water a couple of times and then with 70% or 100% ethanol (can repeat this rinsing) then invert the cells and let them air-dried. Th ...

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