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丁香园网友freett的问题为： 我是新手，第一次培养细胞，按照师姐的配方配了0.05%EDTA－trypsin但发现消化了十五分钟后，细胞还是基本上全贴在瓶壁上，请问各位高手，这可能是什么原因？ 丁香园网友重剑无锋的观点为： 1、最有可能是你的培养液没有去除干净，因为培养液可以中止消化。所以建议用PBS冲洗两次。然后再加EDTA. 2、加大EDTA的浓度 ，可以选择0.1％与trypsin混合使 ...

丁香园网友mmlirx的问题为： 我的细胞消化多度了，当时看到都哗哗的往下掉了。现在养了两天，有些飘起来，也有两三个聚在一起，也有挺多帖璧的，但是感觉状态还不好。由于科室没有此细胞的冻存，所以得养好。大哥大姐，现在有有什么好的办法补救下？ 丁香园网友wxgang的观点为： 马上用培养基中和，用吸管吹打细胞，收集全部的细胞到以无菌的离心管中800RPM 3分钟。弃上清，用全培重悬，换新的培养瓶继续培 ...

丁香园网友doctorfri的问题为： 我的细胞消化完后不贴壁请教各位何原因. 目前已基本排除以下原因: 1、培养基和血清 2、培养瓶及装培养基和血清的瓶 3、操作的问题 4、胰酶及消化时间的问题 丁香园网友gkxmj的观点为： 1、消化过度，用酶消化时，见细胞开始变圆时既终止消化，用吸管轻轻吹打即可，消化过度，24小时后可见细胞成簇，形态不规则。 2、培养瓶 新的培养瓶，细胞不易贴壁，建议加多 ...

丁香园网友zyz00的问题为： 我刚买了一瓶MCF-7细胞，用胰酶消化了10分钟，吹打了几百下，细胞还是没分散开，传代后贴壁也不是太好，怎么办那？。 丁香园网友huananhu的观点为： 我没有养过这种细胞，但是我养过鼻咽癌细胞。这种细胞的贴壁能力很强，用0.5%胰酶（含0.1%EDTA）一般要消化12~15min。我的经验是细胞用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化（避免细胞 ...

贴壁细胞消化传代的简单方法: 丁香园网友jinliangyang的观点为： 贴壁细胞消化传代时通常采用两种方法：一、加入胰酶等细胞脱落后，再加培养基中止胰酶作用，离心传代；二、加入胰酶后，镜下观察待细胞始脱落时，弃胰酶，加培养液分瓶。但前者太麻烦，而后者有可能对细胞施加胰酶选择，因为总是贴壁不牢的细胞先脱落，对肿瘤细胞来说，这部分细胞有可能是恶性程度较高的细胞亚群。 本人介绍一种简单的消化传代方 ...

细胞培养名称：新生大鼠皮质星形胶质细胞培养 组织来源：种属：大鼠 年 龄：新生1天-2天 取材部位： 皮质 选用的酶：0.125%胰酶 消化时间：37度15min 注意事项：胰酶平时用1.5ml EP管分装冻存，用时解冻，37预温1min，以保持胰酶好的活性，消化时每隔5min轻轻摇动消化组织。 细胞培养名称：成年大鼠室下区星形胶质细胞培养 组织来源：种属：大鼠 年 龄：成年2.5月零 取材部 ...

一、酶消化法。 1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。 2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温 ...

基因芯片，也叫DNA芯片，是在90年代中期发展出来的高科技产物。基因芯片大小如指甲盖一般，其基质一般是经过处理后的玻璃片。每个芯片的基面上都可划分出数万至数百万个小区。在指定的小区内，可固定大量具有特定功能、长约20个碱基序列的核酸分子（也叫分子探针）。 由于被固定的分子探针在基质上形成不同的探针阵列，利用分子杂交及平行处理原理，基因芯片可对遗传物质进行分子检测，因此可用于进行基因研究 ...

蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）设计用于高效液相色谱系统，分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD ELSD的应用范围包括：碳水化合物，药物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂，营养滋补品，及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化，并且由于 ...

可能大家都知道“因特网”和“计算机”是当今最流行的名词。计算机已经成为我们日常生活中的必备工具，那请问一句“你的计算机CPU用的是什么芯片呢？”是“Intel”，还是“AMD”呢？其实无论是“Intel”还是“AMD”，它们在本质上 ...

蒸发光散射检测器（Evaporative Light-scattering Detector）是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。1993才由Alltech公司商业化生产。 一、ELSD原理 恒定流速的色谱仪（高效液相、逆流色谱、高效毛细管电泳等）洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管，drift tube)，流动相及低沸点的 ...

基因芯片是通过特殊方法将大量特定序列的基因探针有序地固化在1平方厘米的玻璃或硅衬底上，而构成有大量生命信息储存的芯片，与计算机的电子芯片十分相似。科学家让芯片上这些成千上万的探针分子，与想要检测的带有标记的基因样品进行杂交，通过杂交信号的强弱判断样品上某些生物分子的数量、活性（表达力）。因为它一次可对大量核酸分子进行检测分析，所以它能在同一时间内分析大量的基因，使人们准确高效的破译遗传密码。它是继 ...

怎样选择保护柱，但又不影响分离分析？ 通常，在选择保护柱之前首先要考虑的是样品是否清洁，对于大部分分析工作者来说，一只1cm长的保护柱便能提供充分的保护作用。但是，如果样品非常不清洁，或工作中发现经常要更换1cm的保护柱，那么就应该选用2cm或3cm的保护柱，保护柱越长自然所装填的色谱填料就越多，则其保护性能越好，当然随着保护柱长度的增加，样品的保留时间也相应增加，一般来说，保护柱的内径与分析色谱 ...

【摘　要】目的：培养脑皮质微血管内皮细胞。方法：取1～5d Wistar乳鼠脑皮质经不同孔径的筛网过滤后，用胶原酶振荡消化获得的微血管内皮细胞进行培养，用Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定。结果：培养的细胞呈单层贴壁生长，7～9d呈典型的铺路卵石样征象。结论：建立了一种简便易行的培养脑皮质微血管内皮细胞的方法。 【关键词】 细胞培养；微血管内皮细胞；Wistar大鼠 脑微血管内皮细胞是构成血脑屏障的主要成 ...

摘要: 　目的　探讨脑微血管内皮细胞的体外培养方法并进行细胞超微结构研究及组织型纤溶酶原激活物(TPA ) 活性测定。　方法　取新生小鼠脑组织 通过匀浆、过筛、胶原酶消化、差速粘附等技术对鼠脑微血管内皮细胞进行原代培养 待细胞铺满瓶底时 用01125%胰酶20102%EDTA 消化 离心收集内皮细胞 进行传代培养。原代、传代各取8 例 吸取培养液用酶联免疫吸附试验测试TPA 活性。　结果　经&ET ...

一、明胶铺被 1、问；我曾经常识过高压与过滤两种方法。其中高压之后的明胶，即使放4℃冰箱仍很澄清，这是不是明胶变性？你觉得高压可靠吗？明胶里是蛋白与氨基酸能耐住这么高的温度吗？另外，明胶在37℃水浴溶解澄清后，过滤仍不易通过（每50ml大约可滤到30ml），而且过滤后的明胶再放到4℃就又变为胶冻状，经37℃水浴澄清后铺瓶。这样反复三次，发现我的明胶有些浑浊，不知什么原因，是不是这样的反复水浴对明胶 ...

选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考： (1) 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。 (2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。 (3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640 。 (4) 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率 ...

实验室常用细胞株简介 细胞株名称ATCC 编号细胞来源细胞种类生长状态使用培养基 293CRL-1573人胎肾贴壁、上皮样MEM/NEAA，10%FBS 2215无人肝癌贴壁、上皮样DMEM，15%FBS 127TAg& ...

巨噬细胞培养 巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周，多用做原代培养，难以长期生存。 巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。 培养巨噬 ...

(1)RIA的优点 RIA具有许多其他分析方法无可比拟的优点。它既具有免疫反应的高特异性，又具有放射性测量的高灵敏度，因此能精确测定各种具有免疫活性的极微量的物质。①灵敏度高，一般化学分析法的检出极限为10-3～10-6g，而RIA通常为10-9-10-18g。②特异性强，由于抗原-抗体免疫反应专一性强，所被测物一定是相应的抗原。良好的特异性抗体能识别化学结构上非常相似的物 ...