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到目前为止，蛋白质结构解析的方法主要是两种，x射线衍射和NMR。近年来还出现了一种新的方法，叫做Electron Microscopy。其中X射线的方法产生的更早，也更加的成熟，解析的数量也更多，我们知道，第一个解析的蛋白的结构，就是用x晶体衍射的方法解析的。而NMR方法则是在90年代才成熟并发展起来的。这两种方法各有优点和缺点。 首先来说一下，这两种方法的一般的步骤和各自的优点和缺点。电子显微镜 ...

获得蛋白质的晶体结构的第一个瓶颈，就是制备大量纯化的蛋白质（>10mg），其浓度通常在10mg/ml以上，并以此为基础进行结晶条件的筛选。运用重组基因的技术，将特定基因以选殖（clone）的方式嵌入表现载体（expression vector）内，此一载体通常具有易于调控的特性。之后再将带有特定基因的载体送入可快速生长的菌体中，如大肠杆菌（Escherichia coli），在菌体快速生长的 ...

成纤维型细胞：在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有卵园形核，胞质向外伸出2-3 厘米个长短不同的突起，除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间质起源的组织细胞常呈本类形态生长。 培养细胞的纯化 【我是小米2】培养细胞的纯化： 1、自然纯化 即利用某一种类细胞的增殖优势，而排挤其他 ...

Julius：我的细胞被污染了，表现为培养液内有浑浊，可见很多白色粉末的东西悬浮，之前发现一瓶有，就丢了，剩下的及时换液，清洗，可在传代后的第二天就又见浑浊，仍有部分细胞是贴壁的，可以看到很多”细胞“首尾相连成一条条的线状，可细胞怎会是线状生长呢？（抱歉没有拍下照片）请问是霉菌还是细菌污染呢？如何区分细菌，霉菌及真菌的污染。现在如何处理呢？污染控制区大家所说的用甲醛熏蒸，碘 ...

细胞程序性死亡是正常生理现象，多发生于胚胎发育和维持组织自身平衡。Kerr et al.最早发现有两种细胞死亡：坏死（Necrosis）和凋亡（Apoptosis）。Apoptosis，希腊文意思是树叶从树上“凋落”，这里是指凋亡，是细胞主动参与自身死亡的过程。凋亡程序有一些特殊形态学特征，包括质膜的改变，如细胞膜不对称性和细胞附着消失，胞浆和细胞核固缩，核内DNA裂解。到 ...

关于凋亡的流式检测 wanhood 一、PI单染色法 基本原理 其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面： 1.细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋 ...

概论 污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。 （一）污染的类型 细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。 1、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素， ...

细胞调亡与坏死鉴别的简便方法 midas 1、PI和Hoechst33342双标： PI、Hoechst33342均可与细胞核DNA（或RNA）结合。但是PI不能通过正常的细胞膜，Hoechst则为膜通透性的荧光染料，故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏，这时可为PI着红色。正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆 ...

组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一－－PI法 schoman 无论是肿瘤或其它正常新鲜组织均可用PI（碘化丙啶）的方法来检测，这是一种常见而且便宜的方法。主要操作步骤如下： 1、组织块用0.25%胰酶消化30min－1h。 2、200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。 3、75％乙醇（－20度预冷）固定细胞1h。 4、加入PI（终浓度50ug／ml）和无DNA酶污染的RNA酶（终浓度 ...

Hoechst染色的具体步骤 caspase8428：我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB与荧光物质反应生成沉淀。那么，Hoechst染色时，什么时候加DAB，浓度是多少，用什么稀释，最后怎么来终止反应？是不是还要用抗退色固片介质来封片？ sunandsuny：Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。如果你是用来染培养的细胞的话，可以参 ...

请问伤寒沙门氏菌如何用噬菌体分型，这种噬菌体的试剂到哪购买？ 江西省卫生防疫站的何晓青自制了12株沙门氏菌噬菌体分型系；另外中国医学细菌保藏管理中心沙门氏菌分型噬菌体专业实验室也有。你可以跟他们联系一下。 具体做法请参考以下文献： 何晓青等，中华预防医学杂志，199428(3):136另外，河南省卫生防疫站底秀娟建立了一种伤寒沙门氏菌分型的新方法也提供给你，具体见附件．希望对你有帮助！ 一种伤寒沙 ...

例一 gongyulai ：我用的是药物诱导癌细胞凋亡，做DNA Ladder（用的是北京鼎国的动物细胞凋亡梯子提取试剂盒）。跑出来的电泳不是一条条带，而是每条很长的拖尾现象，Marker到是出来了。我是按说明书上0。8%的琼脂糖。我用的是60v电压。不知道什么原因？郁闷。说明书上说混合温和是什么意思，我又没用力摇。我还想问收集凋亡细胞时离心时转速多少比较好？ chujun_hust ： （1） ...

我们做的是大肠杆菌的基因工程菌。前段时间连着三批都感染了噬菌体，每天一批，我们做的是60T发酵罐。 噬菌体爆发迹象： 1、PH一直回升，会比较高（我们正常是7.00，回升到7.8）。 2、DO也很快回升，会上升到130%多。 3、发酵液变稀，OD值很快下降。 4、镜检看不到任何菌体。 5、爆发的时间一次比一次提前，都是发酵前期。 噬菌体爆发的速度很快，也就那么30分钟左右，当时我们刚刚移种也就那么 ...

AO / EB原理与流程 zhongyisheng: 1、原理：吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。溴乙锭(E仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者形态迥然相异，很易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(V ...

各位好！我有几个关于PHAGE DISPLAY 问题想请教下你。请问一下Ph.D随机太库和M13 cDNA肽库两者的优缺点?？各在什么情况下选择较佳？还有NOVEGEN 的预制人组织的cDNA文库原理，在什么情况下使用?我打算研究与睾丸组织中相互作用的蛋白，是否用NOVEGEN的预制人睾丸cDNA文库?最后请问这些文库的代理商？噬菌体： M13KE ...

园友们最近有个问题不知道该怎么很好的解决就是要估算T7噬菌体浓度!不知道T7 phage的分子量请您指点一二谢谢! 对于病毒的定量测定，主要有一下几种方法： （1）病毒效价。 最常用的方法，将T7和大肠杆菌悬液以及半固体营养琼脂混合后倒在高琼脂浓度的平板上，培养，然后计数噬菌斑数，计算每毫升噬菌体悬液形成的噬菌斑数（PFU）。 （2）电镜下直接计算病毒颗粒数目。 这当然不是很可行了，不实用。 （3 ...

一、H3-胸腺嘧啶核苷掺入法(H3-TdR) 相关问题总结： (一)原理： 1、H3-TdR掺入法检测淋巴细胞LDL-R的活性：细胞分裂增殖所需的大量胆固醇主要通过内源性胆固醇合成，以及加速细胞膜LDL-R介导的特异性结合，摄取血LDL中的外源性胆固醇而获得，当用mevinolin(胆固醇合成的限速酶HMG-CoA还原酶的抑制剂)阻断细胞内源性胆固醇的合成，并使细胞外环境中LDL浓度降低至无非特异 ...

掌握血清白蛋白和球蛋白测定的原理和方法，并用盐析法测定水产动物血清中白蛋白和球蛋白的含量。 血清中含有多种不同成分的蛋白质，主要为白蛋白和球蛋白。用盐析法沉淀血清中球蛋白，用双缩脲法测定上清液中白蛋白，同时测定血清总蛋白。血清球蛋白的量从两者的差值求得。 试剂： 1、球蛋白沉淀剂：称取硫酸钠（Na2SO4）208g，及亚硫酸钠（N ...

一、MTT比色法检测细胞活性 （一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 （二）试剂准备 1、 青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中， 抽滤除菌。 ...

Trans-Bot SD Assembly 1. Prepare the transfer buffer. 2. Following electrophoresis equilibrate the gels in transfer buffer. Equilibration facilitates the removal of electrophoresis buffer salts ...