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沙门氏菌如何用噬菌体分型

请问伤寒沙门氏菌如何用噬菌体分型,这种噬菌体的试剂到哪购买? 江西省卫生防疫站的何晓青自制了12株沙门氏菌噬菌体分型系;另外中国医学细菌保藏管理中心沙门氏菌分型噬菌体专业实验室也有。你可以跟他们联系一下。 具体做法请参考以下文献: 何晓青等,中华预防医学杂志,199428(3):136另外,河南省卫生防疫站底秀娟建立了一种伤寒沙门氏菌分型的新方法也提供给你,具体见附件.希望对你有帮助! 一种伤寒沙 ...

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DNA LADDER检测细胞凋亡的讨论

例一 gongyulai :我用的是药物诱导癌细胞凋亡,做DNA Ladder(用的是北京鼎国的动物细胞凋亡梯子提取试剂盒)。跑出来的电泳不是一条条带,而是每条很长的拖尾现象,Marker到是出来了。我是按说明书上0。8%的琼脂糖。我用的是60v电压。不知道什么原因?郁闷。说明书上说混合温和是什么意思,我又没用力摇。我还想问收集凋亡细胞时离心时转速多少比较好? chujun_hust : (1) ...

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噬菌体爆发及应对措施

我们做的是大肠杆菌的基因工程菌。前段时间连着三批都感染了噬菌体,每天一批,我们做的是60T发酵罐。 噬菌体爆发迹象: 1、PH一直回升,会比较高(我们正常是7.00,回升到7.8)。 2、DO也很快回升,会上升到130%多。 3、发酵液变稀,OD值很快下降。 4、镜检看不到任何菌体。 5、爆发的时间一次比一次提前,都是发酵前期。 噬菌体爆发的速度很快,也就那么30分钟左右,当时我们刚刚移种也就那么 ...

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吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色

AO / EB原理与流程 zhongyisheng: 1、原理:吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA,使之发出明亮的绿色荧光。溴乙锭(E仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入核DNA,发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强,荧光更为明亮,均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者形态迥然相异,很易判别。在荧光显微镜下观察,可见四种细胞形态:活细胞(V ...

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NEB的M13噬菌体随机肽库和NOVAGE的T7噬菌体肽库的优缺点?

各位好!我有几个关于PHAGE DISPLAY 问题想请教下你。请问一下Ph.D随机太库和M13 cDNA肽库两者的优缺点??各在什么情况下选择较佳?还有NOVEGEN 的预制人组织的cDNA文库原理,在什么情况下使用?我打算研究与睾丸组织中相互作用的蛋白,是否用NOVEGEN的预制人睾丸cDNA文库?最后请问这些文库的代理商?噬菌体: M13KE ...

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估算T7噬菌体浓度方法

园友们最近有个问题不知道该怎么很好的解决就是要估算T7噬菌体浓度!不知道T7 phage的分子量请您指点一二谢谢! 对于病毒的定量测定,主要有一下几种方法: (1)病毒效价。 最常用的方法,将T7和大肠杆菌悬液以及半固体营养琼脂混合后倒在高琼脂浓度的平板上,培养,然后计数噬菌斑数,计算每毫升噬菌体悬液形成的噬菌斑数(PFU)。 (2)电镜下直接计算病毒颗粒数目。 这当然不是很可行了,不实用。 (3 ...

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I125相关问题总结

一、H3-胸腺嘧啶核苷掺入法(H3-TdR) 相关问题总结: (一)原理: 1、H3-TdR掺入法检测淋巴细胞LDL-R的活性:细胞分裂增殖所需的大量胆固醇主要通过内源性胆固醇合成,以及加速细胞膜LDL-R介导的特异性结合,摄取血LDL中的外源性胆固醇而获得,当用mevinolin(胆固醇合成的限速酶HMG-CoA还原酶的抑制剂)阻断细胞内源性胆固醇的合成,并使细胞外环境中LDL浓度降低至无非特异 ...

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血清白蛋白和球蛋白的分析测定-盐析法

掌握血清白蛋白和球蛋白测定的原理和方法,并用盐析法测定水产动物血清中白蛋白和球蛋白的含量。 血清中含有多种不同成分的蛋白质,主要为白蛋白和球蛋白。用盐析法沉淀血清中球蛋白,用双缩脲法测定上清液中白蛋白,同时测定血清总蛋白。血清球蛋白的量从两者的差值求得。 试剂: 1、球蛋白沉淀剂:称取硫酸钠(Na2SO4)208g,及亚硫酸钠(N ...

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表达蛋白的生物学活性的检测

一、MTT比色法检测细胞活性 (一)原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 (二)试剂准备 1、 青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2O中, 抽滤除菌。 ...

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干法蛋白转膜

Trans-Bot SD Assembly 1. Prepare the transfer buffer. 2. Following electrophoresis equilibrate the gels in transfer buffer. Equilibration facilitates the removal of electrophoresis buffer salts ...

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Western Blot of TBP from TBP-GST bacteria

0 128);"Culture bacteria1. Grow glycerol stock A13 (TBP-GST in BL21) in 10mL LB and 10ul ampicillin (1:1000)2. Shake @ 37C ON 0 128);"Induce bacteria3. Adjust culture with LB until ON culture OD is ...

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Anti-P-CREB

1. Treat cells. For PC12 or NIH 3T3 cells a moderately confluent 60 mm plate is used. 2. Aspirate media. Rinse cells with PBS aspirate. 3. Lyse cells in 200 uL of ...

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Protocol for anti-HA antibody Western Blotting

SJF 4/001) Run gel (in 1:10 running/transfer buffer(10x) and H2O for a total of 1litre) at 150 volts until leading bromophenol blue band is nearing the bottom edge of the glass plates or according to ...

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ECL Western

(All steps with agitation unless done O/N at 4oC) Rinse membrane once in TBS-TBlock the membrane with TBS-T/ 5% milk (or HIHS) for 30 min roomtemp (can be left at 4oC O/N here) Rinse membrane briefly ...

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放射免疫对流电泳

(一)原理 将放射性元素标记的抗体(或抗原)与相应的抗原(或抗体)沉淀时沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影再经过显影把“像”显示出来。这样能检出肉眼看不见的沉淀线从而提高反应的敏感性这种方法可应用于凝胶中的所有反应。 (二)材料 1、放射性同位素标记的抗原或抗体 2、X—射线胶 ...

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放射免疫分析平衡饱和加样程序

1、基本原理所谓平衡饱和,是指抗原和抗体反应达到再不结合,也不解离的平衡状态,称为饱和状态,即平衡饱和。所以,有人称此为饱和分析法。这意味着抗原或被测抗原、标记抗原、抗体三者一起温育。 2、加样程序一般先加标准物或被测样品,再加抗血清,最后加标记物。这样的顺序是让标准物或被测物与抗体有短暂的结合,提高抗原的竞争抑制能力。 在小分子半抗原的放射免疫分析中,标记抗原和未标记抗原与抗体结合的亲合力常常是 ...

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放射免疫测定操作的安全措施

工作人员被放射性同位素污染是生物医学实验中最大的危害之一,为了在操作过程中确保安全,有许多严格的规定和要求。虽然在通常实验中所用同位素的量相对地讲是低的,但这些预防措施必须严格遵守。现对从事这一工作的一些原则作一简述,多半是一些普通的常识,但在执行时往往容易忽略而造成严重的后果。 一、放射免疫实验室中的放射性危险 对于没有封闭的放射性物质,主要的危险有下面三种: (1)β-或&gamma ...

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RIA和IRMA的异同点

1、标记物在RIA中核素标记抗原,在IRMA中核素标记抗体。抗原有不同种类,根据其化学结构,标记时需用不同的核素和不同的方法。抗体为蛋白质,有利于碘化标记,不同抗体标记方法基本相同。标记抗体的比活度高,提高了分析的灵敏度。 2、反应速率反应速度与反应物的浓度呈正比,在IRMA中标记抗体是过量的,而且不存在竞争性结合复杂的反应,所以反应速度较RIA快。在RIA中抗体量是微量的,所以一定要用高亲和力的 ...

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放射免疫分析

放射免疫分析是由Yalow和Berson于1960年创建的标记免疫分析技术。由于标记物放射性核素的检测灵敏性,本法的灵敏度高达ng甚至pg水平。测定的准确性良好,ng量的回收率接近100%。本法特别适用于微量蛋白质、激素和多肽的定量测定。 一、基本原理 放射免疫分析的基本原理是标记抗原(Aundefined)和非标记抗原(Ag)对特异性抗体(Ab)的竞争结合反应。它的反应式为:http://www.39kf.c ...

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Probing and Stripping of Western Blot

Steve Hahn last modified Mon Mar 22 1999Western Blot Probing by ECL1. After electroblotting of protein gel to immobilon membrane (See 0 128);"Novex NuPAGE method) mark the side of the membrane not in ...

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