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1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响？ 在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高 ...

SDS-PAGE因易于操作，而具有广泛的用途，是许多研究领域的重要的分析技术。 1. 蛋白质纯度分析； 2. 蛋白质分析量的测定，根据迁移率大小测定蛋白质亚基的分子量； 3. 蛋白质浓度的测定； 4. 蛋白质水解的分析； 5. 免疫沉淀蛋白的鉴定； 6. 免疫印迹的第一步； 7. 蛋白质修饰的鉴定； 8. 分离和浓缩用于产生抗体的抗原； 9. 分离放射性标记的蛋白质； 10. 显示小分子多肽。 ...

聚丙烯酰胺的特性，包括机械性能，弹性，透明度，孔径大小取决于T，C，T是两个单体(单体丙烯酰胺和N-N’-甲叉双丙烯酰胺)的总百分浓度，C是与总浓度有关的交联百分比浓度。 T=(a+b)/m C=b/(a+b) （a为单体丙烯酰胺的克数，b为N-N’-甲叉双丙烯酰胺的克数，m为缓冲液终体积） a，b的比例很关键，如果a:b 小于10，胶脆，硬 如果a ...

1. 带电颗粒的性质 净电荷多少、颗粒大小及形状。一般净电荷多，直径小而且近于球状，则泳动速度快，反之则慢。 2. 电场强度（电位梯度） 指单位长度（cm）支持物体上的电位降，它对泳动度起着十分重要的作用。一般电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。根据电场强度可将电泳分为低压（常压）电泳100—500V，电场强度为2—10V/cm，分离时间需要数小时、数天或更长。高压电泳50 ...

试剂： 1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8)5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。 2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。 3. ...

A.Sensitize a 96-well microtiter plate with purified antigen. Prepare a solution of the purified antigen of interest in phosphate buffer (see recipe below) such that a concentrati ...

A. Formalin Fixed Cell Plates 1. Trypsinize confluent flasks 2. Pool and count cells 3. Centrifuge at 1500 rpm for 10 minutes 4. ...

Materials: 1)TSBuffer:10mMTrispH8.0150mMNaCl 2)TSTBuffer:TSBufferwith0.05%Tween-20 3)Alkalin ...

一、实验目的 1、深入了解ELISA法测定抗体效价的原理。 2、掌握ELISA法测定单克隆抗体效价的方法。 二、实验原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上，形成酶标抗体/酶标抗原，称为酶结合物。该酶结合物的酶在免疫反应后，作用于底物使之呈色 ...

一、材料与试剂 1、副结核分枝杆菌亲和层析抗原 2、草分枝杆菌吸收抗原 3、兔抗牛IgG酶标抗体 4、牛副结核病参考阳性血清 5、牛副结核病参考阴性血清 1～5项均由指定单位供应。 6、器材ELISA板，酶联免疫吸附检测仪、加样器、洗瓶、恒温箱等。 7、试剂及溶液配制同第五节猪瘟ELISA.。 二、操作方法 1、抗原包被以抗原稀释液将副结核亲和层析抗原稀释至50 ...

问：我在脂肪酶侧活方法上遇到很多问题，比如如何测定酸性脂肪酶的活性，发酵液的稀释倍数与酶活力并不成梯度，应该以哪个为最后的测定结果。谢谢各位战友的指教！ 答：我测定的酶活的范围是数千到上万 IU/ml；测的时候用的NaOH溶液的摩尔浓度是 0.05 M 这样的话根据酶活的定义最后的酶活公式就可以折算成IU/ml= undefined△V（样品和空白样的差值）n~A稀释倍数)。 滴定样品和空白样的差值一般控制在 ...

问：有人做过乳中脂肪酶的检测吗？除了传统的滴定法外，还有更好的方法吗？ 答：乳中脂肪酶没有测过，不过微生物脂肪酶可以用pNPP（对硝基苯棕榈酸酯）测吸光度法测活。 答：做过胰脂肪酶，可用同位素或者荧光 ...

一、材料及试剂 1、猪瘟单抗纯化抗原 2、兔抗猪IgG酶标抗体 3、猪瘟阳性血清 4、猪瘟阴性血清 1～4均由指定的生物制品所购买。 5、ELISA反应板 6、包被液 碳酸钠 1.50g 碳酸氢钠 2.93g H2O加至 1 000ml pH值9.6 7、PBS液 氯化钠 8.90g 磷酸二氢钾 0.20g 无水磷酸氢二钠 2.13g 加双馏水 1 000ml 8、PBS－吐温洗涤液 PBS液 1 ...

问：我正在做这个试验，买了从C2-C16的不同的对硝基苯酚底物，但是令我困惑的是，C10以下的底物，很容易在缓冲液中自发水解，这样就干扰酶活测定。而大于C10的底物又都很难溶解。很是困惑！请问各位做过这项试验的大虾给予我一定的帮助，不甚感激！ 答：30毫克的对棕榈酸硝基苯酯（p-NPP）可以溶于10毫升的异丙醇中，稍微水浴加热就可以完全溶解。我是以（p-NPP）为底物，溶液A：30毫克的对棕榈酸硝 ...

问：向大家请教脂肪酶活力的测定方法、仪器、试剂。多谢指教！ 答：这是我从一篇文献中找到的。用酸价作指标， 用95%乙醇作终止剂， 通过酸价的测定反映脂肪酶分解脂肪的程度， 从而求得酶活力。 方法： 1、粗酶液的制备 用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g， 用蒸馏水溶解并定容至100 mL， 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。 2、实 ...

简介：克伦特罗（Clenbuterol）属于beta兴奋剂，是一种高选择性的兴奋剂和激素，具有水解脂肪、合成代谢和对非条纹肌肉组织的松弛作用。进年来被一些人非法添加到饲料中以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物的生长。当用作生长调节剂时，其添加量是治疗量的5—10倍，常在动物体内残留而给消费者带来危害。 通常，HPLC或GC-MS是克伦特罗残留检测的确证方法，但是其前处理步骤费用昂贵，而 ...

每当心情不好的时候细胞总是长不好，原来凡是有生命的东西都是要用心对待的。 对它随意的吹打，心不在焉的换液，不准确控制时间的消化，不经意的摆放，它都能感受到并反映到细胞的性态上。一直抱怨细胞不好，而没仔细想自己是以怎样的心情在对待它，上清里的悬浮物就是自己杂念的反映，细胞变得松散，没有透光性，甚至污染都是由自己的不用心造成的。 那些死去的细胞的残骸浮散在整个细胞瓶里，尚存的在死亡边缘挣扎的细胞不断垂 ...

1、如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 ...

1.培养板(如96孔等)细胞实验的缺氧装置: :塑料泡沫盒 1 个;橡胶导管两个;玻璃胶; :如图; :进气孔应该在里下位出气孔应在上外位(因为通的气体密度较大);导管 与泡沫盒连接处用玻璃胶封好. :将培养板放入盒子后盖上盖子用纸胶封好然后往里通气(CO2和N2的混合气)10分接着用止血钳把两个导管夹住密封.最后可以把整个盒子放入37度孵箱内. 2.细胞瓶内细胞实验的缺氧装置: :医用输液器; ...

当需要较高的收率时，尤其当研究的样品对象在微克范围时，建议应考虑以下几点： 1.根据样品处理量，选择最小可用的超滤容器，在小容器中反复添加样品，反复超滤。 2.在适量范围内，选截留分子量最低的超滤膜。 3.如可能，使用水平转头代替角转头离心，这样可减少在离心过程中溶液与离心管接触的表面积。 4.将压力或离心力降低到大约最大推荐数值的一半。 5.避免过度浓缩，最终体积越小，越难得到完全回收，如可能， ...