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问：我的一些菌株产蛋白酶，但是想具体分析就必须要高量纯化，这是个问题？如何提高产量？还有有人问我，既然每个菌株都会产生一系列的蛋白酶，那么什么样的才是可以达到商业利用价值的，难道随便一株菌只要分离纯化出蛋白酶就ok了吗？（比较simple的idea）谢谢各位！ 答：有多种因素影响菌株蛋白酶的产量，包括： 1、不同碳源对产酶的影响以及不同氮源对产酶的影响 2、碳氮比对菌株的生长和产酶有直接关系：例 ...

问：要抑制蛋白酶对细胞外基质的酶解作用，我想请教一下，在PH7-8之间蛋白酶的活性能够被明显的抑制嘛？因为PMSF毒性太大，还有没有别的抑制蛋白酶活性的试剂阿？EDTA能够抑制金属蛋白酶嘛？是不是跟EDTA螯合了Mg，Ca有关？ 答：许多细胞蛋白酶只有在溶酶体的偏酸性环境中才具有最大的活性，将pH调制中性将有助于使蛋白酶的活性降至最低，但是仍然不能完全消除它的影响，目前最常用的方法是通过加入蛋白酶 ...

问：我现在正在做神经细胞的培养，听说木瓜蛋白酶的消化作用比较好，购买后发现，不是简单的用三蒸水配制，有哪位高手能告之一二，万分感谢！ 答：我也用的sigma的木瓜酶，用hepes缓冲液很好溶的，一直没发现溶解度低的问题。 其实关于酶的选择，也不能简单的看消化作用如何，还要考虑到实验设计，比如说胰酶的消化效果总体尚可，特点是消化出的细胞电生理状态稳定，膜状态较好，但是胰酶对某些蛋白损伤很大，比如N ...

问：【求助】蛋白酶活性的测定方法：要对菌株进行蛋白酶的活性测定，不需要提纯，有什么合适的方法？同时介绍一下进行测定时以酪蛋白为底物的发酵培养基怎么配置？因为酪蛋白很难溶解。 答：你要一边加热一边调PH，碱性下酪蛋白会融解。用氨水或稀的氢氧化钠溶液调节，溶解很简单的。 答：蛋白酶的测定基本上都是经典的方法了，就是以酪氨酸做标准曲线的那个方法了。这是我测定蛋白酶的方法，先用酪氨酸作标准曲线。 &nbs ...

问：我用pH7.0 5mMTris-HCl缓冲液，含5mMCaCl2、0.02％叠氮化纳、0.5MNaCl，在4℃条件下提取黄鳝胰蛋白酶。具体方法是先将内脏打碎，离心，再用BAEE作底物在25℃，247nm处测胰蛋白酶活性，总是无功尔返。 不知道胰蛋白酶跑哪里去了，是酶失活还是自溶了，甚至是根本就没有分泌胰蛋白酶，怎样进一步保持酶的活性，恳请各位多多指教！本人不胜感激！ 答：原因分析如下： 1、 ...

问：我们知道明胶酶谱法可用来测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性，但不知其他的基质金属蛋白酶活性的测定，比如我要测MMP-1、MMP-3的活性，是否也可用此法测定呢？急切盼复！ 答：首先应该弄清楚这些基质金属蛋白酶都属于哪一类型，才能考虑下面的问题。 你所提到的四种基质金属蛋白酶：MMP-1属胶原酶（Collagenases）MMP-2和MMP-9明胶酶（Gelatinases）MMP-3 ...

光电直读是利用光电法直接获得光谱线的强度。可分为两种类型：①.单道扫描式：单道扫描式是通过单出射狭缝在光谱仪焦面上的移动（或转动光栅），在不同时间接收不同元素的分析线（间歇式测量）；②.多道固定狭缝式：多道固定狭缝式则是安装多个狭缝和光电倍增管（多达70个；一个出射狭缝和一个光电倍增管，可接受一条谱线，构成一个测量通道），同时测定多个元素的谱线。 现在多用多道光电直读光谱仪。 　　 一 ...

光谱分析仪器是进行光谱分析的仪器设备，主要由光源、分光系（光谱仪）及观测系统三部分组成。 一、光源 光源的作用：首先，把试样中的组分蒸发离解为气态原子，然后使这些气态原子激发，使之产生特征光谱。因此光源的主要作用是提供试样蒸发、原子化和激发所需的能量。 常用光源类型：目前常用的光源有直流电弧、交流电弧、电火花及电感耦合高频等离子体（ICP）。 1．直流电弧 ...

多功能光栅光谱仪（单色仪）是一个光谱分析研究的通用设备。可以研究诸如氢氘光谱，钠光谱等元素光谱（使用元素灯作为光源），也可以作为更为复杂的光谱仪器的后端分析设备，比如激光拉曼/荧光光谱仪。 多功能光栅光谱仪（单色仪）的结构包括： 光源光栅及反射镜准光镜和物镜入射出射狭缝旋钮接收设备（光电倍增管/CCD）计算机及软件系统 光栅由步进电机驱动，由计算机软件驱动，可以获得较高的精度。　　反射镜1将由入射 ...

火焰光度计包括：气体和火焰燃烧部分、光学部分、光电转换器及检测记录部分。 光学部分包括：透镜、单色器、光圈和快门，透镜使火焰中被测元素的谱线更集中的照射到单色器及光电转换器件上，以提高测定的灵敏度。单色器如果采用的是石英棱镜和狭缝选择谱线就称为火焰分光光度计，如果是采用滤光片，就称为火焰光度计，适合测定K、Na离子浓度。火焰光度计有时也称为火焰光谱仪，火焰光度计。利用滤光片作为分光元 ...

火焰光度计是利用原子发射原理，把相应的物质原子化（固体配成溶液，如：用酸溶解；液体高温；气体用在放电情况下激发），激发的电子处于高能级，不稳定会跃迁回基态，不同的原子，电子能级不同，跃迁回时会发出不同波长的光波，通过分析光波就知道是什么原子了。同理也可以分析光波的强度，判断该原子的含量。 如：FPT-640火焰光度（一般出厂配的是钾钠检测器）用于分析血液中的钾钠，也用于硅酸工业的分析。 紫外-可见 ...

光是横电磁波，是一种在各个方向上振动的射线。其电场矢量E与磁场矢量H相互垂直，且与光波传播方向垂直。由于产生感光作用的主要是电场矢量，一般就将电场矢量作为光波的振动矢量。光波电场矢量与传播方向所组成的平面称为光波的振动面。若此振动面不随时间变化，这束光就称为平面偏振光，其振动面即称为偏振面。平面偏振光可分解为振幅、频率相同，旋转方向相反的两圆偏振光。其中电矢量以顺时针方向旋转的称为右旋圆偏振光，其 ...

穆斯堡尔谱仪是用于测定物质γ射线无反冲共振吸收效应的仪器。其基本原理是：由放射源（γ光源）射出的γ光子被样品中存在的穆斯堡尔核（如57Fe，119Sn）所吸收，形成共振吸收谱，样品中穆斯堡尔核与核外化学环境的相互作用会引起共振吸收谱线的位置、形状、数目的变化。反过来利用所测穆谱的这些变化推出穆核周围化学环境的信息。穆斯堡尔谱仪主要由放射源，振动子探测器计算机化的 ...

穆斯堡尔效应（Mössbauer effect），即原子核辐射的无反冲共振吸收。这个效应首先是由德国物理学家穆斯堡尔（Rudolf Ludwig Mößbauer，1929-）于1958年首次在实验中实现的，因此被命名为穆斯堡尔效应。应用穆斯堡尔效应可以研究原子核与周围环境的超精细相互作用，是一种非常精确的测量手段，其能量分辨率可高达10-13，并且抗干扰能力强、实 ...

电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术 ...

一、目的 1、了解聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 2、了解聚丙烯酰胺凝胶的制作过程 3、了解过氧化物酶同工酶电泳过程 二、实验原理： 1、电泳原理及影响电泳的主要因素 带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动，这种现象称为电泳。用电泳技术分离、分析蛋白质、酶、核酸等生物大分子，有较高的分辨率，目前已成为生物科学研究中必不可少的手段之一。带电离子在电场中的泳动速度（1）和迁移率（泳动度）（2） ...

一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。　　2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3～4小时）。　　3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃。　　4、提取上清夜，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml　　1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml　　2、 ...

一、实验目的 了解等电聚焦的原理。通过蛋白质等电点的测定，掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管式等电聚焦电泳技术。 二、实验原理 等电聚焦（Isoelectric focusing，简称IEF）是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展，已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点（pI）只差0.001pH单位的生物分子。由于其分辨力高，重复性好，样品容量大，操作 ...

gzgygy Microtubule Disruption and Tumor Suppression by Mitogen-Activated Protein Kinase Phosphatase 4，是2007年11月15号发表在Cancer Research上的一篇研究论文。我们的研究生在阅读过程中看到了其中的疑问，过来求证。经过讨论，我们认为这篇文章包含了严重的实验失误，于是先和文章的通讯 ...

（一）实验前应明确的问题 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不 ...