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1、冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2、细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应 ...

一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1、细胞：贴壁细胞株 2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清） 3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、 ...

细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后，一般都较难排除或杀灭，其中以支原体更难排除，因此从预防着眼为上。 1、抗生素除菌法： 用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体 （1）抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6－2。 （2）处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养 ...

1、二倍体细胞培养法 二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为： （1）吸除旧培养液注入另瓶中。 （2）用温BSS冲洗1次。 （3）用0.25%温胰蛋白酶消化，加入消化液量以仅覆盖细胞层即可；作用1~5分钟。 （4）待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化。为防止细胞丢失，可不必再用BSS冲洗，直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1新旧混合）。 （5）轻轻反复吹打制 ...

1、初代消化培养法 （1）准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 （2）布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 （3）处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 （4）剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~5 ...

问：大鼠卵巢颗粒细胞的分离方法？ 答：大鼠颗粒细胞的分离方法一：分离23天的SD大鼠，皮下注射DES（2.5 mg/只），连续三天。于最后一次注射24h后，颈椎脱臼处死动物。无菌收集两侧的卵巢，置于盛有PBS的EP管中清洗。将PBS清洗的卵巢放在盛有培养基的平皿中，在体视显微镜下，用25号针头刺破卵泡，释放出颗粒细胞。后吸取平皿中的细胞悬液，镜下计数，接种细胞。培养基（McCoy's 5A Med ...

Sample Buffers: Dehydrating Solution 30% Methanol-2.5% glycerol Linear Acrylamide make up a 3% solution in distilled water (stir overnight). Use 1.2 ml/12 mls gradient ...

一、目的 同工酶是指能催化同一种化学反应， 但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组 酶。它们是 DNA编码的遗传信息表达的结果。最近的研究表明，同工酶与生物的遗传、生 长发、代谢调节及抗性等都有一定的关系。因此，测定同工酶在理论上和实践上都有重要的 意义。用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定同工酶，方法简便、灵敏度高，重现性强，测定结果便于 观察、记录和保存。 过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高 ...

Antibiotic Stock Solutions Ampicillin Beta-lactam-antibiotics are not very stable when dissolved. Slow but steady degradation happens even when frozen to -20℃. Therefore commercial beta-lactam-antibio ...

This is a method for the separation and identification of proteins in a sample by displacement in 2 dimensions oriented at right angles to one another. This allows the sample to separate over a lar ...

(The following protocol is for use with the LIBRARY transformation only) Day 1: Grow an overnight culture of a single colony of yeast transformed with bait vector in 2.5 ml of SD-Trp medium Day 2 1.Th ...

Immobilization of ligands on cuvette surfaces and measure the interactions of ligand which is immobilized on the cuvette and the ligate which is added to the immobilized cuvette. Immobilization of lig ...

This section describes how to amplify a library with minimal danger of substantially reducing its diversity.Amplification is accomplished by infecting fresh cells with a portion of the librarygrowing ...

Comments: T antigen (131-259)is an MBP-Hisx6-fusion protein constructed by Laura Mizoue (refer to the wisdom page for details on the construct). i.Pick a single colony from freshly transformed cells ( ...

Adapted from W.C.CopelandProtein Exp.& Purif 9(1997)1-9 and Schneideret.al.JBC 273:34 (1998)21608-21615. Obtained from Fanning lab and revised by LSM7/23/01 Obtained cell stock of BL21(DE3)cells c ...

Comments: pSV281 RPA70AB Constructed by L.Mizoue; May '02.This plasmid encodes RPA 70 subunit residues 181-422 as a fusion protein with an NT 6His tag.The tag can be cleaved off with TEV protease (rec ...

J.MoviusKCoachmanand S.Hahn (Hahn Lab) last modified 10/9/00 Induction of BRF in bacteria and purification on Ni-NTA agarose Transform BRF plasmid into strain BL21 DE3 (pLysS)or JM25 (DE3 containing t ...

Materials Expression plasmid (e.g.pET/Ncd in BL21(DE3)pLysS host cells) ZB = 10 g NZ-Amine A 5 g NaCl 860 ml final volume 10X M9 Salts = 1 g NH4Cl 3 g KH2PO4 6 g Na2HPO4 100 ml final volume M9ZB = 86 ...

George P.Smith Division of Biological Sciences Tucker Hall (573)882-3344 Introduction to B-PER B-PER from Pierce Chemical Co.is a Tris-buffered detergent formulation that lyses bacterial cells without ...

一、血清灭活问题。 1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？ 答：不是必须的，看做什么实验了。 2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？ 回答a：血清都是灭活是56℃30min。每次我都是这样灭活的。 回答b：应该是分血清的吧，若已灭活，就不用灭活了，未灭活，最好还是要灭活的。 回答c：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养 ...