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一、原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 二、仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：胎鼠或新生鼠 试剂：1640培养基（含20 ...

由于现在国内的细胞库资料不是很充足，而且比较零散，包括建株时的技术层面不一，没有比较严格统一的操作规范，所以在遇到比较重要的实验项目时，一般都比较倾向于购买国外的细胞株，但购买国外细胞株需要考虑的因素有如下几点： 1、细胞株的生物等级，由于有些细胞株及菌株属于管制品，所以从国外购货比较麻烦。 2、在购买国外细胞株时，需交待国外加比较多的干冰（一般在13公斤以上，采用比较密封的泡沫盒加套纸箱。 3、 ...

一、细胞冷冻保存 1、材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene　5000-0020)、0.4％（w/v）trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII) 2、冷冻保存方法： （1）传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟---& ...

丝氨酸蛋白酶是一个蛋白酶家族，它们的作用是断裂大分子蛋白质中的肽键，使之成为小分子蛋白质。其激活是通过活性中心一组氨基酸残基变化实现的，它们之中一定有一个是丝氨酸（其名字的由来）。在哺乳类动物里面，丝氨酸蛋白酶扮演着很重要的角色，特别是在消化，凝血和补体系统方面。 弹性蛋白酶为水解酶类的一种，对丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸等含羧基的多肽键起催化水解的作用，因曾认为此酶主要作用于弹性蛋 ...

丁香园网友dwp123的问题为： 我实验室有广州光学仪器厂生产的倒置显微镜一台和数码相机一台，想给细胞拍照，有人说直接从目镜中拍摄，有资料说需要一转换接口，有没有哪位院友有这方面的经验，可否介绍介绍，能不能提供转换接口的型号及其厂家 丁香园网友swan119的观点为： 根据以下步骤你就可以 1、确定你数码相机的品牌和型号 2、确定你显微镜的品牌和型号 3、准确搞清楚数码相机镜头直径以及是否可以加装 ...

问：请教一个实验问题，PMSF，胃酶抑制剂以及DTT会不会影响HRP活性？要做ELISA，样品中不知道可不可以加复合蛋白酶抑制剂？请大牛指教！ 答：不会影响酶活性，因为蛋白酶抑制剂，抑制的是蛋白水解酶活性。而HRP不是蛋白酶类，而是过氧化酶。（不过dtt肯定会破坏HRP）。即使会影响酶活性，实际上做elisa也不影响，因为加样品和加hrp是分开的，不存在。 答：我在研究各种抑制剂对L－ ...

请问：有人知道蛋白酶产生菌的相关文献在哪里可以查阅的到？谢谢帮忙！ 答：用GOOGLE的学术搜索试试，可以找到一些文献，如这篇文章： 题目：弹性蛋白酶产生菌的筛选及其发酵条件的初步研究 下载地址：http://www.journals.zju.edu.cn/agr/2003/200301/030114.pdf 还有很多，到这里看看：按以下方法操作即可！http://scholar.google.c ...

1、细胞（组织）培养年鉴 1878 Claude Bernard:证明一个器官的生理系统在个体死亡以后仍然可以人工维持。 1885 Wilhelm Roux:在一个生理溶液中维持一快鸡胚的活性并观察其发育，从而证实该发育与鸡胚的其他部分无关。 1887 Ross Harrison:利用凝固的青蛙淋巴液作为培养基，在体外培养青蛙神经嵴，维持其活性达数星期，并观察到了神经纤维的生长，从解决了神经纤维的 ...

问：简并引物的简并度并没有超过512，但是PCR时总是不能得到特异的带，只是在预定的位置出现一片弥散的带。后来提高模板浓度，并将退火温度从 50℃ 提高至65℃，做单引物对照即只加一条引物时能扩增出特异的带，而正常PCR却什么也扩增不出来，偶尔能扩增出一些片断也跟单引物对照的是一样的。并且重复性不好，有时能扩增出来有时什么都没有。确定模板没有问题，因为16S能扩增出来。请各位支招，感激不尽！ 答： ...

请问：测定微生物的脂肪酶活力时，油脂培养基中的花生油可以用豆油代替吗？ 答：首先应该分析花生油盒大豆油的主要成分，脂肪酶活力测定一般都用油酸作为底物。天然油脂中，分布最广的二烯酸是碳原子数为18的亚油酸（顺9，顺12-二烯十八酸），在所有植物油中几乎都含有亚油酸，棉子油、大豆油的主要成分是亚油酸。亚油酸为含有两个双键的不饱和脂肪酸。花生油中油酸的含量也在60％～80％之间，所以两者基本可以换用。 ...

孕酮的放射免疫测定法很敏感，但由于孕酮是半抗原，须先同牛血清白蛋白结合，才能注射于家兔，使之产生抗体。牛血清白蛋白结合在孕酮上的不完全部位对抗血清的特异性有很大关系，若结合在C3抗血清无特异性，结合在C6则特异性高，结合在Cll特异性更好。孕酮试剂盒已广泛应用于临床，介绍如下。 一、基本原理 此法采用双抗体放射免疫法 Ag※+Ab+Abl一(Ag※Abl)+(AgAbI)+Ag※ 含孕 ...

问：请教大家一个问题，还请大家指教，我在用pNP(对硝基苯酚酯类)类物质测定脂肪酶活性时，用到一个摩尔消光系数，请问这个摩尔消光系数在不同的温度，不同的缓冲液，或者不同pH情况下能否通用？谢谢，请指教。 答：摩尔消光系数是由给定物质的特性决定的。实际上，被测定物质的摩尔消光系数也会在外界条件影响下发生变化，比如溶液的pH 值、反应的温度等等，同时也有和使用的仪器有关；所以说如果你要用到某一个摩尔消 ...

问：有人做过乳中脂肪酶的检测吗？除了传统的滴定法外，还有更好的方法吗？ 答：乳中脂肪酶没有测过，不过微生物脂肪酶可以用pNPP（对硝基苯棕榈酸酯）测吸光度法测活。 ...

肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）是一类能直接导致某些肿瘤细胞坏死的细胞因子，有TNF-α与TNF-β两种类型。 TNF-α主要来源于活化的单核/巨噬细胞，TNF-β主要来源于活化的T淋巴细胞。虽然两型TNF的细胞来源不同，结构也不同，但均能与不同的受体结合，故具有极其相似的生物学活性。TNF可进入体液成为分泌型（或可溶性 ...

问：我是做脂肪酶克隆表达的。现在已经将目的基因整合到毕赤酵母GS115中，可是几番诱导下来，就是没有酶活。现在小弟想请教各位战友几个脂肪酶活性检测的问题，怕是表达出来，因为检测方法有误。 1、诱导培养基BMMY的磷酸缓冲液浓度为100mmol/L，请问这个浓度是不是太高？如果脂肪酶表达量很低的话，测定过程中产生的游离脂肪酸也很少。如果活性测定的磷酸缓冲液浓度太高的话，会不会影响测定结果，也就是说将 ...

问：脂肪酶的测定方法有哪些？我的脂肪酶可能活性会很低，我要较灵敏的测定方法。 答：NaOH滴定法、酶标法、分光光度计法等等，有很多，国内相关的论文也有很多。 ...

问：我将脂肪酶固定在大孔吸附树脂D3520并干燥后，想测脂肪酶的酶活。可是树脂干燥后，再放入脂肪酶的反应体系后，树脂颗粒都漂在上面而不混合。请问这种情况下该如何测酶活？（氢氧化钠滴定法测酶活） 另外，即使我测酶活完毕，该怎样将树脂回收呢？直接将反应液过滤，酒精洗涤？请各位战友指教，谢谢！！ 答：我没有做过固定化，是不是你把大孔树脂干燥的过头了呢？你如何控制的条件啊？你可以用三丁酸甘油酯的平板粗略 ...

一、原理 HCG是放射性同位素标记技术与抗原抗体免疫反应相结合的超微量分析法，是用放射性核素（如125I／3H）标记的极微量的示踪抗原（Aundefined）／抗体（Aundefined）与待测抗原Ag／抗体Ag）一起来竞争结合有限的特异性抗体（Ab）／抗原（Ag），故称饱和分析或竞争抑制法，其反应过程为：Aundefined•Ab量固定，．Aundefined+Ag>Ab可结合的数目（抗原过量），Aundefined与Ag竞争结合Ab，直到反应 ...

一、目的要求1.学习电泳原理和技术2.学习和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质技术二、原理聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂NN-甲叉双丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，简称Bis)在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(N，N，N，N—tetramethy ...

等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点 ...