火焰光度计是利用原子发射原理,把相应的物质原子化(固体配成溶液,如:用酸溶解;液体高温;气体用在放电情况下激发),激发的电子处于高能级,不稳定会跃迁回基态,不同的原子,电子能级不同,跃迁回时会发出不同波长的光波,通过分析光波就知道是什么原子了。同理也可以分析光波的强度,判断该原子的含量。 如:FPT-640火焰光度(一般出厂配的是钾钠检测器)用于分析血液中的钾钠,也用于硅酸工业的分析。 紫外-可见 ...
光是横电磁波,是一种在各个方向上振动的射线。其电场矢量E与磁场矢量H相互垂直,且与光波传播方向垂直。由于产生感光作用的主要是电场矢量,一般就将电场矢量作为光波的振动矢量。光波电场矢量与传播方向所组成的平面称为光波的振动面。若此振动面不随时间变化,这束光就称为平面偏振光,其振动面即称为偏振面。平面偏振光可分解为振幅、频率相同,旋转方向相反的两圆偏振光。其中电矢量以顺时针方向旋转的称为右旋圆偏振光,其 ...
穆斯堡尔谱仪是用于测定物质γ射线无反冲共振吸收效应的仪器。其基本原理是:由放射源(γ光源)射出的γ光子被样品中存在的穆斯堡尔核(如57Fe,119Sn)所吸收,形成共振吸收谱,样品中穆斯堡尔核与核外化学环境的相互作用会引起共振吸收谱线的位置、形状、数目的变化。反过来利用所测穆谱的这些变化推出穆核周围化学环境的信息。穆斯堡尔谱仪主要由放射源,振动子探测器计算机化的 ...
穆斯堡尔效应(Mössbauer effect),即原子核辐射的无反冲共振吸收。这个效应首先是由德国物理学家穆斯堡尔(Rudolf Ludwig Mößbauer,1929-)于1958年首次在实验中实现的,因此被命名为穆斯堡尔效应。应用穆斯堡尔效应可以研究原子核与周围环境的超精细相互作用,是一种非常精确的测量手段,其能量分辨率可高达10-13,并且抗干扰能力强、实 ...
电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术 ...
一、目的 1、了解聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 2、了解聚丙烯酰胺凝胶的制作过程 3、了解过氧化物酶同工酶电泳过程 二、实验原理: 1、电泳原理及影响电泳的主要因素 带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动,这种现象称为电泳。用电泳技术分离、分析蛋白质、酶、核酸等生物大分子,有较高的分辨率,目前已成为生物科学研究中必不可少的手段之一。带电离子在电场中的泳动速度(1)和迁移率(泳动度)(2) ...
一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3~4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃。 4、提取上清夜,样品制备完成。 蛋白质提取液:300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、 ...
一、实验目的 了解等电聚焦的原理。通过蛋白质等电点的测定,掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管式等电聚焦电泳技术。 二、实验原理 等电聚焦(Isoelectric focusing,简称IEF)是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展,已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点(pI)只差0.001pH单位的生物分子。由于其分辨力高,重复性好,样品容量大,操作 ...
gzgygy Microtubule Disruption and Tumor Suppression by Mitogen-Activated Protein Kinase Phosphatase 4,是2007年11月15号发表在Cancer Research上的一篇研究论文。我们的研究生在阅读过程中看到了其中的疑问,过来求证。经过讨论,我们认为这篇文章包含了严重的实验失误,于是先和文章的通讯 ...
(一)实验前应明确的问题 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样,才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低,太少观察不 ...
Protocol for the Primary Culture of Cortical and Hippocampal neurons Solutions and media required: Poly D-lysine/laminin solution - pdf DM/KY - pdf Optimem - pdf Neuronal growth medium - pdf Set- ...
1、细胞株的培养和传代 培养: 用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10%小牛血清和抗生素的培养液中,培养细胞因子依赖细胞株还有加入适量细胞因子。在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养,3~4天传代一次。 悬浮生长细胞的传代: 直接直接吸去或离心后吸去培养上清液,用新鲜培养液悬浮细胞,1:3或1:5稀释细胞后,分瓶继续培养。 帖壁生长细胞的传代: 吸去培养液,用PBS洗涤细胞一次,加 ...
1、如果靶细胞是帖壁细胞,在细胞因子作用适当时间后,用生理盐水洗去死亡细胞,用0.25%胰蛋白酶液消化细胞。加适量生理盐水吹打,使细胞分散成单个细胞。直接在血细胞计数板上计数细胞。 2、如果靶细胞是悬浮细胞,则需要用染色剂区分死细胞和活细胞然后再计数。通常用台盼蓝染色细胞,活细胞可以排除进入细胞的台盼蓝而不着染,死细胞着染呈深蓝色。 3、计数血细胞计数板上4个大方格中的全部活细胞,按下式计算活细胞 ...
概述及注意事项: 细胞学检查包括有细胞的涂片与染色技术,其来源先于组织切片技术,目前是较为常用的病理检查方法之一。它所运用的范围也很广泛,如女性生殖系统、食管、胃、肺、浆膜腔积液、泌尿管道、鼻咽部等部位的脱落癌细胞,以及胸、腹腔的肿块、淋巴结、乳腺、和其它组织器官的细胞学诊断。 标本采集注意事项:: 1、要在较为准确病变的部位采集病变标本。 2、标本应及时处理,固定。以防止细胞自溶**。 3、 ...
促细胞分裂剂激活单核细胞 基本原理 : 本方法是通过促细胞分裂剂与细胞表面受体相互作用,在体外触发细胞的多克隆激活。根据所使用的促细胞分裂剂的不同,应答细胞可以是T淋巴细胞、B淋巴细胞,或两者同时,或者是单核细胞。 细胞激活可以通过细胞增殖、细胞因子分泌、表面抗原表达和/或细胞体积的增加进行检测。例如在使用B细胞激活剂时,可以通过多克隆免疫球蛋白的分泌进行检测。 表1 常用的促细胞分裂剂和多克隆淋 ...
1、冷冻管应如何解冻? 取出冷冻管后, 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。 2、细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO? 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在解冻之后, 应 ...
一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1、细胞:贴壁细胞株 2、试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清) 3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、 ...
细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后,一般都较难排除或杀灭,其中以支原体更难排除,因此从预防着眼为上。 1、抗生素除菌法: 用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四环素衍生物)抑制支原体 (1)抗生素制备:均可用PBS配成250×浓缩液-20℃备用,使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6-2。 (2)处理:取受支原体污染的细胞,吸除培养液,加入含BM-1的1640培养液培养 ...
1、二倍体细胞培养法 二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为: (1)吸除旧培养液注入另瓶中。 (2)用温BSS冲洗1次。 (3)用0.25%温胰蛋白酶消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。 (4)待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1新旧混合)。 (5)轻轻反复吹打制 ...
1、初代消化培养法 (1)准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 (2)布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。 (3)处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 (4)剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~5 ...