The success of DNA purification can have profound consequences on the success or failure of any injection effort. This summary of techniques from several different sources was compiled by Brad Preston ...
问：想知道肝素如何影响a-l-岩藻糖苷酶的测定，原理是什么，哪位专家可否告知？ 答：常用抗凝剂中肝素对反应有正基质效应，分析原因可能为肝素系多聚阴离子，表面带有大量的负电荷；在弱酸性条件下（pH=4.8，AFU酶催化最适pH），反应体系中蛋白质、脂蛋白等多带正电荷，易与肝素作用形成不溶性复合物。枸橼酸盐对该反应有负基质效应，可能与其和PNP/CPNP类底物有反应，具体原因尚需进一步的证实，终点法类 ...
We have found the UltraClean™ GelSpin™ Kit (available from Mo Bio Laboratories Catalog number 12400-250) is a simple and fast way to obtain microinjection quality DNA. This is not to exclu ...
问：有人提到一种酶缓冲液提供酶反应条件，酶蛋白即催化底物明胶，不知道是怎么回事情。我要测定活性和分泌。我知道是要使用聚丙烯酰胺凝胶电泳的，请教具体的实验方法很所需要的试剂。谢谢！ 答：Type IV collagenase 72-kD is officially designated matrix metalloproteinase-2 (MMP2). It is also known as g ...
1. Purify plasmid from bacteria. We recommend the Qiagen EndoFree Plasmid Maxi kit for the purification of the targeting vector plasmid from bacteria. Please follow the directions in the kit. Electro ...
Buffer composition is 10 mM Tris-HCl pH 7.5 0.1 mM EDTA 30 microM spermine 70 microM spermidine 100 mM NaCl. This buffer is more likely to produce transgenic mice with intact unfragmented DNA molecule ...
问：检验科常用的碱性磷酸酶测定方法的精确度是多少？ 答：精密度常以变异系数CV表示，包括批内和批间两种。国内有报道碱性磷酸酶的批内CV%为2.06--2.36%，批间为2.74%。江苏推荐的碱性磷酸酶RCV为7.5%。另外值得注意的是：血清置于室温或冰箱贮存，碱性磷酸酶活性会慢慢增高。 问：血清置于室温或冰箱贮存，碱性磷酸酶活性会慢慢增高？为什么啊，应该是酶会降解导致活性下降啊？ 答：&ldquo ...
问：求3-磷酸甘油醛脱氢酶测定方法及材料，感谢！ 答：楼上说的就是GAPDH，主要用来做内参的，我现在就是用这个 做内参，你可以上网找这方面的信息，就是在结合二抗的时候按照一定的比例加到二抗里面，一起结合，效果很好。 ...
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问：哪位大侠做过测定土壤脱氢酶活性的实验，请指点迷津啊，先谢谢了。我在做标准曲线时，加入萃取剂（甲醇或丙酮）后，各管的上部出现沉淀，红色溶液位于管的下部，上下颠倒摇匀后各管都变混浊。放置一段时间后各管都变澄清，但均为无色，如果不上下颠倒而只是振荡最终也会都变成为色的澄清溶液，这是为什么啊？ 1 标准曲线的制作 1.1配制不同浓度的TTC液：从1mg/mlTTC溶液分别吸取1，2，3，4，5，6，7 ...
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问：试验做5脂氧酶的体外酶活试验，用于对药物的筛选，但是测定方法如果采用试剂盒的话，价格很贵，请教各位有谁做过比较方便的测定方法，希望大家给予帮助，谢谢！ 答：酶活的测定：0.2ｍＬ酶液移入20℃，0.8ｍＬ底物（底物配制：0.25ｍＬ吐温20分散于10ｍＬｐＨ9.0的0.2Ｍ硼酸盐缓冲液中，摇动下逐滴加入0.27ｍＬ的亚油酸，充分混匀使亚油酸的微细状体分散于液体中，加入1Ｎ氢氧化钠1.0ｍＬ摇 ...
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问：有关测定醛糖还原酶活性时的反应体系有以下几个疑问： 1、67mmol/l钠钾磷酸盐缓冲液如何配置？也有人 用50mmol/l的磷酸钾缓冲液二者哪一种更好。 2、整个反映体系配置须注意哪些问题？最后加DL-甘油醛还是NADPH。 3、NADPH标准曲线绘制分别用多大浓度？请各位指教，谢谢。 答：在测定酶的活性时，有时由于酶的纯化不足，导致影响结果，在检测醛糖还原酶活性时要注意以下几点： （一） ...
问：请教各位高手：晶状体醛糖还原酶测定方法的具体步骤！谢谢！ 答：不知你要用那种方法测定？一般常用以下两种你可以作参考：配反应体系时注意要临用前加DL－甘油醛和NADPH。作NADPH标准曲线时NADPH至少要梯度稀释5个浓度。 如果不够详细你可以问问作者，山东潍坊医院内分泌科刘长山教授。 荧光法：血样1mI，加肝素抗凝管，1500g离心10分钟，红细胞用10倍体积的等渗盐水冲洗三次，加4倍体积 ...
问：各位大哥大姐好！小弟想测定一下本人分离出的拮抗菌是否为分泌出的几丁质在起作用！想采用在含有胶体几丁质的平板产生透明圈初步测定方法，但在实验准备过程中，碰到了些困难！首先，几丁质不知道哪里有卖的，打了好多家试剂公司，都没有；其次，胶体几丁质配制的方法，国内参考文献描述的有好多，我不确定哪中方法适用，能有结果！恳请园子里做过这方面实验的大哥大姐能帮我解决上述两个问题！ 答：这里面有胶体几丁质的配置 ...
问：很多生物防治用的真菌可以产生几丁质酶和蛋白酶等代谢产物，现在实验想检测这两种酶的活性的大小，不知道用那种方法，请教各位！有没有简单的方法如平板法，测代谢产物法等，具体方法如何？ 答：可以用透明圈法，具体做法就是提出几丁质粗酶液后在几丁质—PDA培养基上打孔培养一定时间然后观察透明圈的大小，测代谢产物应该是不行，因为几丁质酶分内外切酶，产物不一，测不出来的，你也可以用聚丙烯酰胺电泳检 ...
新生1-2天Wistar大鼠乳鼠，经75%酒精消毒，断头处死，取脑放入冷的D-Hanks平衡盐溶液，去除脑膜及大血管。分离两侧大脑皮质并剪成1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶37℃空气浴震荡消化10 min，用含10% FBS的DMEM培养基终止消化，离心1000rpm 10min，去上清，再用含10% FBS的DMEM培养基重悬沉淀，经75µm筛网过滤，收集滤液，离心1000rpm ...
问：如何检测几丁质酶的活性？在一篇文章里看到过，是利用这个酶来酶解底物来测量的。我的问题是： 1、在测量该酶活性时，要不要把这个酶提取出来？ 2、它的底物时chitin底物溶液怎么配制？ 答：1、对几丁质酶酶活的检测一般不需要把几丁质酶提取出来，但最好能适当的浓缩一下酶溶液，因为几丁质酶的活性不是很高。 2、几丁质酶活检测的底物一般用胶状几丁质，浓度为0.5-1.0%，一般用PH5.0左右的醋酸 ...
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