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        均相荧光免疫测定

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        均相荧光免疫测定(homogeneous fluorescence immunoassay)是根据1972年Rubenstein等建立的均相酶免疫测定法(HEI)发展形成的一种新型免疫荧光分析技术。所谓“均相”是指在反应结束后无须对游离和结合的标记物进行分离,直接测定即可。

        均相荧光免疫测定是利用荧光的一些特殊的理化特性(如荧光的激发、吸收、淬灭等),在标记抗原与特异性抗体结合后发生改变,据此设计建立的各种试验方法。

        一、荧光淬灭免疫测定

        荧光淬灭免疫测定(fluorescencequenchingimmunoassay)反应系统内除待测药物外,同时加入某种待测小分子抗原和一定量用荧光物质标记的该抗原,二者与有限量的特异性抗体竞争结合。

        当抗体与此种标记抗原结合时,发生淬灭作用使荧光物质的荧光消失;因而无须分离直接测定反应系统的偏振荧光强度。如样品中未标记抗原含量高,则竞争结合的抗体多,使游离的标记抗原增多,经紫外光激发后荧光强度高,二者呈正相关,据此可以定量测定样品抗原含量。

        二、荧光保护免疫测定法

        1982年,Hanssan等在试验中引入了抗荧光素抗体,以淬灭反应系统中的游离荧光素。而对于已和特异性抗体结合的标记抗原的荧光则无影响,即特异性抗体与标记抗原结合后,可以保护其荧光免受抗荧光素抗体的淬灭作用,从而达到均相反应的要求。

        当样品中未标记的待测抗原含量高时,竞争与特异性抗体结合,使游离的荧光素标记抗原增多,由于受到抗荧光素抗体的淬灭作用,受激发后荧光产生量反而减少,二者呈负相关,据此可以定量测定样品中待测抗原的含量。

        荧光保护免疫测定法(fluorescence protectionimmunoassay)可用于测定甲状腺素、人血清清蛋白、IgG等。

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