【关键词】雌二醇 雌二醇(17β-Estradiol)是天然雌激素的重要成分,为防止儿童性早熟等问题,食品中尤其是畜禽产品的雌二醇检测不容忽视。胶体金免疫层析技术(GICA)在检测小分子有机物方面越来越受到重视。其基本原理是胶体金颗粒能够稳定吸附蛋白质,而蛋白质的生物活性无明显变化,所以它可以取代酶标记抗体〔1,2〕。本实验采用标记有雌二醇单克隆抗体的胶体金颗粒与相对应的固定 ...
1、使用常规要求 pH:为了保证色谱柱长寿命,硅胶基质色谱柱的使用pH 范围是2~7,超出此范围的色谱柱寿命与功能团结构有关,但是偏离2~7范围越远,色谱柱性能下降的越快。 温度:典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与 60℃之间,高温使用会缩短柱寿命。 缓冲溶液:生物样品分离通常要求使用缓冲溶液控制流动相的pH值,仔细控制避免缓冲溶液与流动相有机溶剂混合时产生沉淀,色谱柱和HPLC系统不能储存在含 ...
关键词:乙型肝炎病毒表面抗原;胶体金免疫层析法Gold-immunochromatography 【摘要】目的建立一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法(GICA)用于检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒、标记乙型肝炎病毒表面抗体(抗HBs),制成免疫层析检测试条。血清中HBsAg与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤 ...
摘要:目的建立快速测定抗子宫内膜抗体(EMAb)的新方法。方法采用经Sepharose4B免疫吸附柱亲和层析纯化的人子宫内膜抗原(EMAg),以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫胶体金技术原理,建立斑点免疫渗滤法(DIGFA)检测人血清EMAb.共检测500份不孕者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究。结果纯化的人子宫内膜抗原与患者血清 ...
氯霉素(Chloramphenicol,CAP)是一种高效广谱抗生素,对多种病原菌有较强的抑制作用,常用于动物各种传染性疾病的治疗。但其在动物肉、奶、蛋等食品中的残留严重威胁人体健康,能引起再生障碍性贫血和粒状白细胞缺乏症等疾病,低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性。欧盟、美国等许多国家已明确禁止CAP用于生产动物源性食品,并制定了严格的限量标准。加入WTO后,农、兽药残留日益成为各发达国家限制 ...
因为样品中经常会含有能够吸附在色谱柱固定相上的杂质化合物,所以应该经常对色谱柱进行清洗或冲洗。当色谱柱在多次进样后显示出柱效降低时,有必要采用适当的流动相对色谱柱进行处理,冲洗除去吸附在固定相上的污染物和样品残余物。 方法如下: ●将色谱柱从系统上取下,反向连接到输液泵上。色谱柱出口不要连接到检测器上,以免污染检测器流动池。 大多数的硅胶基质色谱柱反相冲洗没有问题,但是聚合物基质色谱柱并不能如此操 ...
摘要:免疫胶体金技术是20世纪80年代发展起来的一种新型免疫标记技术,应用该技术制成的胶体金试纸条具有简便、快速、灵敏、特异性高等优点。文章介绍了胶体金技术的基本原理、制备方法、胶体金技术的特点以及利用该技术制成的胶体金试纸条在兽医临床上的应用。 关键词:胶体金;兽医临床;应用 免疫胶体金技术在人类医学上是一种常用的免疫标记技术,有其独特的优点。近几年来在生物医 ...
质谱,是一种分析方法,原理就是让带电原子、分子或分子碎片按质荷比的大小顺序排列,打出相应的谱线。待分析的样品分子在离子源中离化成具有不同质量的单电行分子离子和碎片离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能并形成一束离子,进入由电场和磁场组成的分析器中;其中离子束中速度较慢的离子通过电场后编转大,速度快的偏转小;在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转,即速度慢的离子依然偏转大,速度快的偏转小;当两 ...
单位:湖北医科大学病毒所临床病毒室,武汉430071 关键词:包埋前免疫胶体金技术;免疫电镜;I型单纯疱疹病毒;病毒抗原 摘要目的:探讨细胞内病毒抗原的超微定位的方法。方法:采用包埋前免疫胶体金方法标记I型单纯疱疹病毒(HSV-1)抗原以研究该病毒在人胚肺细胞(HEL)内的超微定位。结果:发现金颗粒约为5nm,大小均一,在HSV-1囊膜、内质网膜表面 ...
【实验目的】 1.掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理。 2.学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术,用于分离蛋白质。 【实验原理】 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺作为支持物的一种电泳形式。单体-丙烯酰胺和交联剂-甲叉双丙烯酰胺相互作用可形成聚丙烯酰胺,该聚合反应以TEMED作为催化剂,以APS 作为引发剂。 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的比例可决定凝胶网孔的大小,交联剂所占比重越大,凝胶的网孔 ...
1、故障现象 用户反映YWG C18 10μ(4.6mmX150mm)色谱柱使用20天左右后,柱压升高约1Mpa左右,分离效果变差,用蒸馏水清洗色谱柱没有明显改善。 色谱柱分离度不好,柱效不高,可能是用户分析发酵液,简单的过滤后进样分析,其中的蛋白质等可能没有去除完全,致使过多的蛋白质沉淀在色谱柱中,加之对沉淀的蛋白质没有及时冲洗,长时间后,破坏C18官能团,而且客户使用纯水长时间冲洗色谱柱 ...
一、方法 1、H.pylori配体固相硝酸纤维素膜的制备 H.pylor抗原室温融化后,12000r/min离心10min,取上清2mg/ml用0.01mol/L的PB缓冲液(pH7.2)以250μg/ml间隔,经BIO-DOT型XYZ3000点样仪dispenser线形包被于硝酸纤维素膜的观察结果的测试反应区,定义为检测带(T),距离检测带5mm远的质控带(C)用d ...
1、你需要的实验动物品种品系、年龄 2、是否有相应的实验动物动物质量合格许可证 3、发票 4、向对方了解实验动物运输方式(一般是空运)和到货时间5、提前了解到机场接货的程序和地点,做好接货准备(不提前准备的话,很可能因为繁琐的手续浪费大量的时间,导致实验动物滞留机场时间延长,气温、噪音等因素很可能导致实验动物因躁动斗殴、受惊吓等原因死亡) 6、最好有专车接送(理由同上) ...
我们一直用汽车调运大批15公斤左右的仔猪,虽然路途远,时间长,但运输相当成功,死亡率都控制在2%左右。现将具体运输注意事项介绍如下,供养殖户参考。 1、猪源的组织:一车仔猪可装300~500头,要使这些仔猪在最短的时间内同时装起,必须先派人到各养殖场(户)联系,通知他们何时将品种、重量合适,并进行免疫接种的健康无病的仔猪送到装车地点,然后过称上车。需要说明的是养殖场(户)送来的仔猪一般都喂得比较饱 ...
在实验动物的运输过程中,由于恐惧与疼痛、饥渴、疲劳、通风不良、过度拥挤、长时间的旅程而得不到“安宁”等因素会引发动物发生应激反应。发生轻度的应激反应,动物可表现为体重下降、脱水及对疾病的抵抗力降低,严重时可影响动物的质量,甚至导致动物在运输途中衰竭死亡。 在运输的不同阶段,动物表现出的症状也不相同。初期动物在恐惧、疼痛、关禁、拥挤等应激因子的刺激下,表现不安、狂躁和敏感性增 ...
各有关单位: 为了适应科技发展的需要,贯彻落实《实验动物管理条例》(中华人民共和国国家科学技术委员会令第2号,1988),进一步加强实验动物管理工作,我们在深入研究和广泛征求意见的基础上,制定了《关于善待实验动物的指导性意见》,现予印发,请认真贯彻落实。 附件:关于善待实验动物的指导性意见 科学技术部 二OO六年九月三十日 ----------------------------------- ...
作者:韩锋产阎小君侯瑜肖乐义郭晏海苏成芝 单位:中国人民解放军第四军医大学全军基因诊断技术研究所陕西省西安市710033 关键词:螺杆菌,幽门;细胞毒素相关蛋白A/分析;胶体金;免疫层析;抗体/分析 摘要目的建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相 ...
材料 1、实验动物: 孕13d的昆明种二级小鼠。 2、主要试剂 主要试剂 来源 DMEM/F12 GIBCO rh-EGF peprotech rh-bFGF peprotech B-27 supplement GIBCO HEPES Sigma Trypsin Sigma Ploy-L-lysine ...
一周龄大鼠,断颈处死,活力碘消毒无菌取出肝脏,于无菌维持液中漂洗,用眼科剪仔细清除肝包膜韧带沿肝边缘剪切肝尖组织(绕开肝蒂等)转入青霉素小瓶中,用眼科剪绞碎剪成0.1-1.0mm3大小的碎片,加入5倍体积无菌维持液用滴管轻轻吹打吸出上层血细胞再用无菌维持液反复清洗3~5次,加入10倍体积无菌胰蛋白酶消化液37℃消化,消化过程中不断震荡,至组织块边缘变薄(镜下观)离心(1000rpm10分钟)弃去上 ...
1、将静脉血20ml用ACD抗凝剂以容积比血:抗凝剂=9:1抗凝处理 2、按血:分离液=1:2注入国产淋巴细胞分离液上层,400g 20℃离心30分钟 3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g,10min洗三次 4、获得细胞可做分选或其他实验。 体会: 1、实验中我用过肝素方法抗凝,但效果不好,因为肝素抗凝后交接层混浊,洗涤后没有细胞。后来是一位老师推荐我用ACD抗凝剂,效果 ...