蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质,其吸收高峰在280nm波长处,且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比关系,故可作为蛋白质定量测定的依据,但由于各种蛋白质的酪氨酸和色氨酸的含量不同,故要准确定量,必需要有待测蛋白质的纯品作为标准来比较,或且已经知道其消光系数作为参考。另外,不少杂质在280nm波长下也有—定吸收能力,可能发生干扰。其中 ...
(一)天然染料 1、苏木精 苏木精是从南美的苏木(热带豆科植物)干枝中用乙醚浸制出来的一种色素,是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色,必须暴露在通气的地方,使他变成氧化苏木精(又叫苏木素)后才能使用,这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长,配置后时间愈久,染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒 ...
1、凯氏定氮法仍然是建立各个具体方法时采用的参考标准方法。 2、双缩脲比色法是目前首先推荐的蛋白质定量方法。方法操作简便,虽然双缩脲试剂有大同不异。其中酒石酸钾纳可以稳定在碱性溶液中的铜离子,含有碘化物作为抗氧化剂。双缩脲反应生成的复合物其吸收峰为540nm。可采用公认的标准牛血清白蛋白作为标准品,经精确称量,必要时用凯氏定氮法标定。各地质控中心提供的混合标准血清可作为第二参考,血清用量100&m ...
愈伤组织的培养 一般来说,从接种外植体到出现愈伤组织,需要经过2周时间。2周之内就可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时,恒温箱的门应该关闭,不必见光,因为在无光条件下愈伤组织长得更快。2周以后,由于培养基中的营养成分已接近耗尽,必须更换培养基,进行继代培养。 愈伤组织的继代培养 进行继代培养所用的培养基,和培养愈伤组织所用的培养基相同。在严格的无菌条件下(接种箱 ...
简单、快速的膜介质核酸检测方法已步入发展轨道,但未来还有很长的路要走。 本文第二部分主要讨论提供给膜介质核酸免疫快速诊断应用(IVD 技术,方法2001年9月,53页)研发者们使用的技术。共价连接作为一类具有化学-可控定量偶联技术而被应用到膜介质核酸检测系统中,在本文总结部分较为详细地介绍共价连接方法(见图一)。本文结尾部分描述了核酸膜介质快速分析产品生产过程中的一些还没有被解决的问题和挑战。 图 ...
1、蛋白质样品的特征: 复杂,含盐或其他污染物 易被蛋白酶降解 动态范围宽(>X106) 溶解性不均一(疏水性/亲水性) 分子量、等电点的范围宽(10-500KDa,pH2-14) 2、样品分离的基本要求: 高灵敏度和分辨率 宽动态范围 小样品体积 高通量 合适的温度和pH 避免蛋白酶降解 适合与高灵敏度的质谱联用 尽量少的操作步骤减少污染和损失 3、样品缓冲液的组成: 3.1 尿素:一种中 ...
在植物组织培养中,主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生,使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞,通过脱分化形成愈伤组织,并由愈伤组织再分化形成植物体。 愈伤组织的形成 从一块外植体形成典型的愈伤组织,大致要经历三个时期:起动期、分裂期和形成期。 起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞,通常都是成熟细胞,处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素(如机械损伤、改变光照强度、增加氧 ...
A. 实验过程 一、实验原理: 2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离,第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同,而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。 二、实验步骤: 1.样品的溶解 取纯化后的晶体蛋白3.0mg,加入300μl裂解液(1mg蛋白:100μl裂解液)振荡器上振荡10min左右,共处理一个小时。其中每隔10~ ...
(一)第一向等电聚焦 1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。 2.在小管中加入0.01g DTT,Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。 3.从小管中取出400ml水化上样缓冲液,加入100ml样品,充分混匀。 4.从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条(17cm pH 4-7),室温中放置1 ...
一、目的要求 掌握蓝藻门代表植物细胞的形态、结构、繁殖和生活史;掌握 蓝藻门的基本特征及实验材料的采集、培养和制片观察方法。 二、实验材料和试剂 颤藻属、念珠藻属、微囊藻属、色球藻属、0.2%亚甲蓝溶液等。 三、实验内容和方法 1.颤藻属(Oscillatoria) 植物体为单条藻丝或多条藻丝组成的皮壳状或团块群体。用解剖针挑取少许生活材料,做水封装片观察以下内容: (1) ...
一.目的要求 本门植物种类繁多,体形多样,分布极广,是植物界进化的主干,也是教学和实验的重点,为此安排两次实验。通过实验观察要: 1.的代表植物的形态构造、繁殖和生活史。从而掌握本门的征。 2.了解植物界从单细胞到多细胞,从无分化到有分化,从简单到复杂,从无性生殖到有性生殖,从核相交替到世代交替的演化趋向。 二、实验材料和试剂 衣藻属、绿球藻属、栅列藻属、实球藻属、团藻属、I―K ...
一、目的要求: 本门植物种类繁多,体形多样,分布极广,是植物界进化的主干,也是教学和实验的重点,为此安排两次实验。通过实验观察要: 1.的代表植物的形态构造、繁殖和生活史。从而掌握本门的征。 2.了解植物界从单细胞到多细胞,从无分化到有分化,从简单到复杂,从无性生殖到有性生殖,从核相交替到世代交替的演化趋向。 二、实验材料和试剂 水绵属、刚毛藻属、丝藻属、竹枝藻属、轮藻属、海生绿 ...
一、目的要求 掌握三门藻类的基本特征,代表植物的形态构造、繁殖和生活史。 二、实验材料 海带属、水云属、紫菜属、舟形藻属、海藻标本。 三、实验内容和方法 (一) 褐藻门(Phaeophyta) 1.海带(Laminaria japonica) (1)孢子体:藻体褐色,可分为三部分。 带片:扁平不分枝的带状体为带片。两侧缘薄,具波状皱褶.中部较厚,带片的中下部最宽,向上变窄, ...
一.目的要求 掌握粘菌门和真菌门接合菌亚门、子囊菌亚门代表植物 的形态构造及繁殖方式。学习实验材料的培养方法。 二、实验材料 发网菌属、根霉属、青霉属、酵母菌属。 三、实验内容和方法 1.发网菌属(Stemonitis) 取装片观察孢子囊的形态构造。发网菌是粘菌门最常见的一属。营养体是一团裸露多核的原生质团,叫变形体。常在阴湿处缓缓爬行于朽木、败叶中,吞食固体食物。生殖时,变形体对外 ...
一、目的要求 掌握真菌门担子菌亚门和地衣门代表植物的形态构造和繁殖方式。观察担子果、子囊果和地衣标本,了解其多样性。 二、实验材料和试剂 黑伞属(Agaricus)子实体、菌伞切片; 银耳属(Tremella)子实体及浸制材料, 地衣切片; 数种担子菌、子囊菌标本; 地衣标本, 1%KOH水溶液。 三、实验内容和方法 1.黑伞属(Agaricus) (1) 子实体, ...
一、目的要求 通过对代表种类的观察,掌握藓纲植物的形态、构造、生活史,了解不同的生活型。 二、实验材料 葫芦藓属、金发藓属等十几个属的配子体,生活的原丝体孢蒴纵切、孢子体、精子器纵切。 三、实验内容和方法 1.取葫芦藓(Funaria)配子体和孢子体,观察下列内容 : (1) 配子体形态:矮小,高约1—3cm,直立生长,叶长卵形,一层细胞厚,具中肋,在茎上螺旋排列。茎的下端具有 ...
一、目的要求 通过实验掌握真蕨亚门的主要特征及生活史;掌握真蕨亚门与蕨类植物其它四亚门的主要区别。 二、实验材料 肾蕨孢子体、孢子囊群;蕨地下茎横切;蕨叶横切;原叶体装片;数种真蕨亚门标本等。 三、实验内容和方法 1.肾蕨(Nephrolepis aurioulata),观察下列内容: (1)孢子体:根状茎直立,下面向四周发出长的匍匐茎,并从匍匐茎的短枝上长出圆形的块茎、根状茎。匍匐茎密被 ...
电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类 在电场中,推动带电质点运动的力(F)等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积。F=QE质点的前移同样要受到阻力( ...
一、目的要求 通过实验掌握石松亚门、楔叶亚门代表种类的形态结构和生活史;掌握石松亚门、楔叶亚门的主要特征以及与其它 亚门的区别。 二、实验材料 石松孢子体;中华卷柏孢子体、孢子叶穗;问荆孢子体、茎横切,孢子叶穗等。 三、实验内容和方法 1.石松属(Lycopodium):观察孢子体外形,石松为多年生草本植物,茎匍匐或直立,通常为叉状分枝,具不定根。叶为小型叶,螺旋着生在枝上。孢子叶穗着生于分枝 ...
几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集,最常用的就是SDS-PAGE电泳技术,关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论:Q:SDS-PAGE电泳的基本原理?A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠), SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多 ...

