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【求助】两个载体做共转染（瞬时转染）时是否需要有相同的复制起点\启动子吗?? 参与者：sunshine046000 各位大侠，我最近准备做共转染，用于分析目的基因的蛋白功能改变，查阅文献发现可以用含目的基因的载体和含有报道基因（b-gal）的载体做共转染以控制转染率。..请问师兄师姐们，如果我的研究目的在于分析目的基因（野生型和突变型）的表达情况以及后续的活性变化。是否最好用含相同启动子，增强子， ...

测定DNA的核苷酸序列是分析基因结构与功能关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化学降解法、自动测序，DNA测序技术发展很快。目前在实验室手工测序常用Sanger双脱氧链终止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一种单链的DNA模板或经变性的双链DNA模板和一种恰当的DNA合成引物。其基本原理是DNA聚合酶利用单链的DNA模板，合 ...

目的： 本操作规程是关于屏障动物房中饲养小鼠的具体操作规程。 主体内容： 1.提前15分钟用70%酒精喷雾动物笼具交换工作站内表面，同时放入经表面消毒的各种灭菌饲养和实验用品，并打开紫外灯，开启超净工作台风机。 2.关闭紫外灯，打开照明灯。 3.用70%酒精喷雾工作车。 4.用双手轻轻抬起IVC笼盒外端，沿笼架搁挡向外移出笼盒，放在工作车上。 5.将工作车推至动物笼具交换工作站旁。 6.用70%酒 ...

目的 利用时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)技术建立人生长激素（human growth hormone, hGH）的快速检测方法并研制其诊断试剂。方法 采用双抗体夹心法（一株抗GH的单抗用于包被微孔板，另一株抗GH的单抗用于Eu3+标记）建立hCG-TRFIA。结果hCG-TRFIA的线性测量范围为0.1×10 ～100×10 U/L 0.036×10 U/L 5.3%～8.6% 和7.6%～12.8%，与促甲状腺激（TSH）、卵泡生成素（FSH）、人胎盘催乳素（LH）和黄体生成素（HPL）均无交叉反应，将43份血清标本用本法与Wallac试剂盒同时检测相关系数（r）为0.957。 结论hGH-TRFIA可作为一种具有灵敏度高、特异性强和测量范围宽的新方法 用于临床GH水平的测定。

【目的与要求】 了解IVC系统和超净工作台的原理结构、维护、操作程序和注意事项。 【仪器与材料】 IVC、超净工作台、一次性手套、口罩。 【步骤】 一、师讲述IVC系统和超净工作台的原理结构、维护、操作程序和注意事项。　　二、学生在教师指导下进行各项基本操作。 【内容】 一、原理和结构 IVC笼盒由耐高温（至少能耐150～160℃高温以上）的透明塑料材料制成，一套笼盒由上盖、底盒、食槽、水槽、锁紧 ...

实验目的： Morris水迷宫试验（water maze test，Richard Morris，1981）及其它行为学实验（跳台试验、避暗试验等）是近二十几年建立起来的判断动物学习记忆的重要实验方法，近年来正成为神经药理学、神经生理学、神经心理学、老年病学等的常用研究手段。 原理： 通过动物的行为来判断动物的智力情况，达到研究的目的。 具体步骤： 设计特制的水迷宫主要由一圆柱型水池和一可移动位置 ...

一、高效液相色谱仪的结构： HPLC的出现不过三十多年的时间，但这种分离分析技术的发展十分迅猛，目前应用也十分广泛。其仪器结构和流程也多种多样。典型的高效液相色谱仪结构和流程可用下列方框图表示（图3－2）。高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置（用双泵）、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。 1 ．高压泵 HPLC使用的色谱柱是很细的（1~6 mm），所用固定相的粒度也 ...

实验动物（特别是大型实验动物）的饲养对设备有许多特殊的要求，以确保实验动物的生存条件完全正常，为实验提供正确的结果，另外还要考虑到动物保护组织的意见。EHRET公司的大动物饲养设备正是根据欧美严格的要求，凝聚多年技术经验设计制造而成。 IVC兔笼系列　　●笼体可以经高温（121～165℃）高压灭菌。　　●耐酸碱。　　●易于操作。　　●圆滑的角部设计便于清洁。　　● 兔子生活舒适。　　●在一个笼中有 ...

【摘要】基于可溶性抗原和抗体在液相中特异性结合，形成一定大小的抗原抗体免疫复合物，使反应液出现浊度。采用流动注射光度分析法联用单片机，优化了实验条件；采用合并带技术节省试剂与试样，寻找到了抗原抗体反应的最佳浓度比与最佳反应时机，从而建立了流动注射免疫比浊测定人体血清免疫球蛋白Ａ（IgA）的新方法。整个测试系统联用单片机，使测试过程实现程序操作。本法简便、快速，节省试剂和试样，进样频率高，每小时进 ...

对自制时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原（CEA）试剂盒进行临床应用研究，为该试剂盒临床应用及临床疗效评价提供科学依据。方法　收集血清标本326份，用自制试剂盒按试剂盒操作说明书对血样进行测定，并以化学发光法（Roche）为对照方法，WALLAC公司的CEA时间分辨免疫测定药盒（AutoDELFATM hCEA）作为复核试验，获取相关目标实验数据，并计算得“真实性”和“可靠性”等统计学数据。结果　以化学发光法为对照试验，其阳性符合率为95.83%，阴性符合率为98.73%，检验无显著性差异；自制试剂盒的定量测定值与化学发光法的测定值较为一致，相关系数达0.93，相关性好。结论　试剂盒检测性能与现在临床广泛应用的方法相仿，能满足临床应用的需要。

由于SPF级动物需要投入大量的经费和时间，投资者必须保护这些动物免受污染。关于隔离水平，存在着以下几种不同的水平：房间水平，弹性膜隔离和笼具水平的隔离。其中，笼具水平的隔离是最具有可塑性和实用性的装置，它由一个带顶层过滤的微隔离动物笼和一个100级超净工作台组成。 配合使用严格的无菌操作技术，笼具水平的隔离技术能保证动物免受微生物污染及免于得病。 绝大多数局部的隔离系统设计的基本原则是：既要保护动 ...

摘 要：当今生物学领域的研究一个热点之一是细胞凋亡。开展对细胞凋亡的研究，首先要解决是方法学问题。作者从凋亡细胞的特征性核DNA片段检测着手，阐述了多种凋亡细胞核DNA片段检测方法以及近年来的一些新进展。 细胞凋亡（apoptosis）又称细胞凋谢或称程序性细胞死亡（Programmed cell death，PCD），是有别于细胞坏死而受基因控制的一种主动性细胞自杀过程。对细胞凋亡的研究已成为当 ...

类风湿因子(RF)是诊断类风湿关节炎(RA)的一个重要的实验室指标，其检测方法很多，国外主要采用免疫比浊法(ITA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、放射免疫法(RIA)等，国内仍普遍采用乳胶凝集试验(LAT)，该方法操作简单，不需要特殊仪器，成本低，但只能进行半定量结果分析。本文采用ITA和LAT同时检测了RA和其他结缔组织病(CTD)患者及正常人的血清RF含量，并比较分析两种检测RF方法的结果。 ...

一、目的： 保持动物有舒适的生活环境，避免动物受病源微生物的影响。 二、背景知识： 20世纪80年代，意大利Thcniplast公司，在带空气过滤帽塑料盒的盒帽上方加了一个进风口，希望促进盒内的通风换气，从而出现了第一个独立通气笼盒（Individually Ventilated Cages，IVC）。IVC笼盒经过十多年的使用、研究和不断改进，特别是在材料、净化、微电子等现代技术的带动下，一个全 ...

【摘要】 目的 评价用自动生化分析仪免疫抑制比浊法测定糖化血红蛋白（HbA 1c ）的可靠性，并与常规方法（微柱法）作相关比较。 方法 根据美国国家试验室标准委员会（NCCLS）EP5-A、EP9-A文件要求进行方法精密度、准确度和线性范围的评价试验。 结果 该方法的批内和批间CV<4%，试验总不精密度为:x（HbA 1c ）为4.85%时，CV为2.8% ...

【摘要】： 目的 探讨SPF（specific pathogen free，无特定病原体）级实验动物房在健康相关产品检测实验室中的建设和管理办法。方法 依照《中华人民共和国实验动物管理条例》和《广东省实验动物管理办法》的要求，对SPF级动物房进行设计和建设，并制定了一系列的管理措施。结果 通过科学的设计建设和严格的管理，该SPF级动物房的环境条件均符合国家有关标准，经广东省实验动物监测所验收合格， ...

【摘　要】目的：评估透射免疫比浊法和速率散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的灵敏度和特异性。方法：用免疫透射比浊法和速率散射比浊法同时检测了80例各种患者血清中CRP浓度。结果：两种方法在8—20mg／L、20～40mg／L、40～80mg／L、80～160mg／L、160～300mg／L范围内测定C反应蛋白的相关系数是0．990、0．996、0．995、0．992、0．997．说明两 ...

【检测方法】 速率散射比浊法 【方法学原理】 抗原(免疫球蛋白)与抗体(抗免疫球蛋白)在液相中可快速反应，形成的免疫复合物颗粒具有特殊的光学特性，使反应液出现浊度。速率是指单位时间内抗原、抗体形成免疫复合物(CIC)的速度。随着时间的延长免疫复合物总量是逐渐增加的，而速率变化则由慢一快+慢，其反应速率最快的某一时间称为速率峰。当反应体系中的抗体(抗免疫球蛋白)量保持过剩时， ...

对于普通使用的缓冲液，PH值随温度变化而变化。 下表列出温度改变10℃时，PH值的变化情况： 例如 20℃下配制PH7.4 Tris缓冲液40℃时PH值为 7.4-(2x0.310)＝6.78 缓冲系统 pKa/20℃ pKa/10℃ Mes 6.15 -0.110 Ada 6.60 -0.110 Pipes 6.80 -0.085 Aces 6.90 -0.200 Bes 7.15 -0 ...

初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20% ...