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最初，用0.25%胰酶消化液传代，细胞脱壁容易，但是，吹打细胞180次左右，也只有80％细胞是单个细胞，而且，易引起细胞机械性损伤。于是，我改进方法。 现在，我的处理如下： 弃旧培养液 0.02％EDTA作用2分钟 弃EDTA 0.1％胰酶作用30秒 弃胰酶，继续消化2分钟 加培养液终止消化。一般吹打细胞30－40次，细胞基本为单个。 EDTA是一种化学螯合剂，主要作用主任已说。我要提醒一下：ED ...

培养液：MEM(GIBCO)，20％FBS，双抗100IU／ml； 原代细胞培养：取5kg左右兔空气栓塞法处死后断头，于无菌条件下从枕大孔处用大止血箝扳开颅骨暴露并小心取出脑组织放入装有DMEM的培养皿中，用眼科镊分离基底动脉后按常规平滑肌方法贴块培养。 传代： （1）吸除培养瓶内旧培养液。 （2）D-Hanks液冲洗2遍。 （3）加入消化液少许，以能覆盖瓶底为限。 （4）倒置显微镜观察发现细胞胞 ...

在F-12培养基中加入5％小牛血清、10mU/ml TSH、10µg/ml胰岛素、5µg/ml转铁蛋白、10ng/ml生长抑素、0.4ng/ml氢化可的松、10ng/ml甘氨酰－组胺酰－赖氨酸醋酸盐，每100ml培养液加入1ml双抗，用200ml培养瓶置CO2孵箱35℃培养。 每4天换液一次。待细胞有80％融合时进行传代。大约7－10天传一代。 将生长状态良好、有80％融 ...

1、培养液用的GIBCO的RPMI-1640。里面加10%小牛血清，青霉素+链霉素。消化时用0.25%胰酶。 2、我都是1640配营养液时现加血清和双抗，血清分装后直接由-20度到37度水浴箱中溶掉，没发现血清有沉淀现象。总体积100ml的培养液：90ml1640+10ml牛血清+1ml双抗，无其他物质了。培养过程中没发现有什么问题。 3、传代时，先吸掉培养液，我都不用倒掉的方法，怕由于瓶口而污染 ...

细胞增殖快非常好养，但是要及时换液，否则也很容易死亡、或变形。我养的最好的时候，天天都在换液，两三天就要消化传代。我用的消化液一般是 消化用含EDTA的胰酶0.25%，个人感觉效果比较好一点。 消化步骤：吸出培养液，加入PBS洗涤（视培养瓶大小加入相应的量，25CM加入1-2ML）而后加一次胰酶（25CM培养瓶加0.6ML）作用2-3分钟，轻轻摇晃使均匀作用在细胞层面上。要一直在显微镜下观察，以防 ...

我所用的卵巢癌的细胞包括SKOV3、A2780、3AO、OVCAR3、HRA，几种细胞的特性不完全一样，但是我的传代的步骤是基本一致的： 细胞生长至80%汇合时传代，先倒掉培养液，加预先加好双抗的生理盐水或PBS 5-10ml（100ml培养瓶）后轻轻摇晃数次后倒掉，加0.25-0.35%的胰酶2ml，并使其分布均匀（这一点很重要，一定要注意工作台是否平整，否则容易造成胰酶分布不均匀而细胞消化不同 ...

(一)实验目的 了解细菌生长曲线的持点及测定原理，学会用比浊法测定细菌的生长曲线。 (二)实验原理 将一定数量的细菌，接种于适宜的液体培养基中，在适温下培养，定时取样测数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，作出的曲线称为生长曲线。该曲线表明细菌在一定的环境条件下群体生长与繁殖的规律。一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期，各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。 比 ...

【求助】ELISA检测中的问题 参与者：zhou3303 请教各位大虾，小弟用LPS刺激中性粒细胞（2.5×106/ml）表达细胞因子IL-1，TNF-a，IL-6的实验中，ELISA检测上清后，空白孔（只有培养液和细胞）的值也较高，有50pg/ml，甚至有的有300pg/ml，而LPS刺激组的值也只有空白组的2倍多，不知是什么原因，望不佞赐教。 参与者：用心聆听 我在做跟你类似的实验 ...

293T细胞差点被我养死，幸好我又将它起死回生，一点心得。 细胞传代：当细胞在细胞培养瓶内长满达到80％时就要传代，一传二，24小时后再传代。48小时传就不好了，如果在24小时后细胞没有长到80％，应该换新的培养基，不然，培养基变黄，细胞脱落。 细胞消化：将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，来回轻微晃 ...

【求助】MALDI-MS分析 参与者：wuwanjun MALDI-MS分析是什么分析，谢谢 参与者：wuwanjun 是不是-基质辅助激光解析电离质谱分析？ 参与者：jfeiharry MatriX AssistedLaser Desorption Ionization （MALDI），中文一般译为基质辅助激光解吸附质谱技术，其基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，由 ...

【求助】细胞免疫组化 参与者：sunnyBIO 没有做过，但是最近要尝试. 网上及园子里找过有许多种方法，但是不知道那种合适. 希望做过的各位可以给我指点. 在此希望高手可以提供详细的方法.不胜感激！ 参与者：sunnyBIO 米有人可以帮帮偶吗? 参与者：zhangyuelin1999 本实验室的方法，参考一下： 细胞爬片后， PBS洗3×5min 4%多聚甲醛固定30分钟（4度冰箱 ...

牙髄细胞中主要是成纤维细胞，贴壁生长。 传代方法： 弃培养液（尽量吸干） 加基础培养基配置的0.2%trypsin+0.02%EDTA 轻轻翻转培养瓶使消化液浸过有细胞的瓶壁 重复4～5次 迅速吸去消化液 镜下观察细胞变圆回缩（约1分钟） 加入完全培养液（DMEM+10% FCS）终止反应 吹打后，1:2接种，继续培养。 ...

我用的是DMEM低糖培养液，每次传代前，将培养液，PBS，0.25％的胰酶（没加edta）放37度烤箱预热（此做法是减少4度的凉液体对细胞的刺激，以防细胞死亡）。 每次换液时，一定要烧培养瓶口，做好无菌观念。 先抛弃旧液，用PBS先冲净残留的血清，再加PBS用滴管轻轻的吹打细胞，将死细胞吹打掉。 加胰酶时注意：若用加edta的，记住了，在镜下看到细胞在收缩时，赶快吸出胰酶，加血清中止消化。血清可抑 ...

【求助】关于如何测定物质的亲水性和疏水性问题 参与者：香香会馆 大家好，对于亲水性和疏水性问题，我的理解是与水的接触角小于90度的就是亲水的，反之就是疏水的，但是对于具体的物质该如何判断，或者有什么方法直接测定呢？ 比如小分子的多肽，该如何判断其亲水性？请大家不吝指教！ 参与者：fishbody 一般化合物的亲水亲脂性是通过测它在水及正辛醇中分配系数。 正辛醇是一种长链烷烃醇，在结构上与生物体内的 ...

弃原培养基 D－Hanks洗一到两次（减少血清对胰酶消化作用的干扰） 0.250%胰酶消化 倒置相差显微镜下观察，细胞变圆、收缩突起时以血清终止消化（如含EDTA可以在此时吸出消化液，注意掌握时机，否则会将细胞也一同吸走） 加入适量DMEM，小心吹打，镜下观察细胞都已消化下来，加DMEM至终体积-->转移细胞至其它培养瓶或皿。 经验教训：以前我们配的消化液含有EDTA，但最终没有吸出来，传 ...

【求助】高分子物质如何溶解用于细胞实验？ 参与者：lihai584 我做的实验是考察一种高分子物质对细胞的作用，现在碰到的一个问题是用什么来溶解这种高分子物质。看到别人考察某种药物对细胞的作用，通常选用的方法是用培养基溶解药物，然后和细胞共孵育；我选用的那种物质水溶性很好，但是由于是高分子多糖，所以在预定的浓度下黏度很大。 现在用流式细胞仪进行检测，这个难点更加突出。 方案一：细胞培养，加入高分子 ...

弃去培养基 以D-Hanks'液洗两次 0.25％胰酶消化2-3min放置于CO2孵箱中 镜下观察细胞变圆回缩 以完全培养基（DMEM+10% FBS）终止反应 吹打后，1:2接种，继续培养。 ...

所需的D-HANK'S液和胰酶和用1640配置的适当浓度小牛血清最好都放在37度预热十分钟左右，让它们和细胞生长环境的温度是一样的。这样能达到既对细胞没有外来刺激的作用又能达到反应的最佳条件。 我用的是小培养瓶，方法是:先把旧的培养液倒掉，用D-HANK'S大约3ml洗一次，加浓度为0.1%的胰酶进行消化，添加量只要能均匀的覆盖培养瓶底，大约要1.5ml，最好把瓶盖旋紧放到37度培养箱里培养3-5 ...

我曾经做过原代培养的成骨细胞传代和骨髓基质细胞以及cos7细胞的传代。基本的操作过程都是： 倒掉或者吸掉培养基 37度预温的PBS洗涤细胞3次 加入浓度为0.1％的胰酶和0.05％EDTA进行消化，添加的量看所用的培养瓶大小，可以在室温下消化，也可以在37度进行消化 在显微镜下观察，等细胞成片脱离时，加入3毫升含血清培养基中止消化 将细胞悬液转移到离心管中1000rpm离心5分钟收集细胞 弃上清， ...

做好准备工作之后，先把旧的培养基倒掉。再用PBS洗两遍，然后加0.05%胰酶/EDTA，剂量根据培养瓶大小定，一般是25cm 2 的瓶子大约0.8-1ml，轻摇10——15秒，使消化液均匀覆盖瓶底即可，再倒掉。置培养箱3-5分钟(看消化效果而定)，等大部分细胞呈流沙状滑落时，即加入培养基终止消化，一般以1:5左右的比例传代(视计数结果和看细胞长满的程度而定)。 这种方法养比 ...