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无菌操作基本技术 1、实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70%ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作 ...

培养基 1、关于培养基，如果不是买液体的，那么其ph问题一定要给予充分重视！配置过程中的调解我就不说了，能用ph计最好！ 2、关于培养基的保存，如果你有输液瓶，那么我建议你每一次打开以后，最好还是换一个胶塞。如果象我一样就是普通培养瓶，那么记得一定要用封口膜封口，不要担心封口膜会带来更多的污染！你可以先将封口膜在使用前开紫外时略微照一下！但是保存封口膜最好找一个密封的瓶子等，比如吃完糖的罐子。 3 ...

问：我要分离细胞器，先要破碎细胞。查文章是用Polytron匀浆器或Dounce匀浆器或者Potter-Elvehjem匀浆器。请问它们有什么区别吗？价格是多少呢？细胞破碎能用玻璃的普通匀浆器代替吗？ 答：不同的细胞器分离的方法是不同的，因此随之而然的破碎细胞的方法也是有差异的。具体如下： 一、细胞器的分离：制备某种生物大分子时，往往需要采用细胞中某一部分为材料；或者为了纯化某一特定细胞器上的生物 ...

火鸡又名七面鸟，是体格最大的家禽之一。因生长快，肉质好，胆固醇低，倍受西方国家人们的有睐。我国于80年代初引进火鸡，先后在北京、天津等地试点推广，随着养禽业的蓬勃发展，火鸡养殖现已发展到20多个省、市，养殖业的成功与发展，取决于科学的饲养管理和完善的防病体系，而对疾病的了解和认识是建立防病体系的依据，为此，对火鸡6种常见传染病及防治作加行浅析：１　新城疫（Newcastle disease)新城疫 ...

近年来，由于养禽数量的增多，饲养密度的加大，生产者对饲养管理、疾病的防制措施缺乏足够的重视，重治轻防，滥用药等，因而各种常见疾病呈现增多的趋势，并常引发一些大的疫病流行，给养禽业带来巨大的经济损失，因此加强生产者的防制技术势在必行。 下面就疾病防制有关知识，从场址的设计与选择到重大疫情的扑杀等各各环节做一一介绍。 一、场址的设计与选择 养鸡厂址应设有育舍室、成鸡舍、饲料间、隔离室、解剖室等，布局合 ...

一）、细菌性疾病 主要细菌性疾病概述 由于鸭子的生理特性和鸡不同因此鸭子对一些常见疾病有抵抗力，对于一些细菌性疾病处理原则基本和鸡的相同。因此可以参考禽病的有关原则进行，限于篇幅在此不做过多叙述，仅将常见的一些疾病做一综述。 1、传染性浆膜炎 又称鸭疫里氏杆菌或里默氏杆菌病。主要危害八周龄以下的小鸭，其主要特征是引起鸭的心包炎、肝周炎、以及纤维素性腹膜炎。发病和死亡率均很高，为危害养鸭业主要的传染 ...

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家兔腹泻病种类繁多，病情复杂，常见于仔幼兔。在规模化养殖场中，仔幼兔的腹泻性传染病，已成为仔幼兔生长受阻和死亡率高的重要原因。 一、兔细菌性腹泻 1.大肠杆菌病 该病是由一定血清型致病性大肠杆菌及其毒素引起的家兔急性或慢性疾病。主要发生于25～70日龄的幼兔，病兔以拉稀或便秘为主，有的呈水样腹泻，粪便中常有胶胨样黏液。当饲养管理不当或天气剧变时，兔体抵抗力下降，大肠杆菌数量会急剧增加，从而导致发病 ...

兔瘟：由病毒引起的急性烈性传染病，呈爆发流行。病程短，药物治疗一般无多大效果，预防办法是定期用疫苗预防注射。 兔巴氏杆菌病：又称出血性败血症，是常见的、危害很大的呼吸道传染病。一年四季均有发生，但以气候多变的春、秋两季多发。预防办法是注意环境卫生，加强消毒措施，定期进行疫苗注射，治疗用抗生素或口服磺胺药。 大肠杆菌病：由大肠杆菌引起，主要症状是拉稀或便秘，粪中常有胶冻粘液，有的呈现水样腹泻。预防办 ...

问：我手上现有冻存的小鼠c26结肠癌和lewis肺癌组织块，请问怎样把癌细胞分离出来培养，然后接种到小鼠身上？ 答：方法： 1、组织块——酒精浸泡——剪碎——Hank's冲洗——胰酶消化——离心——Hank's冲洗——离心&mdas ...

问： 大家好，请问有人做过逆转录病毒包装吗，我最近在用PT67包装病毒，按照说明书上的要求，在细胞长到70%左右汇合时加入质粒和脂质体和无血清培养液培养4小时后更换为完全培养基继续培养24小时后加300μg/MLG418筛选，现在加药已经36个小时了，可是看细胞长的密密麻麻的大概有100%了吧，还不见细胞往下掉，我真是急死了，300μg/ml的筛选浓度是我在预实验里确定的应该错不了，可 ...

问：我想问个问题关于转染细胞的质粒，必须用试剂盒提取的么？用碱裂解法可以么？抽提两次浓缩一次，测得浓度是8点多，ratio是1.814，可以送去转染细胞不？人的细胞系。 答：碱裂解法比试剂盒提取的纯度要低，但是浓度高。其实，剂盒提取的原理和碱裂解法的一样，只不过最后过个吸附柱和蛋白洗脱，从而纯度较好。碱裂解法提取可以用来转染。几年前我还没用盒子时都是用碱裂解法提取转染，效果ok。 ...

问：我要做LUCIFERASE 了，可是我一点概念都没有。有哪位有具体的操作PROTOCOL？ 还有一些白痴问题luciferase 要检测什么呢？是把我的带有LUC的质粒转染到细胞里，然后检测它的活性？什么意思啊？ 我检测它的目的是什么呢？我只知道我现在有一个LUC的质粒，老板让我准备做，我都不知道是什么目的和思路...... 谢谢啦 答： luciferase检测的是虫荧光素酶基因的表达情况， ...

问： 大家好，我第一次作转染，是悬浮细胞， 已经在园子里看了好多这方面的资料，收获很大，可还是几个问题要问大家： 1）我打算用24孔板作转染，之后的筛选过程中肯定会有很多死细胞。这样小的体积（500μl），能不能作低速离心去死细胞呢？如果不能，要怎么去除死细胞呢？ 2）在96孔板每孔1个细胞的筛选的过程中，大家一般种多少孔进行筛选呢？ 3）96孔板筛选过程中，每个孔体积那么小要不要换液呢？需 ...

问：跟文献上的细胞一样，但跟他的质粒不一样，文献上说G418筛选浓度为500mg/ml，那我可以直接用这个浓度筛选我转染以后的浓度吗？质粒的不同对同一细胞的G418筛选浓度影响大吗？ 答： 由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的最佳筛选浓度。尽管文献上说特性明确的细胞系G418的最佳用量还是稳定的，但是由于实验 ...

问：我想用纸脂体转染法将质粒稳定转染入肿瘤细胞，请问可以选择哪种试剂盒？ 因为我不报销费用，所以想选一种即好用又较为便宜的，请求指点。谢谢 答：您的情况我们去年也曾遇到过。目前市面上的质粒提取试剂盒林林总总，令人难以取舍。我觉得首先应该根据自己的需要来选取。进口的试剂盒，比如qiagene，omiga，promega等固然好，但是价格较贵，如果自己的实验要求不是很高的话，用这些试剂盒感觉有浪费的嫌 ...

oldhappy求助：我做的是脂质体法转染（lipfectermine 2000）骨髓间充质干细胞（c57小鼠），现在刚转的是第3代细胞，铺板都很好，细胞密度也很大，但是36-48h观察基本没有荧光，也应该是没有转上了，宁外我的重组质粒时间很长了，提取有2个多月了，是不是这也有很大关系，以前的转染还算成功的/转染量如下。 A2.0重组质粒+50 培养基 B1.5脂质体+50 培养基 ...

问：最近要做萤光素酶载体PGL3转染细胞，PGL3载体上面带有neo的抗性标记，有一个老师和我说要培养基里面要加G418筛选，但我查了一些PGL3载体转染的文献，都没有提到加G418，所以想问问学长们到底要不要加G418？ 答：Neo是一个抗性基因，pGL3系列的载体上有这个抗性基因；Neo在原核（大肠杆菌）中表达的是Kan抗性；在真菌（链霉）中表达的是新霉素抗性；而在真核（细胞、酵母）中表达的则 ...

问：最近的一个实验困扰我许久，就是关于给药剂量的问题，具体如下： 我在培养瓶中按undefined10E6密度观察了心肌细胞的搏动和药物的干预情况，接下来想做MTT，需要用96孔板做，是否还需要保持原来的密度，或可以降到undefined10E5呢，希望高手指点， 答：1.给药剂量需要预实验摸索，可以用6孔或24孔板实验，按照倍比或10倍浓度梯度设计不同剂量组，观察药物量效关系，最终再选择合适的浓度或更合理的浓度梯度进行下一 ...

NIH3T3细胞中本身是没有TK的，1981年Scolnick利用lambda载体把胸腺嘧啶激酶（TK）转入NIH3T3细胞，构建成NIH3T3 TK细胞，所以细胞分为NIH3T3 TK＋和NIH3T3 TK-两种细胞，在Scolnick认为NIH3T3就是NIH3T3（TK－）。 他做转染细胞的基础是基于1969年Todaro的实验。 具体内容参看建株文献：J Virol.1981 Septem ...