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本文来自Cyagen赛业经过多年的干细胞（特别是MSC）研究，已经开发出多种成熟的MSC和ADSC等干细胞的分化诱导产品。

Attractene Transfection Reagent 高效转染各种贴壁真核细胞 ♦ 高效DNA转染，极低细胞毒性 ♦ 快速、简便的操作流程 ♦ 所有贴壁细胞 （包括难转细胞）的最佳选择 ♦ 非常适用于瞬时转染，稳定转染，共转染和 shRNA载体转染 ♦ 不含来自动物的组分 更高效率转染质粒DNA Attractene 试剂采用非 ...

1. 溶液准备： 转印缓冲液：0.025M Tris base ， 0.192 M甘氨酸 ， 30%甲醇 10×TBST：250mM Tris-HCl （ pH 8.0 ） ， 1.25M NaCl ， 0.5%Tween20 封闭液：1×TBST ， 3%脱脂奶粉 洗涤液：1×TBST 2. 实验程序： A. 膜的准备： 将PVDF膜切成条浸在甲醇中，室温条件 ...

美国密歇根大学的3T3-L1细胞分化的PROTOCOL(非常详细) 3T3-L1 Differentiation Protocol MATERIALS Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM; GibcoBRL-Cat# 11965-084: high glucose with L-glutamine with pyroxidine HCl witho ...

一、试剂和缓冲液配制 1、胎牛血清（氯化十六烷基吡啶） （1）解冻胎牛血清 （2）在56℃加热30分钟（脱补体作用，盖上瓶） （3）取25ml上述液体放在无菌的50ml的falcon里分馏 （4）在-20℃冰冻馏份 2、磷酸盐缓冲液（PBS） （1）无钙镁离子的100ML的PBS（10×）（生命技术） （2）900ML蒸馏水 （3）2克葡萄糖 （4）在无菌的FALCON里过滤，分馏，在 ...

细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。 一、步骤 1、制备细胞悬液：对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤2（计数与计算过程）。如果计数对象为贴壁生长的细胞，首先需将培养物按如下步骤制备成细胞悬液。 1）、 ...

一、有限稀释法 材料： a、96孔细胞培养板等； b、HT培养基； c、活力强的杂交瘤细胞； d、小鼠腹腔细胞。 方法： a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。 b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞三种不同的稀释度。 c、按每毫升加入5×104-1×105细胞的比例，在上述杂交瘤 ...

实验步骤 （一）、取SD 大鼠一只，实验时断椎处死。 （二）、在无菌条件下快速自肛门上2cm 取结肠10cm 左右，生理盐水中反复灌肠冲洗。 （三）、移入含300U/ml青霉素、300U/ml 链霉素的HepesRinger缓冲液中浸泡，肠段内外各15min。 （四）、将经抗生素浸泡过的肠段移入含Hepes Ringer缓冲液的塑料培养板中（培养板预先铺上705胶），在体视显微镜下沿肠系膜对侧纵行 ...

1、舒林酸和尼美舒利的溶解方法的问题： 问：最近在做试验时发现舒林酸和尼美舒利两种药物很难溶解，加入DMSO后可以溶解，但是再加入1640培养液稀释时又出现结晶，而且很难溶解。有什么好的办法吗？ 答：(1)可以先把所需药母液加如一个小安剖瓶，再加入培养基，用枪多吹打几分钟就会溶解。 (2)如果还是溶解不了，可以换用乙醇试试。 (3)配制药母液时浓度要尽量高，这样稀释后培养基中的DMSO浓度才越低。 ...

问：盐酸乙醇该怎么配置呢？ 答：在丁香园里搜索“盐酸乙醇”，有很多配制的网页，看你选择，比如“0.5%盐酸乙醇液如何配制 分析技术讨论版thank_you” http://www.dxy.cn/bbs/post/search?ei=UTF-8&action=Search&words=%E7%9B%90%E9%85%B8%E4%B9%9 ...

问：本人想合成一端核苷酸，我需要很大的量，但我不知到是不是公司给我合成后，拿回来我自己再扩增，还是公司直接合成我所需要的量？ 答：首先的是要明确你合成这段核苷酸的用途。如果是单链引物，用2OD也即是公司合成的量就足够了。是双链则另当别论。 ...

问：寡核苷酸合成有什么原则吗？根据MRNA上的碱基序列，合成的反义寡核苷酸是否每个碱基都要和mRNA严格对应？比如下面的例子(中华系列杂志上一篇文章发表的)：根据下面序列 5 ATG CTG CTG CGC TCG AAG CC 3其合成的寡核苷酸如下：AS-ODN 5'- GGC TTC GAG CGC AGC AGC AT-3' NS-ODN 5'- TCA GCT AGC GAG GCT G ...

问：合成小肽时活化羧基是用活化酯法好还是酰卤法好呢想？ 答：楼上的兄弟是做液相合成的吧？一般活化脂用的是DIC，DCC，类的东西哦，但是它门容易形成沉淀，让后处理不容易分离，很麻烦，一般用酰卤的方法比较好，再说你是做的小肽，肽的序列3-10个都好用的。希望你实验顺利！ ...

问：我要合成四段长约10aa的肽来做免疫动物(兔子)，获得抗体(多抗)，想问一下在多少纯度合适？多少合成量合适？不胜感激！ 答：合成越长越好，纯度越高越好，量越大越好。不过太长了不容易合成，纯度更难以掌握。容易操作应该是指肽合成量大后，使用起来更宽裕一些，不至于太紧张。类似帖子以前也有，搜索一下吧。 答：合成长约10aa的肽有点短了，建议合成15aa的肽。纯度90%以上足可以了。合成多少量，取决于 ...

问：想合成一个12肽和22肽作为检测抗原检测猪血清中的抗体。考虑到不好直接包被，欲与载体偶联。请教用什么载体合适？合成肽是否需要加特殊氨基？ 答：12肽和22肽未必很难包被到板子上，你可以先尝试一下直接包被，检测一下。我们试过很多更小得肽，6肽，能够直接包被到板子上做实验得比例还是很大的。另外多肽得包被除了跟你多肽得大小有关系以外，还和你多肽得亲水性和暴露情况有一定得联系。如果确实包被不上，建议 ...

问：我手上有一15氨基酸的合成肽，要和BSA耦联，用于制备抗体，想用戊二醛法或用EDC/DCC法，但是我这合成肽中间的9个氨基酸是抗原表位，并且有含羧基的Asp和含氨基地Lys，用戊二醛法或用EDC/DCC法和BSA耦联会不会影响抗原性？还有没有更好的方法？希望各位赐教。 答：会影响。戊二醛法或用EDC/DCC法利用的是氨基酸残基的羧和氨基，尤其是赖氨酸的氨基。你的15氨基酸的合成肽内有巯基吗？如 ...

问：我现在合成一个小肽！有谁知道哪儿能查到比较系统的资料吗？或有谁知道应看那些书啊！我不只应怎样确定量的多少，还有具体用那种方法最好！ 多长的肽？ 准备用Fmoc？设备准备的如何？ 答：书的话，可以看看这本，Fmoc固相合成介绍的非常系统：Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis ...

利用寡核苷酸自动合成仪，可很简单地合成制备寡核苷酸探针（如15～50bp），类探针具有以下优点：①短的探针比长探针杂交速度快，特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链探针，避免了用双链DNA探针在杂交中自我复性，提高杂交效率。⑤寡核苷酸探针可以检测小DNA片段，在严格的杂交条件下，可用于检测在序列中单碱基对的错配。 因此，寡核苷酸探针的研究，对于提高核酸杂交技术 ...

问：哪位知道根据32P 结合至合成肽的量计算AM PK 活力的具体步骤啊？我做的是骨骼肌，知道需要多少含量的骨骼肌，麻烦把详细的步骤告知，谢谢。 答：AMPK是一个蛋白激酶（protein kinase）吗？合成肽就是这个激酶的底物吧？如果是这样的话，您可以参看PKC激酶的测定protocol，很多公司比如sigma都有。（请参看附件，上面有详细的介绍和计算公式）。至于操作过程，简单的说，就是在 ...

黄惟庆、陈常德85版多肽合成，中国第一本多肽合成的专著。请下载： ...