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叶表皮对细胞起保护作用，壁厚，且排列紧密，其中有许多气孔，是叶片与外界环境之间进行气体交换和水分蒸腾的孔道，它既要让光合作用需要的CO2通过，又要防止过多的水分损失。气孔两侧的保卫细胞有控制和调节气孔启闭的作用，它们的胀缩变化直接影响气孔的启闭，从而显著地影响叶片的光合、蒸腾等生理代谢速率，因此，研究气孔运动有着非常重要的意义。关于气孔运动的无机离子吸收学说认为，气孔运动主要是K+离 ...

在植物生理学上，水势定义为单位摩尔体积水的化学势（即自由能），是植物水分能量状况的基本度量单位。由于水势的绝对值不易测得，一般以同样温度和大气压下纯水的水势作为零点，其他溶液与纯水相比而测得其相对水势。植物组织的水势决定着其与外界环境之间水分交换，若植物组织的水势低于外液的渗透势（溶质势，即溶液的水势），组织吸水从而使得外液的浓度变大，比重增加；反之，若植物组织的水势高于外液的渗透 ...

植物细胞是一个渗透体系，当其处于高渗溶液时，细胞失水，原生质体积缩小，发生质壁分离现象。反之，如将已经发生质壁分离的细胞转至低渗溶液中，细胞会重新吸水，质壁分离复原。利用植物活细胞的质壁分离可以测定植物细胞的渗透势。植物细胞的渗透势主要取决于胞液的溶质浓度，因此又称溶质势。渗透势与植物水分代谢、生长及抗性等有密切关系。已知在干旱、盐渍等条件下，一些植物常在细胞内主动积累溶质，以降低其渗透势，增加吸 ...

1、称样品（>1mm风干土）10克左右，置于已知重量的称皿中；2、放入烘箱，在105-110℃（温度过高，有机质易碳化散逸）温度下烘至恒重（约 8 小时）；3、取出放干燥器（干燥器中的干燥剂氯化钙或变色硅酸要常更换）中冷却约20 分钟，立即称重；4、同上2、3重复烘三小时，取出放干燥器中，冷却，立即再称重（二次重复之差，不大于 3 毫克）；5、结果计算：（1）以风干土为基数的水分百 ...

有三种常用的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法：blue native（BN-PAGE），clear native（CN-PAGE），quantitative preparative native continuous（QPNC-PAGE）。在一个典型的native PAGE方法中，复合物被CN-PAGE或BN-PAGE分离。然后可以用其它分离方法如SDS-PAGE或等电聚焦做进一步分离。随后切割凝胶，蛋白复合物每一个部分都被分开。蛋白的每个条带可以消化后做肽链指纹图谱或重新测序。这样就可以提供一个蛋白复合物中单个蛋白的重要信息。

DEAE－葡聚糖介导的转染，其原理还不清楚，可能是通过内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核，此法只适合暂时转染实验，转染效率与DEAE-葡聚糖浓度以及细胞与 DNA/DEAE-葡聚糖混合液接触时间的长短很有关系，可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖（1g/L）作用较短时间（30分钟-1.5小时），又可用较低浓度（250g/L）的DEAE-葡聚糖作用较长时间（8小时）。 方法如下： （1）接种鼠L成纤维细 ...

脂质体（lipofectin regeant，LR）试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy， Propyl]-n， n，n-Trimethylammonium Chloride（DOTMA）和Dioleoyl photidye-thanolamine（DOPE）的混合物[1：1（w/w）]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。

核酸以磷酸钙－DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1%~5 %可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法。 1、配液 ...

学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入……

各种转染方法比较：DEAE－葡聚糖法、磷酸钙法、阳离子脂质体法、阳离子聚合物、病毒介导法、Biolistic颗粒传递法（基因枪粒子轰击法）、显微注射法、电穿孔法。

在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中，如以TMB为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以OPD为底物，则试剂盒提供OPD片剂或粉剂，临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37℃或室温反应15~30min。从理论上说，37℃30min才可以使HRP的底物催化反应完全，尽管在最初的10min内，绝大部分催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37℃下反应25~30min后，终止反应比色测定。

提取样品的总RNA后，一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。由于RNA容易形成二级结构，因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳，得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。

细胞中有大约30%的蛋白质是膜蛋白，不过人们现在还不是很清楚这些膜蛋白的原子结构。到目前为止，在PDB（Protein Data Bank）的结构数据库中只有不到1%的资料是膜蛋白的结构数据。这不是说膜蛋白的结构不重要，相反，膜受体蛋白非常重要，它们是大部分药物的作用靶点。但由于一直缺乏很好的膜蛋白大量可溶性表达技术，因此也就得不到足够的蛋白结晶体用于结构分析。即使是结构基因组学（文后小词典）这项旨在分析每一个蛋白家族结构的学科，也因为存在技术难题而没有将研究重点放在膜蛋白上。现在，经过传统结构生物学家和结构基因组学家的不懈努力，蛋白表达、溶解和结晶这一系列的技术瓶颈都得到了突破，并且已经出现了部分成果。

由于血液中的红细胞没有细胞核，用于基因表达分析时，往往是分析血液中白细胞的基因表达情况。因此首先需要把血液中的白细胞进行分离。下面方法是我们实验室摸索的适合基因芯片技术白细胞分离的过程。

用于基因芯片分析的细胞RNA的抽提:细胞培养结束后，若是贴壁细胞，可以用移液器吸去培养基，并加入3ml左右的PBS洗一次（需要注意的是从冰箱中取出的PBS缓冲液温度要尽量回复到室温，避免给细胞冷的刺激）。吸去PBS后，即可加入适量的Trizol试剂，Trizol的量一般是每10cm2的面积加1ml的Trizol；若是悬浮细胞，可以进行离心，吸去上层的培养液，加入适量的Trizol，一般是5-10×106细胞加1ml的Trizol。加入Trizol后，用移液器反复吹打细胞，使细胞充分裂解（见图1-图3）。判断Trizol加量是否合适的标准可以根据细胞溶解物的粘度来判断。在细胞刚溶解时，可以发现有丝状物出现，这是细胞的基因组DNA释放出来了，若Trizol量合适，吹打几次后，丝状物会消失，液体粘稠性下降；若Trizol量过少，丝状物往往一直存在，液体粘稠性大，可以继续补加Trizol。若Trizol的量过少，会导致抽提的RNA中有较多的基因组DNA污染。由于Trizol试剂中含有强烈的RNA酶抑制剂，因此细胞充分溶解在Trizol中后就不用担心RNA的降。

哺乳动物组织样品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提过程中降解，以及尽可能得到最高的RNA抽提效率。以下介绍我们实验室认为最符合以上两个要素的抽提方法。

（1）取3 g样品，加入10% 样品重的多聚聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），用液氮研磨成细粉状，将细粉分为每份约3 g，并贮藏于-80℃下。（2）在5O ml falcon管中加入2O ml提取缓冲液。提取液的组成为0.2 mol/L 脱水四硼酸钠（sodium tetriborate decahydrate）、30 mmol/L 乙二胺四乙酸（EDTA）、1% （W/V）十二烷基硫酸钠（SDS）、 ...

从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。

一、准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。二、操作步骤：1. 匀浆处理：a. 组织 将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b. 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积（即3.5cm直径的培养板）加1 ...

一、操作注意事项： 由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功，请仔细阅读下列注意事项，相信它能帮助您解决常见的问题。 归根究底，RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。RNA酶无处不在，在实验操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不当操作都有可能造成RNA酶污染，从而导致整个实验失败。因此，严格控制实验条件，避免任何可能的污染 ...