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如何提取高质量RNA?

科研中的“新星”技术——MicroRNA荧光定量PCR

众多文献报道，许多植物由于未能有效地分离纯化出其组织中的RNA， 而阻碍了其分子生物学方面的研究进展。比如Northern杂交分析，体外翻译分析或建cDNA文库，RT-PCR及差异显示分析等研究，都需要高质量的RNA。因此，提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。

众所周知，从土壤中提取DNA已非易事，而想从中再提取RNA可说是难上加难。DNA不容易提取是因为本身土壤中富集的材料就少，提取过程相对复杂，造成操作损失；而RNA不容易提取除了以上所提到的原因外，还有一个很关键的原因——无处不在的RNA酶，对RNA的稳定存在构成极大威胁。另外还有一点就是土壤中某些物质的微量残留都会影响到科研人员后期PCR反应。这就是目前国际国内市场中土壤RNA提取产品不多的原因。

在用血液标本进行表达谱芯片实验时，需要把血液中有核细胞的RNA提取出来；传统的提取RNA方法是把先把有核细胞从全血中分离出来，需要加白细胞分离液、离心等步骤，比较繁琐。目前有一些公司生产了相关试剂，可以从全血中直接提取RNA。我们比较了不同公司的产品后，认为北京百泰克生物公司生产的TRI pure LS Reagent用于全血有核细胞的RNA抽提效果较好，可以满足基因表达谱芯片的分析要求。一般1ml的全血可以得到10μg左右的total RNA，足够满足芯片分析的需要。

快速TA克隆的突破 T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。 目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种： 方法 1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara， 可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连 ...

山东大学荧光定量PCR对比实验结果

如何评判荧光定量试剂质量

百泰克undefinedSYBR real-time PCR premixture 进行动物组织样品的实时荧光定量PCR

qPCR中的P代表什么？Polymerase，聚合酶。如果qPCR少了聚合酶，没定量PCR还怎么做。下文就介绍了一种做法。

miRNA在细胞的发育、分化、增殖、凋亡，每个过程都有miRNA的调控，在许多人类肿瘤病例中，都发现miRNA表达异常，于是，miRNA表达谱分析成为miRNA研究中必不可少的一环。

高分辨率熔解（High-resolution melting，简称HRM）分析是一门新兴的技术。它仅仅通过PCR之后的熔解曲线分析，就能检测PCR片段的微小序列差异，从而应用在突变扫描、序列配对和基因分型等多个方面。

从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了，提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析，如何选择最适合的方法，成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。

随着研究的深入，已知miRNA的数量与日俱增，目前Sanger miRBase数据库中收录的人miRNA已达721条。在基因功能研究中，最有效的方法是阻止特定基因的功能，然后了解其后果。miRNA同样如此。

下面的文章介绍了选择成像系统的“四项基本原则”。有了这些原则，您在选择成像仪时自然成竹在胸，无往不胜。

使用EpochTM 微孔板分光光度计进行检测。和传统标准BCA方法（BCA工作缓冲液和蛋白质样品体积比为20:1）相比，该方法的蛋白检测灵敏度有明显的提高。相比与Mini-BCA分析方法，原位分析方法更加精确。

RNA的质量对于芯片实验的成败至关重要。现在大多数的生物芯片服务供应商除了接收客户提供的RNA样品之外，也提供帮客户从样本中提取RNA，从而进行芯片实验的服务。

本研究运用定量蛋白质组学的技术手段，首次发现了一系列与NAFLD发生发展密切相关的肝脏蛋白质群，包括参与脂肪酸氧化的酶，线粒体呼吸链蛋白和细胞骨架蛋白，从蛋白水平揭示了NAFLD发生发展的可能分子机制。

荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间，而其应用一直都没广泛展开，究其原因，无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期，尤其是08年以来，仪器和试剂是遍地开花，这也使科研人员均跃跃欲试，都想借此技术使自己的研究能突飞猛进，发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据有关统计，在 Medline 数据库中，用“Taqman” 或 ”real time PCR” 作为关键词检索，1996 年是19 篇，1999 年157 篇，到2003 年就高达2984 篇，2009年会是多少呢？

R&D Systems Proteme Profiler 96 蛋白芯片96包含一块96微孔板检测板，每个微孔都预先点有一系列捕获抗体构成的抗体芯片列。向微孔内加入实验样本后，样本中的目标蛋白与固定于微孔板上的捕获抗体结合。随后为检测被捕获的蛋白，使用生物素标记的混合检测抗体与HRP偶联的亲和素，或者是HRP偶联的泛抗磷酸酪氨酸抗体进行检测（夹心法）。化学发光底物被用来产生可检测的信号，最好使用化学发光检测成像系统检测微孔中芯片上每个斑点的光强度，每个斑点的光强度大小反应一种相关蛋白表达水平的高低。