许多真核生物的基因所包含的DNA,远非单个重组子所能容纳得了的,因此要把克隆扩展成叠连群,而这又需要高库容量且无大缺口的基因组文库。此法能否成功,还取决于对这些大的、非嵌合性的、并且序列未知的基因组5’和3’端的有效鉴别。许多技术已用于简化这一过程及避免克隆载体和克隆DNA之间的连接区,本文着重介绍了其中一种不失为较为简单便宜的单一位点PCR方案操作过程。
经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选,本文介绍的是在传统方法上进行改进后的方法,适用于铺平板和筛选未扩增的文库。菌落可转移到硝酸纤维滤膜或尼龙膜上。在某些情况下,还可以根据需要在筛选之前对文库进行扩增,扩增方法本文也作了介绍。
点杂交和狭线杂交技术用于在同一固相支持物上固定几种核酸样品,然后用合适的探针与已固定的样品杂交,并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出的信号强度,与已知浓度的标准品信号强度进行比较,确定待测样品中靶序列的量。现在的点杂交和狭线杂交一般用纯化的RNA样品。
根据本方案制备的酵母DNA可以用作PCR反应的模板。在E.coli和Saccharomyces cerevisiae中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取,并且可以用于转化E.coli。
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA包括用蛋白酶K消化细胞和组织,用高浓度甲酰胺分离DNA-蛋白质复合物,用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程,制备的基因组DNA很大,适于用高包装容量载体构建文库及通过脉冲凝胶电泳分析大片段DNA。
用缠绕法可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备DNA,主要步骤包括将DNA沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上,接着将沉淀的DNA缠绕到一个Shepherd氏钩上,再把缠在钩上的DNA从乙醇溶液中转出溶于所选择的液体缓冲液。
PFGE仪器有四种流行的设计,本文介绍其中的横向交变场和位电场凝胶电泳,它们都可用于分离大的DNA片段。
本文叙述了用甲酰胺和SDS/蛋白酶K从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA以及可被单一限制酶或双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备方法。因为在某些情况下,制备好的λ噬菌体DNA还必须经单一限制酶或双限制酶切割作用才可用于克隆。
中国科学家在新一期英国《自然·遗传学》杂志上报告说,他们成功克隆了一个可帮助水稻增产的关键基因,该基因能使水稻向秆壮穗大的理想株型发展,在高产育种中具有重要应用前景。
介绍对羟基肉桂酸(结晶体):范围、规范性引用文件、 分子式、结构式和相对分子量、试验方法、检验规则等。
近几年来,随着科技水平的不断发展,肉桂醛的应用范围越来越广泛,应用领域不断延伸,在香精香料、食品添加剂、医药化工及饲料等方面都有应用。本文着重论述肉桂醛在医药以及化工领域的应用。
美国研究人员表示,在一种蛋白复合物的引导下,变形虫和哺乳动物的免疫细胞就会朝着其“猎物”进发。加州大学圣迭戈分校的理查德·弗特尔领导的研究团队基于对盘基网柄菌的观察和分析得出了该结论。盘基网柄菌是一种简单的变形虫,由于拥有人类白细胞的很多特征,可作为模型基因系统进行研究。这种变形虫找到“猎物”的方式同哺乳动物的免疫细胞找到“猎物”的方式一样,但其基因系统更简单、并且很容易在实验室中培育。
约翰斯霍普金斯大学的科学家们使用一种他们研发的方法,在将人体中一种细胞移动到精确位点时,能够不时的进行观察。这种方法可以了解一种蛋白质为何和如何在一个位置能进行信号传递和表达增加,而同样的蛋白质在另一地点则死亡。他们的研究发表在2月14日《Nature Methods》上,用一种化学工具将细胞内的蛋白质移动到外周一个称为质膜的地方。
梭菌(Clostridium)是一类与人类关系十分密切的革兰氏阳性细菌。理解梭菌适应环境胁迫的机制,无论是对在医学上控制梭菌,还是在工业上利用梭菌,都具有十分重要的意义。
帮助将抑制因子tRNA交付到核糖体的翻译因子eIF2利用GTP水解的能量来发挥功能。另一个因子eIF5已知在当eIF2与抑制因子tRNA和核糖体结合时会加快eIF2的GTP酶活性。在这项研究中,研究人员确定了eIF5的另外两个作用。
乙二醛化RNA琼脂糖凝胶电泳和含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳均可按大小分离RNA。RNA样品经甲酰胺处理以及经含有甲醛的凝胶电泳分离可能会发生变性,但因为变性RNA比乙二醛电泳后的RNA在Northern分析过程中更易从凝胶上分离,因此甲醛凝胶电泳仍然是分离RNA的一个普遍采用的方法。然而,在甲醛凝胶上的RNA条带总是模糊不清,不能与乙二醛琼脂凝胶电泳的清晰条带相媲美。
克隆PCR扩增DNA片段至质粒或噬粒载体这一过程看似容易,实际操作较难。
多数情况下,为检测特定的靶mRNA,需先将RNA通过琼脂糖电泳分离后,再从胶上转移到二维支持物上(通常为尼龙膜),再与特异的标记探针杂交。本文主要介绍RNA在上行的缓冲液作用下从琼脂糖胶上转移至膜性支持物,然后采用不同方法将RNA固定在膜上进行杂交。
根据本方案制备的酵母DNA可以用作PCR反应的模板。在E.coli和Saccharomyces cerevisiae中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取,并且可以用于转化E.coli。
本文所述的是RNA提取的一步法的改进,可从少量组织和细胞中同时回收DNA、RNA和蛋白质。这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞,加入氯仿产生第二相,DNA和蛋白质在有机相中被抽提,RNA则被留在上层水相中。用乙醇和异丙醇连续沉淀可分别分离有机相中的DNA和蛋白质。