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1.Vectorpedia： 输入质粒骨架，直接查询，非常方便;http://www.addgene.org/pgvec1?f=v&cmd=listvecinfo2. google检索式子：质粒名 ＋ map 质粒名 ＋sequence ＋filetype:txt or filetype:pdf或者：进入google，点击"图片搜索"，直接查找图谱.3.google scholar: http: ...

DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3’-OH末端上进行的。由于2’，3’-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3’-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。 本实验根据此原理，将待测DNA片段插入单链噬菌体M13载体，并用合成的寡聚核苷酸引物与该载体上插入待测片段的上游顺序退火，随后在T7DNA聚合酶催化下进行延伸反应。实际操作中同时进行， ...

前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，谈一下质粒重组的一些个人经验。1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHIHindIII提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。 ...

物种的遗传多样性在本质上是DNA 一级序列的多样性。近年来，随着DNA 测序技术的迅速发展和日益普及，DNA 测序在遗传多样性的研究中正在起着越来越大的作用。本章将介绍目前在遗传多样性研究中常用的一种手动和一种全自动双链DNA 测序方法。1 DNA 模板的制备在遗传多样性的研究中，由于样本量一般都较庞大，因而DNA 测序的速度就成了很关键的因素。因此，这类研究中常常直接测定纯化的PCR 双链产物而 ...

1）取10ul待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL1.0%凝胶)2) 凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号 拍照记录电泳结果(拍照时 凝胶旁放一尺子)。3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一)A．将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L HCl溶液中15min，使DNA脱嘌呤。B．用蒸馏水短暂洗凝胶2次。C．将凝胶浸没入30mL变性液中30m ...

一 基因组酶切和电泳在200 μl 微量离心管中加入：25 μl DNA样品(约10μg)，3μl 限制性内切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相应的10×buffer，补水到50μl。然后加一滴矿物油覆盖 稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶切完后，取5μl 酶切DNA样品于0.8%的琼脂糖凝胶上检测酶是否充分。如果酶切充分，灌制0.8%的agrose胶，加入上样buffer后，在25 ...

①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min 离心 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温 不能低于15 ℃ 否则CTAB 会沉淀) 10 000g 离心15 min。③取上清液加入1/ 10 倍体积缓冲液D 于室温下放置15 min 再用等体积氯仿- 异戊醇( ...

【实验目的】 1．掌握DNA重组技术的基本原理和基本方法 2．熟悉质粒DNA的小量制备及酶切鉴定方法 【实验原理】 1．DNA重组技术 重组DNA(RecombinantDNA)技术是遗传工程的核心技术，也是人类在基因和DNA分子水平进行操作的技术。它包括以下几个步骤： 1）重组DNA分子的构建：即将目的基因（DNA或cDNA片段）与载体DNA重组，应用TA克隆方法将PCR扩增产物快速 ...

NCBI的“electronic PCR（e-PCR）”工具是UniSTS资源库的一部分，可以用来寻找一段目的DNA片段中的STS标记物。UniSTS (http://www.ncbi.nih.gov/genome/sts/ ) 能提供所有有关STS标记物的资料，包括引物序列、产物大小、作图信息和别名。与之相链接的其他NCBI资源如Entrez、LocusLink 和MapViewer 也同样提供 ...

分子杂交的概念及基本原理一、分子杂交的概念： 分子杂交（molecular hybridization）指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过退火处理，形成异质双链的过程。 利用这一原理，就可以使用已知序列的单链核酸片段作为探针，去查找各种不同来源的基因组DNA分子中的同源基因或同源序列。 二、分子杂交基本原理： （一）DNA变性 ： DNA变性是指 ...

EB是我们从事生命科学尤其是分子生物学经常要接触的致癌性物质且不好处理.现提供如下方法供参考.特别是刚走进实验室未生育的新同行一定得学会保护自己呵否则还涉及到下一代问题 实验室中经常有EB被打翻或EB废弃物的处理问题，如何做到标准处理？1严禁随便丢弃。因为EB是强致癌性，而且易挥发，挥发至空气中，危害很大。2废EB溶液的处理方法(1)对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理： a.将EB ...

农杆菌介导ACC脱氨酶基因转化新疆哈密瓜的研究李晓荣1廖康2宫江平3赵长生4王惠41新疆农科院核生所，乌鲁木齐备8300002新疆农业大学园艺学院，乌鲁木齐备8300003新疆农科院园艺所，乌鲁木齐备8300004中国科学院新疆分院生态与地理研究所，乌鲁木齐备830000关键词：哈密瓜ACC脱氨酶基因乙烯新疆素有“瓜果之乡”的美 ...

・CaCl2感受态细胞的制备的实验步骤 1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）； 2．取 1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）； 3．将 0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷； 以下步骤需在超净工作台和冰上操作 4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml ...

DNA以核蛋白形式存在于细胞核中，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。蛋白酶K及链霉蛋白酶E的应用使这两个原则得到了保证。 蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA分子分离，EDTA抑制细胞中DNase活 ...

细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol／L氯化钠溶液中的溶解度相差很大，核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度，脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用0.14mol／L氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解作用。SDS(十二烷基硫酸 ...

EST电子延伸系统主要包括以下几个部分组成：预处理(pre-processing)、聚类(clustering)、拼接(assembly)和分析(analysis)。一、预处理Ø用crossmatch程序，去除载体序列（载体序列库：ftp://ncbi.nlm.nih.gov/repository/vector）。 处理时应注意的问题： 1、如果是用自已 ...

（1）诊断技术分类 1)根据目的基因是否被放大分类可分为杂交法和扩增法。前者被检测的目的基因不被放大，如分支链DNA技术，但用杂交法可以进一步检测经过放大了的基因片段，如PCR产物杂交分析；后者包括PCR及连接酶链反应，Qβ复制酶系统等。 2)根据被测基因的核酸类型分类①在杂交法中，Southern印迹用于检测DNA；Northern印迹用于检测RNA；斑点印迹或称 ...

ESTs（Expressed Sequence tags）是从已建好的cDNA库中随机取出一个克隆，从5’末端或3’末端对插入的cDNA进行一轮单向自动测序，所获得的约60-500bp的一段cDNA序列。ESTs的产生：从特定的状态的组织或细胞中分离mRNA，将mRNA逆转录成cDNA亚克隆到载体中，利用载体上的引物对插入片段测序测序出来的片段结果即称为ESTs(expressed sequenc ...

来自加拿大多伦多大学，多伦多成瘾与心理卫生研究中心，以及瑞士，澳大利亚的研究者在最新一期的Nature Genetics发表研究成果，该研究文章在遗传学方面提出了新的问题，质疑DNA作为唯一遗传物质的学说。一直以来，经典的遗传学说认为DNA是遗传信息的载体，人类所有的信息都存在于这个小小的染色体上。从父母亲那遗传来的形状取决于DNA序列。文章作者Art Petronis教授否定了这一论断，他认为D ...

1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜； 2．取 2ml过夜培养物转接于200ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养至OD600=0.6（约2.5-3小时）；3．将菌液迅速置于冰上。以下步骤务必在超净工作台和冰上操作 4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟； 5．4℃下3000g冷冻离心5分钟； 6．弃去 ...