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材料与试剂 1. 99.5%乙醇 2. 100%乙酸 3. 亚硫酸氢钠 4. 硝酸银 5. 甲醛溶液（37%） 6. 碳酸钠 7. 硫代硫酸钠 ...

材料和试剂 1. 6 cm 细胞培养皿（Fiosher）。 2. 人类或小鼠细胞系，细胞试验所需要的生长培养基。 3. 凝聚胺。 4. 合适的选择性抗生素。 仪器 1. 细胞培养箱 步骤 1. 慢病毒感染方法应该根据不同的细胞系和以细胞为基础的试验来进行优 ...

原理 电泳迁移率分析，也可称作迁移电泳，凝胶电泳分析，凝胶迁移率分析，条带移动分析或者凝胶阻滞分析，这种方法常用来研究蛋白质-DNA，蛋白质-RNA的相互作用，对照泳道（不含蛋白质的DNA/RNA探针）将出现单一的条带。如果蛋白质与片段结合，形成大的复合物，因此在凝胶上迁移的速度慢从来迁移率减低。 材料和试剂 1. DTT（Promega） ...

无水的单个核苷酸分子量为： A= 313.21 T= 304.2 C= 289.18 G=329.21 粗略估计，通常四个碱基的平均分子量，一个DNA 核苷酸（在盐溶液中）的平均质量为325道尔顿。 MW of a single-strand DNA molecule= （#of bp）× （325 ...

原理 通常，我们可以利用烟草的瞬时表达系统来观察感兴趣蛋白的亚细胞定位（通过与绿色荧光蛋白构成融合蛋白）。同时，还可以检测蛋白的表达量。这一个过程是通过农杆菌作为一个工具将目的基因整合到到烟草的细胞内的。 材料与试剂 1. 携带表达载体的农杆菌菌株（通常表达载体由35S启动子驱动） 2. 2-4周的烟草植株 3. LB培养基 4. ...

一、材料与试剂 1. 20%多聚甲醛 2. Na2EGTA 3. 三盐酸亚精胺 4. 亚精胺 5. 1，4-哌嗪二乙烷磺酸钠pH7.4 6. β-巯基乙醇 7. 油红 8. 异丙醇 9. 二硫苏糖醇 10. 0.2 μM 过滤器 11. ...

原理 BCR蛋白分析是一种对样品中总蛋白进行量化的分析方法，原理是在碱性溶液中蛋白质可以将Cu2+还原成Cu1+（双缩脲反应），从而出现明显的紫色，铜离子被还原主要是蛋白质分子中半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸，色氨酸四种氨基酸的作用，然而，与Coomassie燃料结合反应不同的是，一般的多肽键都能形成颜色，从而减少了由于蛋白质不同的变异性。 与Bradford分析实验相比较，BCA实验分析更加客观 ...

一、遵守实验纪律，按时到达实验室，不得迟到或早退。实验中途因故需外出时应向任课教师请假。 二、进入实验室之前要换好白大衣及拖鞋。 三、保持实验室安静，不许在实验室内大声喧哗及随意走动。 四、必须严肃认真地进行实验。实验期间不得进行任何与实验无关的活动。 五、实验室内各组仪器及器材由各组自已使用，不得互相调换。要爱护仪器、标本和设备。如遇仪器损坏或不灵，应及时报告任课教师，以便修理或更换， ...

PCR过程中如果没有找到最佳的扩增条件将会导致产生许多不确定的、不需要的产物，有时甚至没有目的产物；而在另一个极端，又可能没有扩增到任何产物。这时改变已知对引物－模板的忠实性和引物延伸有影响的诸多参数中的一两个，将会达到优化扩增的目的。其中最主要的优化变量包括 Mg2＋浓度、缓冲液pH值和循环条件，在循环条件中又以退火温度最为重要。 1. 降落PCR 降落PCR代表了一 ...

一、污染原因 1. 标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 2. PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水 及其它溶 ...

一、增加PCR的特异性 1. primers design 这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件 （1）足够长，18-24 bp，以保证特异性。当然不是说越长越好，太长的引物同样会降低特异性，并且降低产量。 （2） GC% 40%-60%。 （3）5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性。 （4） 避免3'端G ...

1. 问题：RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。 可能原因： （1）RNA被降解 建议解决方法： 在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA； 在将组织从动物体取出后立刻处理在100%甲酰胺中储存RNA； 如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0，否则抑制剂或释放所有结合的RNase。而且，在&g ...

1、PCR产物的电泳检测时间？ 一般为48 h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48 h后带型不规则甚致消失。 2、假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色 ...

一、原理 G显带机制有许多学说，但尚无定论。目前比较倾向于多因素决定论，即带型的形成主要取决于DNA、核酸结合蛋白及染料三者的相互作用，主要是指DNA的碱基组成以其与结合蛋白形成的特定结构对染料分子的作用。Summer（1974）的实验表明，DNA分子的螺旋及折叠非组蛋白蛋白质的分布在染色体上呈区域性差异，这些差异导致二硫键与硫氢键分布不同，深染区由许多二硫键交联，因为它易与染料结合；而浅染区则 ...

一、原理 染色体标本经强碱（NaOH或Ba(OH)2）热处理后，在着丝粒周围区域和异染色质区经Giemsa染成深色，而染色体两臂的常染色质部分仅有浅淡轮廓。这是一种染色体上不显示带纹的特殊显带法，主要显示着丝粒区和异染色质区的变化。 这种技术称为着丝粒区异染色质法，故简称C带。常用的为CBG法（C-band by Barium hydroxide using Giemsa），即用Ba(OH)2 ...

一、原理 R显带的机理目前并不完全了解，在高温（80~90℃）的处理下诱发了染色体蛋白质的变化。Comings（1978）认为在高温下G带的中AT丰富区变性而显出特别亲染，但在R带中正恰相反，AT丰富区却并不显出亲染作用，故而显出浅染带区，电镜的观察进一步表明了这些带和间带区域的差异主要在于电子密度的不同，R带所显示之深浅带纹区域正同G带之带纹区域相反，即G带深染区R带为浅染区，反之亦然。 由 ...

一、原理 Q显带技术早在1970年为Caspersson及其同事们首先用荧光染料染制染色体标本，在荧光显微镜下这些染色体呈现暗亮不同的条纹，为此有些学者（Coming等，1975，1978；Miller等，1973）认为主要是由于染色体中DNA内的AT丰富区对喹吖因荧光有增强作用，故显出亮带；反之，其DNA内CG丰富区对喹吖因荧光有减弱作用，故而出现暗带。 此外亦有一些学者（Pachman和R ...

一、原理 一般常作的G带技术在人类染色体的单倍体中仅能观察到320条带纹，这对于一些染色体细微结构异常的识别是不够的。近年来，用氨甲蝶呤等药物使细胞同步化，另加某些药物如胸腺嘧啶核苷、BrdU等阻止染色体收缩，并用有丝分裂抑制剂秋水仙素或秋水酰胺低浓度短时间处理，结果就能得大量晚前期、前中期和早中期的有丝分裂图象。这样在人类染色体的单倍体带纹数可增加到400条、550条和850条，甚至可达120 ...

1. Q：要做胃粘膜组织的DNA含量及倍体检查，但取材后要等几个星期才会做流式细胞术检查，请问：胃组织要怎样保存好呢？用低温保存，还是用乙醇固定？或者固定后再低温下保存？ A：我做过乳腺细胞的DNA含量测定，取得组织以后，先处理成单细胞悬液，然后再加70%冰乙醇固定，要保证冰乙醇的最终浓度为50%，这样固定的细胞悬液可以至少保存12小时，最多可保存一个月，上机检测前再加PI综合染液 ...

基因转染是将具生物功能的核酸（RNA或DNA）转移或运送到细胞内，并使核酸在细胞内维持其生物功能的核酸转移技术。转染技术的目的是主要是研究真核基因的表达和调控，目前的方法包括磷酸钙共沉淀法，电穿孔法以及同DEAE-dextran或阳离子脂质体试剂形成复合物法。 在这些不同的方法中，DNA转导的效率，转导的机制，可重复性及使用的方便性都存在差异。而且，有效的DNA转导会伴随某些毒性或细胞抑制，其 ...