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实验性细胞移植:临床前及临床研究

人们曾以极大的努力来开展细胞移植以修复心脏和血管组织,但仍有许多问题尚待解答。还需要实验研究方面的进一步实验,需要仔细评估临床工作。本单元交流了这两方面的探讨。 (一)K Pinkornell报告从切下的皮下脂肪选择干细胞。细胞通过培养方法选择,可以在标准条件下生长。比较直接分离出来后的基线状态和培养30天之后的基因表达。基因表达分析集中于肌节(Sarcomeric)基因和与心脏有关的转录因子。分 ...

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组织培养绪论和基本理论知识

一、组织培养基本概念组织培养(Tissue Culture)指的是从体内取出组织摹拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下,使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。细胞培养( Cell Culture)用的也是同样方法,培养物是单个细胞或细胞群。在培养组织过程中,现代的培养技术尚不能在体外长期维持组织的结构和机能长期不变,因此在进行培养时,不论培养物是组织或细胞都要生活在人工环境中。生存环 ...

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自行配制DMEM的方法

这里是一份GIBCO的低糖DMEM粉剂配制说明(普通高糖的DMEM培养基配法是一样的): TO PREPARE undefinedLIQUID 1. Measrue out 5% less distilled water than desired total volume of medium using a mixing container that is as close to the final vol ...

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细胞因子检测方法现状

关键词:细胞因子 目前,细胞因子已广泛应用于临床的已有EPO、IFN-α、G-CSF、GM-CSF以及试用于临床的白细胞介素等。为了研究细胞因子在生理系统的作用以及了解细胞因子产品用于临床治疗的效果,进行细胞因子的检测就必不可少,而且用于临床诊断的细胞因子分析方法必须适用于常规操作。细胞因子的检测尚未在临床诊断上广泛开展,已知目前采用的细胞因子检测方法均不完善,且不同的检测方法所得的结果差异较 ...

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组织培养细胞生物学

细胞在体外培养后,如一切条件适宜,便可生存和进行生命活动,如移动等,但最主要的是生长和增殖。生长和增殖并非同一概念,细胞生长指的是:细胞体积增大,而细胞增殖是细胞数量增多。体外培养细胞来源于体内,其基本细胞生物学规律和体内相同。但随生活环境的改变,很多方面如形态结构和增殖规律等,与体内时又有所别。这里所叙述的是“体外培养细胞生物学”,即有关细胞在体外培养条件下的细胞生物学行为。它具有着本身的特点和 ...

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肿瘤细胞的标记及其活体荧光成像

金鹰 邢达(华南师范大学激光生命科学广东省重点实验室 广州510631)摘要 以绿色荧光蛋白( GFP) 作为标记基因转入人类肺癌细胞系(ASTC2a21) 经800 mg/ L G418 筛选 获得5 株高表达细胞系. 利用流式细胞仪对GFP 表达的稳定性进行了初步研究 结果表明本实验中有些细胞株间GFP 表达稳定性有显著差异( P 成瘤后用氩离子激光器产生的488 nm 蓝光经扩束后直接激 ...

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细胞学技术的一般环节简介

一、纺锤体阻断剂(Spindle inhibitor) 在有丝分裂过程中,随着纺锤丝的形成,染色体被牵引到一起难以观察其形态。纺锤体的形成在于细胞质和纺锤体成分的粘度之间的平衡,因此,改变细胞质的粘度,即可破坏纺锤体形成,从而使得染色体均匀散开,且染色体缢痕区更为清楚。 在培养中使用的纺锤体阻断剂为秋水仙素,在终止培养前加入适量秋水仙素,使正在分裂的细胞停留在中期,以获得大量分裂相 ...

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细胞融合技术的应用研究进展

(1.山西农业大学食品科学与工程学院,山西太谷 030801;2.山西农业大学太原畜牧兽医学院,山西太原 030001) 摘 要: 细胞融合技术已在农业、工业、医药等领域取得了开创性的研究成果,应用领域不断扩大。该技术不仅为核质关系、基因定位、基因调控、遗传互补、细胞免疫、疾病发生、膜蛋白动力学等理论领域的研究提供了有力的手段,而且被广泛应用于免疫学、遗传学、发育生物学,在实际应用中特别是在单 ...

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细胞学技术概述及注意事项

细胞学检查包括有细胞的涂片与染色技术,其来源先于组织切片技术,目前是较为常用的病理检查方法之一。它所运用的范围也很广泛,如女性生殖系统、食管、胃、肺、浆膜腔积液、泌尿管道、鼻咽部等部位的脱落癌细胞,以及胸、腹腔的肿块、淋巴结、乳腺、和其它组织器官的细胞学诊断。 标本采集注意事项:: 1、要在较为准确病变的部位采集病变标本。 2、标本应及时处理,固定。以防止细胞自溶腐败。 3、避免异物掺入标本,如 ...

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[激光显微细胞分离技术]

在基础医学研究中涉及越来越多的如某一疾病状态组织中,多种基因或遗传变化,区别发展中的组织细胞群以及疾病状态组织细胞,将有助于了解疾病发生的分子机制。因此,在下一代的分子分析方法将需要进入微观世界及自动化程度高。对某一特殊个体的切片进行遗传指纹图谱鉴定,将有助于诊断及指导治疗。 然而,即使是最经典、可靠的检测方法,也不可避免混杂多种状态细胞中DNA、RNA或蛋白质分子的干扰,因此,需要发展组 ...

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大规模培养技术应用简介

通过大规模体外培养技术培养哺乳类动物细胞是生产生物制品的有效方法。20世界60-70年代,就已创立了可用于大规模培养动物细胞的微载体培养系统和中空纤维细胞培养技术。近十数年来,由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增,以传统的生物化学技术从动物组织获取生物制品已远远不能满足这一需求。随着细胞培养的原理与方法日臻完善,动物细胞大规模培养技术趋于成熟。 所谓动物细 ...

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大规模培养技术的操作方式

深层培养可分为:分批式、流加式、半连续式、连续式、连续式和灌注式五种。 一、分批式培养(batch culture) 是细胞规模培养发展进程中较早期采用的方式,也是其它操作方式的基础。该方式采用机械搅拌式生物反应器,将细胞扩大培养后,一次性转入生物反应器内进行培养,在培养过程中其体积不变,不添加其它成分,待细胞增长和产物形成积累到适当的时间,一次性收获细胞、产物、培养基的操作方式。 该方式的特 ...

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细胞凋亡检测方法

生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。 一、细胞凋亡的形态学检测   根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。   1 光学显微镜和倒置显微镜   (1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。 贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。   (2) 染色 ...

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电子显微镜[electron microscope]

(一)、透射电子显微镜1、基本原理在光学显微镜下无法看清小于0.2µm的细微结构,这些结构称为亚显微结构(submicroscopic structures)或超微结构(ultramicroscopic structures;ultrastructures)。要想看清这些结构,就必须选择波长更短的光源,以提高显微镜的分辨率。1932年Ruska发明了以电子束为光源的透射电子显微镜(transmis ...

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联会复合体的染色与观察

实验十二 联会复合体的染色与观察Mose(1956) 最早在研究精喇姑精母细胞减数分裂前期的超微结构时发现联会复合体(synaptonemal complex S.C),1977年他又证明使用光学显微镜可以检查联会复合体。其后发展了许多适用于光学显微镜检查用的S.C染色法。依靠光学显微镜显示联会复合体的技术,不仅对于联会复合体的结构和功能的研究有用,而且在临床细胞遗传学中对染色体异常、遗传性疾病的 ...

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杂交瘤技术(实验原理、用品、方法)

实验十一 杂交瘤技术杂交瘤技术是1975年Kohler和Milstein用于制备单克隆抗体而创建的一项重要技术,被誉为“免疫学上的一次革命”。此技术被广泛用于各种单克隆抗体的制备。抗体是由B淋巴细胞分泌的,一个B淋巴细胞只能分泌一种抗体。把B淋巴细胞和骨髓细胞融合,即可形成在体外长期存活并分泌的杂交瘤细胞,如果把单个杂交瘤细胞克隆化,扩增传代,其分泌的抗体即为高度纯一的单克隆抗体。单克隆抗体具有高 ...

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动物细胞微丝束的光学显微镜观察

实验十 动物细胞微丝束的光学显微镜观察细胞骨架(cytoskeleton)是指真核细胞胞质中错综复杂的纤维状网络结构,主要包括微管(microtubule,MT,20~25 nm)和纤丝(filament)两大类;另外,胞质中还散布着一些3~6 nm的细小纤维。按纤维的直径、组成成分以及组装结构的不同,纤丝又可分为微丝(microfilament,MF)、中间丝(intermediate fila ...

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腹腔巨噬细胞吞噬功能检测方法

实验九 腹腔巨噬细胞吞噬功能检测方法在机体的免疫过程中,巨噬细胞(MF)承担着噬菌、杀菌、清除机体内被损伤和衰老的细胞,以及传递抗原信息;MF将捕获的抗原进行加工处理后,把降解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。MF又是天然杀伤细胞(NK细胞)的激活剂,且对B淋巴细胞的激活、增殖和分化具有调节作用。实 验 目 的掌握巨噬细胞(MF)体外吞噬异物能力的测定方法,观察机体的非特异性免疫现象。实 验 原 理 ...

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细胞凝集反应

实验八 细胞凝集反应细胞质膜是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构,蛋白质和脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白和糖脂分子,糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被(又称为糖萼)。许多研究结果表明:细胞间的分子识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被(分枝状寡糖链)有关。凝集素能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”,从而达到细胞凝集的效果。实 ...

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叶绿体的分离与荧光观察

实验七 叶绿体的分离与荧光观察叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器,光合作用就是在叶绿体中进行的 由于具有这一重要功能,所以叶绿体一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器,利用低速离心即可分离集中进行各种研究。实 验 目 的1. 通过植物细胞叶绿体的分离 了解细胞器分离的一般原理和方法。2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光 并熟悉荧光显微镜的使用方 ...

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